◎ 王 蕾，任志彬，裴新華

（1.邯鄲出入境檢驗(yàn)檢疫局，河北 邯鄲 056017；2.河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，河北 邯鄲 056038）

高效液相色譜法測(cè)定蜜餞中7種合成著色劑

◎ 王 蕾1,2，任志彬1,2，裴新華1

（1.邯鄲出入境檢驗(yàn)檢疫局，河北 邯鄲 056017；2.河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，河北 邯鄲 056038）

本文建立了高效液相色譜法測(cè)定蜜餞中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和酸性紅7種合成著色劑的檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)方法無(wú)須單獨(dú)對(duì)酸性紅進(jìn)行前處理，操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、分離效果好、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，可應(yīng)用于基層實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

蜜餞；合成著色劑；高效液相色譜法

我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2014《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定，蜜餞類重的合成著色劑類添加劑應(yīng)為0.05～0.10 g/kg。食品添加劑在規(guī)定范圍和規(guī)定用量?jī)?nèi)使用是安全的，但如果長(zhǎng)期、集中、頻繁地大量食用含有合成著色劑的食物，將對(duì)人體神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)造成損害。

對(duì)于合成著色劑的檢測(cè)方法，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)推薦的主要集中在液相色譜法、薄層色譜法、示波極譜法3種，其中液相色譜法應(yīng)用最廣。用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.35-2003方法處理部分蜜餞樣品時(shí)，樣品中的果膠易堵住G3垂融漏斗，而且只規(guī)定了范圍內(nèi)6種著色劑的檢測(cè)方法，缺少超范圍使用酸性紅的檢測(cè)方法。本文采用聚酰胺粉吸附，高效液相色譜UV檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定7種著色劑，優(yōu)化了前處理和色譜條件，峰形和分離度良好，結(jié)果準(zhǔn)確。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Waters e2695高效液相色譜儀，2489紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，離心機(jī)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，超聲波清洗器。檸檬黃、日落黃、胭脂紅、莧菜紅、誘惑紅、亮藍(lán)、酸性紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司），聚酰胺粉（200目），甲醇-甲酸混合溶液（6∶4，v∶v），無(wú)水乙醇-氨水-水混合溶液（7∶2∶1，v∶v∶v），實(shí)驗(yàn)室用水為超純水。

1.2 樣品處理

稱取粉碎后的蜜餞樣品5.00 g放入離心管中，加入超純水20 mL，60 ℃溫?zé)岢?0 min，若溶液pH值過(guò)高，用檸檬酸溶液調(diào)pH至6。5 000 r/min離心后，將上清液經(jīng)帶有玻璃纖維的G3垂融漏斗抽濾，重復(fù)提取一次，合并提取液。加入聚酰胺粉，攪拌均勻，充分吸取色素后至提取液無(wú)色，用G3垂融漏斗抽濾。用60 ℃ pH 4的水洗滌3～5次，用甲醇-甲酸混合溶液洗滌除去天然色素，用純水沖洗至中性，再用無(wú)水乙醇-氨水-水混合溶液進(jìn)行解析，收集解析液。80 ℃水浴蒸發(fā)至盡干，用純水定容至5 mL，過(guò)0.45 μm濾膜，備用待測(cè)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

將檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、酸性紅和亮藍(lán)的標(biāo)準(zhǔn)品配制成50.0 μg/mL的混標(biāo)，并稀釋成1.00、5.00、10.00、20.00 μg/mL和50.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.4 色譜條件

Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫35 ℃，波長(zhǎng)254 nm，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，流動(dòng)相：A為甲醇，B為乙酸銨溶液（0.02 mol/L），梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序表

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的選擇

（1）提取溶劑的選擇。本實(shí)驗(yàn)分別選取了純水和無(wú)水乙醇-氨水-水混合溶液兩種提取液。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)用無(wú)水乙醇-氨水-水混合溶液提取的過(guò)程中，色素逐漸消退，回收率不理想。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用純水提取效率和回收率更高。

