宋 堅(jiān) 張同成?

ERCC1基因多態(tài)性與乳腺癌蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療療效的相關(guān)性研究

宋 堅(jiān) 張同成?

目的 研究ERCC1基因多態(tài)性與乳腺癌蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療療效的相關(guān)性。方法 隨機(jī)選取2012年8月至2015年8月收治的46例乳腺癌患者，依據(jù)術(shù)前治療情況將患者分為兩組，即接受蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療組（化療組，n=18）和未接受任何治療組（未化療組，n=28）。不對(duì)化療組患者進(jìn)行臨床病理特征分析，對(duì)未化療組患者進(jìn)行臨床病理特征分析，對(duì)其進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，然后對(duì)未化療組患者ERCC1基因的表達(dá)水平及兩組患者的ERCC1表達(dá)水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 未化療組不同年齡、腫塊大小、病理類(lèi)型、組織學(xué)分級(jí)、腋淋巴結(jié)、PR、ER、HER-2患者ERCC1基因的表達(dá)水平之間的差異均不顯著（P＞0.05）；化療組患者的ERCC1表達(dá)水平顯著高于未化療組（P＜0.05）。結(jié)論 ERCC1基因表達(dá)水平會(huì)在乳腺癌蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療的作用下提升。

ERCC1基因多態(tài)性 乳腺癌 蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療 療效 相關(guān)性

為了對(duì)乳腺癌中ERCC1的表達(dá)情況及ERCC1基因表達(dá)水平受到蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療的影響有一個(gè)初步了解，本研究對(duì)2012年8月至2015年8月本院收治的46例乳腺癌患者的臨床資料進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，研究ERCC1基因多態(tài)性與乳腺癌蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療療效的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 46例乳腺癌患者均接受手術(shù)治療，依據(jù)術(shù)前治療情況分為兩組，即接受蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療組（化療組，n=18）和未接受任何治療組（未化療組，n=28）?；熃M患者年齡28～59歲，平均年齡（40.5±10.2）歲。臨床分期，Ⅱ期14例、Ⅲ期4例。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例、不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例。病理類(lèi)型：非特殊型癌15例、特殊型癌3例。組織分級(jí)：Ⅰ級(jí)2例、Ⅱ級(jí)9例、Ⅲ級(jí)7例。未化療組患者年齡28～67歲，平均年齡（43.2±10.1）歲。臨床分期：Ⅰ期8例、Ⅱ期16例、Ⅲ期4例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例、不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。病理類(lèi)型：非特殊型癌24例、特殊型癌4例。組織分級(jí)：Ⅰ級(jí)6例、Ⅱ級(jí)12例、Ⅲ級(jí)10例。兩組患者一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法 （1）治療方法：未化療組患者未給予任何治療，化療組患者給予蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療，第1天給予患者靜脈滴注135mg/m2紫杉醇或75mg/m2多烯紫杉醇，同時(shí)給予患者靜脈推注40mg/m2吡柔比星+500mg/m2環(huán)磷酰胺（C），3周為1個(gè)療程，共治療2～4療程。（2）RT-PCR檢測(cè)：不對(duì)化療組患者進(jìn)行臨床病理特征分析，對(duì)未化療組患者進(jìn)行臨床病理特征分析，對(duì)其進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，具體操作為：購(gòu)買(mǎi)深圳晶美生物公司生產(chǎn)的總RNA提取試劑盒及RT-PCR試劑盒。①總RNA提取：將300mg乳腺癌組織取出，在液氮預(yù)冷的研缽中放置研磨，用藥匙收集放入15ml的EP管中，加入Trizol液，組織和Trizol的比例為100mg：1ml，充分混勻后靜置5min。運(yùn)用氯仿-異丙醇法提取總RNA，電泳可見(jiàn)3個(gè)條帶，即28S、18S、5S。用紫外分光光度計(jì)對(duì)RNA的純度進(jìn)行鑒定，對(duì)A260nm/A280nm的比值進(jìn)行測(cè)定，使其維持在1.8～2.0。②第一鏈cDNA合成：1μg總RNA+1μl oligo（dT）18引物，焦碳酸二乙酯（DEPC）水補(bǔ)至12μl，70℃孵育5min，冰上驟冷；順序加入4μl 5×buffer+2μl10mmol/LdNTP+20 U Ribonucleaseinhibitor，37℃孵育5min，加200 UM-MuLV，終體積為20μl。42℃孵育60min，70℃孵育10min，冰上驟冷，cDNA保存在-20℃的溫度下。③購(gòu)買(mǎi)上海生工公司合成的PCR引物（見(jiàn)表1），反應(yīng)體系：50μl去離子水+5μl 10×PCR緩沖液+5μl cDNA+2μl 25mmol/LMgCl2+1μl 10mmol/ LdNTP+2.5UTaq酶+25pmo1上游特異引物+25pmo1下游特異引物，充分混勻，在較短的時(shí)間內(nèi)離心，94℃預(yù)熱5min，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增：94℃、55℃、72℃、94℃的溫度下分別進(jìn)行30s的變性、30s的退火、40s的延伸、5min的延伸。用1.0%瓊脂糖凝膠對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳，電泳電壓穩(wěn)定在500 V/M1.0 h左右，用5 g/L溴化乙錠（EB）進(jìn)行20min的染色，然后在紫外燈下、凝膠成像系統(tǒng)、LabWorkS4圖形分析處理系統(tǒng)分別觀察、攝影成像、分析，ERCC1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量=ERCC1擴(kuò)增帶灰度/內(nèi)參β-actin擴(kuò)增帶灰度［1-3］。

