薛原 戴長庚 周勇 胡寧貴 王岑岑 羅遠輝 范成平 張權 代飛
摘 要:該文采用QuEChERS方法提取凈化煙草樣品,建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 (UPLC-MS/MS)檢測煙草中腈菌唑的殘留分析方法。以1%乙酸乙腈提取溶劑,PSA和GCB作為凈化劑,超高效液相色譜分離,電噴霧電離、正離子掃描,三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜以多反應監(jiān)測掃描方式進行檢測,以碎片離子對m/z289.116 /70.028進行定性分析、m/z 289.116 /125.041 進行基質(zhì)匹配標準品的外標法定量。標準曲線線性方程為Y=21295x+156791,R2=0.9991,其線性范圍在1~500μg·L-1。結果表明,在0.01~5mg·kg-1添加水平范圍內(nèi),腈菌唑在煙草中平均回收率在88.3%~93.0%,變異系數(shù)在5.2%~7.3%,檢出限(LOD)為0.029μg·kg-1,定量限(LOQ)為0.03μg·kg-1。該方法簡單、快速,適用于大量煙草樣品中腈菌唑的殘留檢測。
關鍵詞:腈菌唑;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;煙草
中圖分類號 S572 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731(2016)02-100-03
Determination of Myclobutanil Residues in Tobacco Using UPLC-MS/MS
Xue Yuan1 et al.
(1Anshun Branch of Guizhou Tobacco,Anshun 561000,China)
Abstract:A rapid and sensitive analytical method for determination of myclobutanil residues in tobacco samples has been established based on QuEChERS and UPLC-MS/MS.The sample was extracted by 1% acetic acid acetonitrile and then purified by primary secondary amine (PSA) and graphitized carbon black (GCB).The mass spectrometerw as operated with electrospray in the positive ion mode ( ESI+ ) .The myclobutanil were quantified by external standard method and matched standard solution used to compensate for matrix effect.The myclobutanil results were on the intension of the characteristic m/z 289.116/70.028 ion and m/z 289.116/125.041 ion .Under the optimal conditions, the calibration curve showed a good linearity in the range of 1~500μg·L-1 with a correlation coefficient of
0. 9991 Average recoveries of myclobutanil in tobacco at three levels (0.01mg·kg-1,0.5mg·kg-1 and 5mg·kg-1) ranged from 88.3% to 93.0% with relative standard deviations (RSDs) from 5.2% to 7.3% (n = 5).Limits of detections (LOD) of thifluzamide were 0.029μg·kg-1,while limits of quantifications (LOQ) were 0.03μg·kg-1,respectively.The method is simple,rapid and accurate,and it can meet the requirements of the domestic and international legislation.The method adapts to confirm residues of thifluzamide in rice,corn and potato.
Key words:Myclobutanil;UPLC-MS/MS;Tobacco
腈菌唑(Myclobutanil)是一種內(nèi)吸性廣譜的三唑類殺菌劑,屬于表角甾醇類生物合成抑制劑,對白粉病、銹病、黑星病、灰斑病、褐斑病、黑穗病等均具有較好的防治效果。腈菌唑由于藥持效期長,對作物安全,被認為是一種前景較好的殺菌劑[1]。我國是世界上最大的煙草生產(chǎn)國,煙草也是我國部分地區(qū)的重要的經(jīng)濟作物,煙草稅收占到我國財政收入的10%[2]。近年來,隨著煙草品種的逐年增加及栽培制度的變化,煙草病蟲害如白粉病的發(fā)生也不斷加重。腈菌唑作為防治煙草白粉病的重要藥劑,被長期廣泛的使用。
