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痰熱清對產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌的體外抑制作用研究

宋遠(yuǎn)瑛

(湖北中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院 中醫(yī)內(nèi)科,湖北 武漢430065)

呼吸道感染是臨床常見疾病，致病菌包括肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌(Kpn)等[1]。近年來，關(guān)于Kpn導(dǎo)致的院內(nèi)感染的報(bào)道越來越多，β-內(nèi)酰胺酶類廣譜抗生素在臨床的廣泛應(yīng)用使Kpn的耐藥也在增加，會使Kpn產(chǎn)生ESBLs，限制了青霉素及頭孢類抗生素的臨床應(yīng)用，使病情遷延不愈，并使患者的治療成本增加，因而尋找抗產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的有效方案，臨床意義重大。而隨著對祖國醫(yī)學(xué)的研究逐步深入，在臨床治療上有許多優(yōu)勢等待發(fā)現(xiàn)。痰熱清為中藥制劑，有清熱解毒之效，使患者的機(jī)體免疫力得到提高，在呼吸道感染的治療上有著很好的效果[2，3]。本次研究中，根據(jù)CLSI(美國臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化機(jī)構(gòu))介紹使用的肉湯稀釋法，在體外對產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌行抑菌試驗(yàn)，觀察單用痰熱清及特治星(哌拉西林/他唑巴坦)聯(lián)合痰熱清兩者的抑制效果，予以報(bào)道。

1資料和方法

1.1一般資料

送檢標(biāo)本來源于在2014年1月-2014年8月期間，取自我院患者送至檢驗(yàn)科進(jìn)行檢驗(yàn)的痰標(biāo)本。分離出產(chǎn)ESBLS肺炎克雷伯菌株，質(zhì)控菌購買自上海復(fù)祥生物公司，為Kpn ATCC 700603；特治星注射液購買自美國惠氏制藥有限公司(批準(zhǔn)文號 H20030315，規(guī)格：哌拉西林4 000 mg與三唑巴坦500 mg)；痰熱清購買自上海凱寶藥業(yè)公司(國藥準(zhǔn)字Z20030054，規(guī)格：每支裝10 ml)；BPX-162型電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海博訊實(shí)業(yè)公司)；生物安全柜(上海中庸檢驗(yàn)設(shè)備公司)；Vitek 2 Compact 全自動微生物分析系統(tǒng)(上海歡奧科技公司生產(chǎn))。

1.2方法

1.2.1分離和鑒定產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌嚴(yán)格遵守《全國臨床檢驗(yàn)規(guī)程》的要求及標(biāo)準(zhǔn)對痰標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)、分離。應(yīng)用Vitek 2 Compact 全自動微生物分析系統(tǒng)鑒定和篩選菌株，確認(rèn)時(shí)根據(jù)CLSI(美國臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化機(jī)構(gòu))指導(dǎo)的紙片擴(kuò)散法。

1.2.2試驗(yàn)分組分為5個處理組，A組為痰熱清濃度對倍稀釋；B組為痰熱清濃度遞減；C組為特治星用藥組；D組為痰熱清與特治星聯(lián)合應(yīng)用組，各自分為10小組，使用對倍稀釋法，間隔8 h后應(yīng)用特治星；E組為痰熱清與特治星聯(lián)合應(yīng)用組，各自分為10小組，使用濃度遞減法，間隔8 h后應(yīng)用特治星。

1.2.3試驗(yàn)方法上述各組均在35℃溫箱培養(yǎng)，在24 h后測定各組痰熱清及特治星的MIC值(最小抑菌濃度)。不同處理組痰熱清濃度與特治星濃度，詳見表1、表2。

2結(jié)果

2.1各處理組的試驗(yàn)表現(xiàn)

