◎ 李 軒，曾麗珠，張 昊

（陽江出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東 陽江 529500）

市售油性記號(hào)筆對水產(chǎn)品中結(jié)晶紫檢測污染研究

◎ 李 軒，曾麗珠，張 昊

（陽江出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東 陽江 529500）

本文研究用超高效液色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC/MS/MS）測定市售4種常見品牌的黑色、藍(lán)色、紅色油性記號(hào)筆中結(jié)晶紫（含隱性結(jié)晶紫）的含量。待測筆樣直接在稱量紙上書寫若干直線，再用乙腈提取，UPLC/MS/MS測定，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明，4種品牌的黑色、藍(lán)色油性筆均檢出結(jié)晶紫（含隱性結(jié)晶紫），而紅色油性筆中結(jié)晶紫（含隱性結(jié)晶紫）含量較低或未檢出。水產(chǎn)品檢測過程中樣品應(yīng)避免直接接觸到油性記號(hào)筆的染料，以防止樣品在檢測過程中的本底污染和假陽性。

超高效液色譜串聯(lián)質(zhì)譜法；結(jié)晶紫；隱性結(jié)晶紫；油性筆

結(jié)晶紫為三苯甲烷類染料，常用于魚類水霉病等寄生蟲病的防治或作為消毒劑用于鮮活魚類運(yùn)輸過程中。研究表明，結(jié)晶紫進(jìn)入人體，可以通過生物轉(zhuǎn)化，還原代謝成脂溶性隱性結(jié)晶紫。隱性結(jié)晶紫具有高毒性、高殘留和致癌、致突變等副作用，嚴(yán)重威脅著消費(fèi)者的身體健康，是一種極為有害的消毒劑[1]。美國、韓國、日本等許多國家已要求水產(chǎn)品中結(jié)晶紫不得檢出。目前結(jié)晶紫在水產(chǎn)品中殘留檢測的方法有HPLC、HPLC/MS/MS、UPLC/MS/MS等，但在樣品前處理過程中可能會(huì)使用到含量存在結(jié)晶紫目標(biāo)化合物的物品。其中油性記號(hào)筆是一大污染源，經(jīng)常會(huì)用于實(shí)驗(yàn)過程中對各種容器的標(biāo)志。許榮富 等[2]研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)晶紫、甲基紫、堿性品藍(lán)是市售藍(lán)色圓珠筆中的主要染料。李心倩 等[3]研究發(fā)現(xiàn)，市售藍(lán)色圓珠筆油墨所采用的主要色料是結(jié)晶紫。因此，研究和分析油性記號(hào)筆中結(jié)晶紫的含量，控制其在檢測過程中對樣品的污染，能有效提高檢測水平。

1 實(shí)驗(yàn)過程

1.1 儀器

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（Waters Quattro Premier XE）：配有電噴（ESI）離子源；離心機(jī)；漩渦振蕩器（IKA）；超聲波振蕩器。

1.2 試劑

結(jié)晶紫（CV）、隱性結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)品（LCV），Dr.Ehrenstorfer GmbH；同位素內(nèi)標(biāo)氘代結(jié)晶紫（CV-D6）、同位素內(nèi)標(biāo)氘代隱性結(jié)晶紫（LCV-D6），Witega；乙腈、乙酸、無水乙酸銨，均為色譜純。10 mmol/L乙酸銨；中性氧化鋁柱。

1.3 油性記號(hào)筆

日本斑馬 MO-120-MC，日本櫻花XYK-T，晨光MG-2130，得力6824，4種品牌均含黑、藍(lán)、紅3種顏色。

1.4 試樣檢測

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。準(zhǔn)確稱取適量的結(jié)晶紫、隱性結(jié)晶紫內(nèi)、外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈按需逐級(jí)稀釋分別配制成結(jié)晶紫、隱性結(jié)晶紫混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和結(jié)晶紫、隱性結(jié)晶紫內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）提取。取各品牌不同顏色的記號(hào)筆，分別在稱量紙上劃寫四道5 cm橫線，晾干后置于塑料離心管中，加入100 μL內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 ng/mL），加入10 mL乙腈，漩渦振蕩1 min，超聲振蕩5 min，4 000 r/min離心10 min。空白稱量紙作為空白對照。

（3）凈化。移取樣品溶液加至已活化的中性氧化鋁柱上，用玻璃試管接受流出液，2 mL乙腈洗滌柱子，收集流出液，45 ℃氮?dú)獯抵两桑?+1乙腈-10 mmol/L乙酸銨定容至1.00 mL，經(jīng)0.2 μm濾膜過濾后上機(jī)測定。

1.5 儀器條件

（1）色譜條件。A：0.1%甲酸乙腈，B：10mmol/L乙酸銨+0.1%甲酸；流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃，進(jìn)樣量：10 μL；總運(yùn)行時(shí)間：4 min；色譜柱：Acquity UPLC BEH C18色譜柱，2.1×50 mm，1.7μm。

（2）質(zhì)譜條件。離子化方式：ESI positive；毛細(xì)管電壓：1.0 kV；離子源溫度：110 ℃；脫溶劑氣溫度：氮?dú)猓?00 L/Hr；采集模式：MRM模式。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 ng/mL）100 μL，50%1+1乙腈-10mmol/乙酸銨溶液稀釋成濃度為0.0、0.2、0.5、1.0、2.0 ng/mL和5.0 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)系列，依次按從低到高濃度順序分別進(jìn)樣檢測，制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。進(jìn)樣量10 μL，內(nèi)標(biāo)法定量。

2 結(jié)果分析

上述品牌各色記號(hào)筆中結(jié)晶紫（含隱性結(jié)晶紫）含量見表1。由表1可知，各品牌的黑色、藍(lán)色油性記號(hào)筆中均有檢出結(jié)晶紫，且藍(lán)色筆均含較高濃度的結(jié)晶紫。各品牌的紅色油性記號(hào)筆中結(jié)晶紫含量較低或未檢出。研究結(jié)果表明，水產(chǎn)品檢測過程中樣品應(yīng)避免直接接觸到油性記號(hào)筆的染料，以防止樣品在檢測過程中的本底污染和假陽性。

表1 各品牌油性記號(hào)筆中結(jié)晶紫和隱性結(jié)晶紫的含量表

[1]劉 軍，胡華軍，張明洲，等.漁藥孔雀石綠的毒性、危害和檢測現(xiàn)狀[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006（5）：397-400.

[2]許榮富，盧 青，鄒 洪，等.反相高效液相色譜法對藍(lán)色圓珠筆分類的研究[C].中國化學(xué)會(huì)有機(jī)分析及生物分析學(xué)術(shù)研討會(huì)會(huì)議，2007.

[3]李心倩，王彥吉，史曉凡，等.圓珠筆油墨字跡色痕的高效液相色譜分析方法[J].分析化學(xué)，2004（5）：657-660.

Research on the Detection of the Contamination of Crystal Violet in Aquatic Products by Commercial Marking Pen

Li Xuan, Zeng Lizhu, Zhang Hao
(Yangjiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Yangjiang 529500, China)

This paper studied the content of crystal violet (including leucocrystal violet) in three diferent colors marking pen(black ,blue and red) by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC/MS/MS). The results showed that the black and blue marking pen were detected in the crystal violet (including leucocrystal violet), while the red marking pen in the crystal violet (including leucocrystal violet) content is low or not detected. In the process of aquatic product inspection, the sample should avoid direct contact with the marking pen, in order to prevent the background pollution and false positive.

UPLC/MS/MS; Crystal violet; Leucocrystal violet; Oil pen

TS207

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.24.038