目前,有報道采用氣相色譜(ECD)測定黃瓜[3]、柑橘[4]、荔枝[5-6]上的腈菌唑殘留量;液相色譜法測定黃瓜[7]和飼料[8]中腈菌唑的殘留;氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)測定大蔥[9]、煙草[10]、西紅柿[11]、化妝品[12]上腈菌唑的殘留;液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜(LC-MS/MS)檢測腈菌唑在蔬菜[13]、草莓[14]及化妝品[15]中的殘留。但較氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜而言,氣相色譜-ECD和液相色譜法檢測易受雜質(zhì)干擾影響,且檢測時間長。在腈菌唑殘留分析的前處理中多采用固相萃取技術凈化,但其費時長、溶劑消耗量大,對環(huán)境造成二次污染。QuEChERS方法是Steven[15]于2003年提出的應用于農(nóng)產(chǎn)品檢測的前處理技術,目前已成為世界多國認可的實驗方法,并應用于農(nóng)藥殘留分析。本文旨在建立一種簡便快捷的檢測煙草中腈菌唑殘留的分析方法。該方法前處理簡單,易操作,準確度高,能夠滿足煙草中腈菌唑殘留量的快速檢測和確證的要求。
1 材料與方法
1.1 試劑與儀器
1.1.1 試劑 腈菌唑標準溶液(100mg·L-1,北京勤誠亦信有限公司);乙腈(分析純);甲醇(色譜純);乙酸(分析純);水(屈臣氏純凈水);GCB(石墨化碳黑,德國CNW Technologies GmbH 公司);PSA(N-丙基乙二胺,Agela Technologies公司)。
1.1.2 儀器 HR 1727/06/BC 飛利浦粉碎機(珠海飛利浦家庭電器有限公司);SK-1漩渦混合器(江蘇中大儀器廠);TG16臺式離心機(長沙邁佳森儀器設備有限公司);Filter Unit濾膜(0.22μm,Agela Technologies公司);超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS,TSQ-Vantage,Thermo公司);Hypersil GOLD色譜柱(100mm×2.1mm,1.9μm,Thermos公司)。
1.2 標樣溶液的配置 準確移取適量腈菌唑標準溶液,分別用乙腈稀釋成0.5mg·L-1、0.1mg·L-1、0.05mg·L-1、0.01mg·L-1、0.001mg·L-1的系列標準溶液。
1.3 樣品前處理
1.3.1 提取 準確稱取2.5g粉碎的煙草樣品于50mL具塞離心管中,加入5mL純凈水和10mL1%乙酸乙腈,渦旋提取5min,超聲30min,靜置30min,再加入3g氯化鈉和4g無水硫酸鎂,渦旋1min,5 000r離心5min。
1.3.2 凈化 取1.0mL上清液到盛有150mg無水MgSO4、50mgPSA和20mgGCB的2mL離心管中,渦旋1min,以5 000r離心5min,上清液過0.22μm有機膜,取200μL濾液,用純凈水定容到1mL,備用。
1.4 檢測方法
1.4.1 色譜條件 C18色譜柱,柱溫:40℃,流動相A:甲醇,流動相B:0.1%甲酸水,梯度洗脫程序(見表1)。流速:0.2mL·min-1;進樣量:5μL。
1.4.2 質(zhì)譜條件 掃描方式:大氣壓化學電離ESI(+);定性離子對m/z289.116/70.028、m/z 289.116/125.041,定量離子對m/z 289.116 /125.041,碰撞能量分別為12V和13V,射頻電壓 82V。電噴霧電壓3 500V;碰撞氣為氬氣,鞘氣及輔助氣是氮氣,鞘氣流速30arb,輔助氣流速 10arb。腈菌唑的保留時間為6.04min。采用外標法定量。
2 結果與分析
2.1 測試條件優(yōu)化 為了獲得最佳的靈敏度和分離效果,首先用直接進樣方式,掃描范圍m/z為100~500,選擇合適的離子源。實驗結果表明,電噴霧離子化、正離子掃描模式可使腈菌唑具有較好的電離效果并獲得特征離子峰[M+H]。在此基礎上,進一步選擇最適的監(jiān)測離子、射頻電壓及碰撞能量。通過實驗證明,乙腈和0.1%甲酸水作為流動相能取得最高靈敏度,但甲醇和0.1%甲酸水為流動相時,峰型是最好的。在靈敏度足夠高的前提下,選擇了甲醇和0.1%甲酸水為流動相。當進樣溶劑為乙腈+水(V∶V=20∶80)時,峰形比純乙腈要好。
2.2 前處理條件的選擇 對檢測腈菌唑,有采用甲醇或乙腈做提取溶劑的報道,本方法采取甲醇和0.1%乙酸乙腈為提取溶劑,取得的回收率較甲醇或乙腈作為提取溶劑的回收率好。本方法分別選取PSA、弗羅里硅土、石墨化炭黑(GCB)和C18分別作為凈化劑,發(fā)現(xiàn)用PSA+GCB作為凈化劑既能在去除基質(zhì)中的雜質(zhì)的同時還能取得理想的回收率。
2.3 方法的靈敏度、線性相關性、準確度及精密度 本實驗靈敏度以最低添加濃度0.01mg/kg的色譜圖的噪音信號的3倍和10倍確定,腈菌唑在煙草中的最低檢測限(LOD)(S/N=3)分別為0.029μg·kg-1,定量限(LOQ)(S/N=10)分別為0.09μg·kg-1。把500μg·L-1、100μg·L-1、50μg·L-1、10μg·L-1、1μg·L-1標準溶液和煙草基質(zhì)標準溶液進樣,以峰面積(Y)對濃度(μg·L-1)(X)作圖,得到腈菌唑的標準溶液曲線:Y=21295x+156791(R2=0.999 1)(圖1);煙草基質(zhì)標準溶液曲線:Y=2103.8x+14802(R2=0.99 9)(圖2)。本方法用添加回收率和變異系數(shù)衡量準確度及精密度。在空白的煙草添加3個濃度腈菌唑標液,每個濃度重復5次,計算添加回收率和變異系數(shù)。腈菌唑在煙草中平均回收率為88.3%~93.0%,變異系數(shù)為5.2%~7.3%(表1)。本方法的準確性、精密度均滿足農(nóng)藥殘留分析的要求[17]。色譜圖見圖3。
本實驗中,用0.001mg/L標準溶液在相同色譜條件下,1h進樣1次,連續(xù)進樣5次,所測得峰面積的變異系數(shù)為7.6%,表明儀器具有很好的穩(wěn)定性。在煙草局抽查的煙草樣品中檢測得腈菌唑的殘留量均小于0.001mg·kg-1。
3 結論
本文采用1%乙酸乙腈提取、PSA加GCB凈化,建立了煙草樣品的UPLC-MS/MS快速檢測腈菌唑殘留量的方法。腈菌唑在煙草中平均回收率為89.1%~105.9%,變異系數(shù)為4.9%~8.5%。該方法簡單快速、準確可靠,可用于大量樣品的快速檢測。
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(責編:張宏民)