（2）提取方式的選擇。本實(shí)驗(yàn)對(duì)加熱、震蕩、超聲3種提取方法進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，加熱和超聲相結(jié)合效果最好。加熱溫度在60 ℃，超聲時(shí)間為10 min時(shí)，提取效率最高，如圖1所示。

圖1 提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響圖

由于蜜餞類樣品中的果膠易堵住G3垂融漏斗，造成提取物損失和實(shí)驗(yàn)耗材的浪費(fèi)，而使用普通濾紙會(huì)吸附色素。本實(shí)驗(yàn)采用塞有玻璃纖維的漏斗抽濾，能較好解決問(wèn)題。

2.2 色譜條件的選擇

（1）流動(dòng)相的選擇。本實(shí)驗(yàn)分別選取甲醇-乙酸銨溶液和乙腈-乙酸銨溶液作為流動(dòng)相，出峰效果基本無(wú)差別，因甲醇毒性小，故選用甲醇-乙酸銨溶液作為流動(dòng)相。分別將0.02、0.04、0.06 mol/L的乙酸銨溶液作為流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，0.02 mol/L的乙酸銨-甲醇溶液作為流動(dòng)相出峰效果最好。

（2）洗脫程序的選擇。采用甲醇-乙酸銨（0.02 mol/L）溶液作為流動(dòng)相，分別選取3種洗脫程序，比較各自的洗脫效果，洗脫程序見(jiàn)表1～3，對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)圖譜如圖2～4所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，利用表2的洗脫程序檸檬黃和莧菜紅、酸性紅和亮藍(lán)無(wú)法很好分離；表3的洗脫程序中大多數(shù)峰均無(wú)法很好分離，且基線干擾較大；表1的洗脫程序可以使7個(gè)目標(biāo)峰峰形較好，且完全分離。

表2 流動(dòng)相梯度洗脫程序2表

表3 流動(dòng)相梯度洗脫程序3表

圖2 洗脫程序1標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

圖3 洗脫程序2標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

圖4 洗脫程序3標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

在優(yōu)化條件下，得到峰面積y與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度x的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性關(guān)系良好，以3倍信噪比計(jì)算出檢出限，見(jiàn)表4。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的檢測(cè)方法的檢出限在0.16～1.04 mg/kg，本方法的檢出限在0.05～0.1 mg/kg，滿足檢測(cè)要求。

表4 7種著色劑的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限表

2.4 精密度與回收率

在優(yōu)化條件下，選擇蘋果丁、草莓脯兩種蜜餞樣品進(jìn)行回收率和精密度實(shí)驗(yàn)。每種樣品7個(gè)平行，在0.1、10、50 mg/kg 3個(gè)水平加標(biāo)（0.1 mg/kg為檢出限，50 mg/kg為限量標(biāo)準(zhǔn)）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3種濃度下，兩種樣品加標(biāo)回收率在82.4%～105.7%，平均回收率為93.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于5%。

3 結(jié)語(yǔ)

本方法是基于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.35-2003的基礎(chǔ)上優(yōu)化而成的同時(shí)測(cè)定檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)和酸性紅7種合成著色劑的改進(jìn)方法。本方法采用純水加熱超聲提取，離心后聚酰胺粉吸附凈化，用甲醇-甲酸混合溶液洗滌，再用無(wú)水乙醇-氨水-水混合溶液進(jìn)行解析，收集解析液定容后在254 nm上機(jī)測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)方法不用單獨(dú)對(duì)酸性紅進(jìn)行前處理，操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、分離效果好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確，可應(yīng)用于基層實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

Determination of 7 Synthetic Colorants in Glazed Fruit by High Performance Liquid Chromatography

Wang Lei1,2, Ren Zhibin1,2, Pei Xinhua1
(1. Handan Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau, Handan 056017, China; 2.College of Life Science and Food Engineering; Hebei University of Engineering, Handan 056038, China)

This paper established an HPLC method for the determination of candied lemon yellow, amaranth, carmine, sunset yellow, allura red, blue, acid red 7 synthetic colorants. This method does not need to treat acid red separately, it has the advantages of simple operation, high sensitivity, good separation efect and accurate experimental results.

Glazed fruit; Synthetic colorants; HPLC

R155.5

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.24.046