在A組中，第1管未生長出細(xì)菌，第2-10管表現(xiàn)均渾濁；B組中，第1-4管未生長出細(xì)菌，第5-10管表現(xiàn)均渾濁；C組中，第1-6管未生長出細(xì)菌，第7-10管表現(xiàn)均渾濁；D組中，1小組中第1-2管未生長出細(xì)菌，第3-10管表現(xiàn)均渾濁,2-10小組中第1管均未生長出細(xì)菌，后9管表現(xiàn)渾濁；E組中，1小組中第1-6管未生長出細(xì)菌，第7-10管表現(xiàn)均渾濁,2-4小組中第1-5管未生長出細(xì)菌，第6-10管表現(xiàn)均渾濁,5小組中第1-3管未生長出細(xì)菌，第4-10管表現(xiàn)均渾濁，6-10組中第1-2管未生長出細(xì)菌，第3-10管表現(xiàn)均渾濁。

表1　不同處理組痰熱清的濃度情況(μl/ml)

表2　不同處理組特治星的濃度情況(μg/ml)

2.2抑制試驗(yàn)結(jié)果

對產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯桿菌的最小抑菌濃度上，痰熱清為750 μl/ml，特治星為28.125 μg/ml，在應(yīng)用痰熱清8 h后，痰熱清濃度達(dá)到450 μl/ml以上，特治星的用藥劑量可以下降至5.625以下，詳見圖1。

3討論

痰熱清為中藥制劑，內(nèi)含金銀花、熊膽粉、連翹、黃芪等中藥材。因其具有鎮(zhèn)靜止咳、解除痙攣、解毒清熱、平喘祛痰之效，并具有調(diào)節(jié)免疫力及抵抗致病菌入侵的作用，廣泛應(yīng)用于小兒支氣管肺炎、老年COPD等常見呼吸內(nèi)科疾病的治療[4]。對于鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌等引起的肺炎，在給予常規(guī)西藥抗生素治療的基礎(chǔ)上，聯(lián)合應(yīng)用痰熱清能夠起到更好的療效，縮短患者的住院時(shí)間[5,6]。該方中金銀花具有清血解毒、宣肺解表之效，山羊角、熊膽粉具有明目平肝、解熱抗菌之效，連翹能夠起到散結(jié)疏風(fēng)，解毒清熱的效果，黃芪能夠涼血解毒、散熱除濕。現(xiàn)代藥理表明，痰熱清的抗菌、解熱和抗炎效果顯著，對多種呼吸道病毒株培養(yǎng)細(xì)胞病變，能產(chǎn)生較好的抑制作用[7,8]；對多種細(xì)菌菌株成長有抑制作用，減少耐藥菌的生成[9]。在對于耐藥菌的治療上，痰熱清具有許多藥理作用等待一線研究人員發(fā)現(xiàn)。

圖1　聯(lián)合應(yīng)用痰熱清與特治星后的抑菌曲線效果圖

在本次研究中，對產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯桿菌的最小抑菌弄濃度上，痰熱清為750 μl/ml，特治星為28.125 μg/ml，在應(yīng)用痰熱清8 h后，痰熱清濃度達(dá)到450 μl/ml以上，特治星的用藥劑量可以下降至5.625以下。并且我們發(fā)現(xiàn)，與痰熱清與特治星同時(shí)應(yīng)用比較，在兩者間隔8 h先后給藥可以顯著使用藥量減少，并且顯著的升高抑菌療效。據(jù)曹小利等[10]報(bào)道，痰熱清能夠?qū)?xì)菌間傳播R質(zhì)粒有效的進(jìn)行阻斷，減少因R質(zhì)粒所引起的細(xì)菌耐藥。痰熱清還能夠?qū)?xì)菌的外排泵起到抑制作用，減少耐藥基因的擴(kuò)增及表達(dá)，并能夠影響耐藥菌的代謝，另外痰熱清對機(jī)體免疫力的調(diào)節(jié)，可以顯著減少耐藥菌的生成和繁殖[11]。因而對ESBLs肺炎克雷伯桿菌具有極佳的抑菌效果。

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文章編號：1007-4287(2016)01-0087-03

(收稿日期：2015-02-22)