表1 PCR引物

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，用ANOVA方差分析成組設(shè)計(jì)的單因素比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 未化療組患者ERCC1基因的表達(dá)水平 未化療組不同年齡、腫塊大小、病理類(lèi)型、組織學(xué)分級(jí)、腋淋巴結(jié)、PR、ER、HER-2患者ERCC1基因的表達(dá)水平之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 未化療組患者ERCC1基因的表達(dá)水平（x±s）

2.2 兩組患者的ERCC1表達(dá)水平比較 化療組患者的ERCC1表達(dá)水平顯著高于未化療組（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 兩組患者的ERCC1表達(dá)水平比較（x±s）

3 討論

在ⅡB、Ⅲ期乳腺癌患者的治療中，蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療能夠降低患者的腫瘤分期、提高腫瘤切除率，并將有效依據(jù)提供給臨床，增加對(duì)化療敏感程度的了解［4-6］。臨床醫(yī)師一方面應(yīng)對(duì)手術(shù)切除率及患者術(shù)后生存率以充分的重視，另一方面還應(yīng)腫瘤生物學(xué)特性改變及其基因表達(dá)水平以充分的影響［7］。ERCC1基因歸屬于人類(lèi)細(xì)胞DNA損傷后核苷酸切除修復(fù)途徑基因家族，其表達(dá)產(chǎn)物一方面能有效識(shí)別損傷，另一方面能將5'端切除，途徑為通過(guò)促進(jìn)一種雜合二聚體結(jié)構(gòu)的形成，將5'端核酸內(nèi)切酶連接起來(lái)［8-10］。近年來(lái)，相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者研究表明，通常情況下，癌癥發(fā)病率會(huì)在ERCC1低表達(dá)的情況下提升，而化療多藥耐藥對(duì)其高表達(dá)產(chǎn)生直接而明顯的影響。本研究結(jié)果表明，未化療組不同年齡、腫塊大小、病理類(lèi)型、組織學(xué)分級(jí)、腋淋巴結(jié)、PR、ER、HER-2患者ERCC1基因的表達(dá)水平之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；化療組患者的ERCC1表達(dá)水平顯著高于未化療組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），和相關(guān)醫(yī)學(xué)學(xué)者研究結(jié)果一致，充分說(shuō)明ERCC1基因表達(dá)水平會(huì)在乳腺癌蒽環(huán)類(lèi)藥物新輔助化療的作用下提升，值得臨床充分重視。

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Objective To study the relationship between ERCC1 gene polymorphisms and effcacy of neoadjuvant anthracycline chemotherapy of breast cancer. Methods 46 cases of patients with breast cancer in our hospital during August 2012 to August 2015 were randomly selected，these patients were divided into two groups according to preoperative treatment，namely acceptance anthracycline neoadjuvant chemotherapy group（chemotherapy group，n=18）and did not receive any treatment group（no chemotherapy group，n=54）. The no chemotherapy group were not given clinical and pathological features analysis，while the chemotherapy group were given clinical and pathological features analysis，RT-PCR were detected，and then the ERCC1 gene expression levels of the no chemotherapy group and the ERCC1 expression levels of the two groups were statistically analyzed. Results The differences of ERCC1 gene expression levels of the no chemotherapy group between different ages，tumor sizes，histological types，histological grades，axillary lymph nodes，PR，ER，HER-2 were not signifcant（P＞0.05）；the ERCC1 expression level of the chemotherapy group were signifcantly higher than the no chemotherapy group（P＜0.05）. Conclusions ERCC1 gene expression level can improve under the effect of neoadjuvant anthracycline chemotherapy of breast cancer.

ERCC1 gene polymorphisms Breast cancer Anthracycline neoadjuvant chemotherapy Effcacy Correlation

315700 浙江省寧波市第四醫(yī)院普外科

*通信作者