張微，張冰，陳旭央，胡莉蔓，施冰玲

（樂清市人民醫(yī)院，浙江 樂清 325600）

血清Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度發(fā)作患兒中的表達及意義

張微，張冰，陳旭央，胡莉蔓，施冰玲

（樂清市人民醫(yī)院，浙江 樂清 325600）

目的 探討凋亡因子Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度發(fā)作患兒中的表達及意義。 方法 50例哮喘患兒分別在哮喘急性重度發(fā)作期、緩解期采集靜脈血，酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測血清Bcl-w和Bid蛋白的水平。 結果 哮喘組急性期血清Bcl-w和Bid的水平分別為（57.14±2.23）ng/mL和（78.00±2.13）ng/mL，顯著高于緩解期（40.48±1.66）ng/mL和（57.42±2.01）ng/mL（均P<0.01）；兩指標呈直線正相關（r=0.32，P＜0.01）。 結論 哮喘兒童急性期血清Bcl-w和Bid的水平升高，緩解期下降，共同起著保持凋亡動態(tài)平衡的作用。

哮喘；凋亡；發(fā)病機制；Bcl-w；Bid

很多研究證實，凋亡因子在癌癥的發(fā)病機制中起著非常重要的作用[1-2]。最近研究卻發(fā)現(xiàn)，凋亡因子參與了支氣管哮喘（以下簡稱“哮喘”）的發(fā)病機制，但不同的因子表達水平不同[3]?？沟蛲龅鞍譈cl-w和Bid都是Bcl-2家族成員，分別具有抑凋亡或促凋亡的作用，它們與哮喘的關系則鮮見報道。本文通過觀察哮喘患兒血清Bcl-w和Bid的表達，探討它們在哮喘發(fā)病機制中的作用，為哮喘的靶向治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年10月~2015年10月本院50例兒童哮喘患者，符合哮喘急性重度發(fā)作的診斷標準，急性期是指突然發(fā)生喘息、咳嗽、氣促、胸悶等癥狀，或原有癥狀急劇加重；緩解期指經過治療或未經治療，癥狀、體征消失，肺功能恢復到急性發(fā)作前水平，并維持3個月以上[4]。其中男30例，女20例，年齡3~5歲，平均（4.2±0.7）歲。50例患兒每天接受霧化吸入布地奈德溶液（1mg/次，每天2次）和博利康尼溶液（2.5mg/次，每天2次），靜脈使用甲基強的松龍[1~2mg/（kg·次），2次/d]及孟魯司特[（4mg/d，1次/d]等綜合治療。

1.2 方法 分別留取哮喘急性發(fā)作期及緩解期靜脈血各2mL，靜置2小時，3000轉/min離心取血清，-80℃低溫冰箱保存，留作一次性檢測。Bcl-w和Bid抗體ELISA試劑盒均購自上海研吉生物技術有限公司 （生產批號分別為201508和201512），ELISA法檢測血清Bcl-w和Bid的表達。按照說明書操作，具體步驟如下∶標本和96孔酶標板平衡至室溫，設置標準孔和樣本孔，各孔加不同濃度的標準品和樣本各50mL，加辣根過氧化物酶標記的抗體100μL，37℃水浴1小時，加洗滌液重復洗板5次，加入底物A、B各50μL 37℃避光水浴15分鐘，加終止液，450nm波長處測定各孔的吸光度值。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)采用（）表示，哮喘組治療前后比較采用配對資料t檢驗，并采用直線相關分析法分析。

2 結果

2.1 哮喘發(fā)作不同時期Bcl-w和Bid的表達 哮喘急性期血清Bcl-w和Bid的濃度顯著高于哮喘緩解期（P<0.01），詳見表1。

表1 血清Bcl-w和Bid的水平哮喘急性期和緩解期（，ng/mL）

表1 血清Bcl-w和Bid的水平哮喘急性期和緩解期（，ng/mL）

與急性期比較**P＜0.01

時間 n Bcl-w Bid急性期 50 57.14±2.23 78.00±2.13緩解期 50 40.48±1.66**57.42±2.01**

2.2 血清Bcl-w與Bid表達的相關性 血清Bcl-w與Bid蛋白的水平之間呈直線正相關（r=0.32，P＜0.01）。

3 討論

目前已發(fā)現(xiàn)Bcl-2家族成員超過25個，均具有不同的生理功能，處于動態(tài)平衡中，分別為Bcl-w和Bid等。Bid是一種促凋亡蛋白，通過與Bcl-2蛋白家族其它成員相互作用，在朊酶類介導的細胞凋亡中起著重要作用，是朊酶類凋亡途經的標志物。最近研究發(fā)現(xiàn)它不僅僅是一個細胞殺傷分子，而且是有絲分裂的檢查點，起著維護基因穩(wěn)定的作用，被Fas/TNF-R1/Caspase 8信號途徑激活[5]；Bid還可能參與核苷酸結合和寡聚化結構域的天然免疫過程[6]。Bcl-w則具有抑制細胞凋亡的功能，也是通過與家族蛋白及其他相關蛋白等發(fā)揮著復雜的抗凋亡功能[7]。

以往的研究發(fā)現(xiàn)，Bcl-2家族成員參與了哮喘的發(fā)病機制。哮喘小鼠Bcl-xL的基因表達增高，布地奈德能下調它的表達[8]。在哮喘大鼠氣道重塑模型的肺組織中，Bcl-2、Bax蛋白含量明顯增加，經氨茶堿治療后它們的表達水平進一步升高[9]。也有研究發(fā)現(xiàn)，哮喘小鼠肺組織Bcl-2表達升高，而Bax表達卻下降[10]。上述的研究提示不同的凋亡因子在不同的組織中，其基因或蛋白的表達可能不同。

本文發(fā)現(xiàn)，哮喘組急性期血清Bcl-w和Bid水平會升高，并在緩解期下降，提示哮喘急性期，血清中凋亡因子發(fā)生了改變，促進凋亡作用和抑制凋亡作用的因子都得到了提升。在緩解期，凋亡因子隨著哮喘炎癥的減輕而向正常水平恢復，促凋亡因子和抑制凋亡因子的表達水平隨著疾病的演變保持著凋亡的動態(tài)平衡。通過相關性分析，血清Bcl-w和Bid的表達水平存在直線正相關，表明促凋亡因子和抑制凋亡因子之間相互聯(lián)系、相互影響，在凋亡的通路上共同起作用。

綜上所述，哮喘兒童急性期血清Bcl-w和Bid蛋白的水平升高，緩解期下降，共同起著保持凋亡動態(tài)平衡的作用。

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溫州市醫(yī)藥衛(wèi)生科學研究項目計劃（2013B68）