劉麗梅

烤瓷冠基底合金影響人牙齦成纖維細胞MMP-2、MMP-13表達實驗探討

劉麗梅

目的 觀察不同種類烤瓷牙金屬基底冠浸提液對人牙齦成纖維細胞中 MMP-2、MMP-13表達水平的影響。方法 制備純鈦、鈷鉻、鎳鉻和金合金提取液，通過組織塊改良的方法來對牙齦周圍的纖維細胞進行培養(yǎng)，經(jīng)過浸提液浸泡之后，分別收集樣本上的細胞清液，作為MMP-13表達水平的測定樣本，測定方法為ILISA測定法。結果鈷鉻合金和鎳鉻合金MKMP-13表達水平高于陰性對照組和其他實驗組，各項指標對比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；金、純鈦合金組MMP-13表達水平與陰性對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論 鈷鉻合金和鎳鉻合金MKMP-13表達水平較高，一定程度上會損傷牙齦成纖維細胞；金、純鈦合金生物相容性比較好。

金屬蛋白本酶；金屬浸提液；細胞培養(yǎng)；牙齦成纖維細胞

金屬烤瓷修復體是一種被廣泛采用的金屬修復材料，既具有瓷的美觀性也具有較強的延展性[1］。然而一部分修復體由于材料本身的性質會使患者出現(xiàn)齦緣灰染、牙齦炎癥等方面的問題。需要對不同修復體材料對患者牙周組織的影響進行評估。

牙齦組織主要是由牙齦成纖維細胞組成，成纖維細胞的健康對于患者牙周組織的修復具有重要意義。患者經(jīng)過修復體移植手術后，須要通過牙齦成纖維細胞來生成金屬蛋白酶，促進細胞外基質的生成，尤其是在術后輕微炎癥的刺激下，金屬酶的合成速度有所提升，促進牙周組織快速復原[2-3］。

由此可知，金屬基底冠材料的選用需要考慮到材料本身對于金屬蛋白酶分泌作用的影響，從而斷定金屬基底冠材料是否適合患者并降低矯正手術的副作用。牙齦成纖維細胞通過分泌、增殖、遷移膠原來修復受損的牙周組織。

1 材料和方法

1.1主要試劑和儀器

離心機、TS開型酶聯(lián)免疫檢測儀、倒置顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)孵箱、鼠抗人角蛋白單克隆抗體、鼠抗人波形絲蛋白單克隆抗體、ELISA MMP-13試劑盒、ELISA MMP-2試劑盒、金合金、純鈦、鈷鉻合金、鎳鉻合金。

1.2實驗方法

選取一副健康的牙齦緣組織塊，將其形狀修剪為1 mm2大小，選取1 ml消化時間為30 min的胰蛋白酶放入EP管中，加入組織塊，將EP管置入一氧化碳孵箱中，調整一氧化碳含量至5%，溫度37℃，經(jīng)過12 h后，加入DMEM液，起到組織塊鋪滿瓶底，將組織塊平均分為4份，加入金合金、純鈦、鈷鉻合金、鎳鉻合金液，繼續(xù)培養(yǎng)7天，對合金析出液進行收集[4-5］。對所采集到實驗樣本進行分組，A組為實驗組；B組為鎳鉻合金組、C組為鈷鉻合金組、D組為金合金組；DMEM培養(yǎng)液為隨性對照組，即E組。采用ELISA MMP-13試劑盒在檢測所選取的上清液，用檢測得到的OD值來制定標準曲線，表達出不同OD值對應的濃度。

1.3統(tǒng)計學方法

利用SPSS17.0程式來分析試驗數(shù)據(jù)，檢驗方法為SNK-T檢驗法，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

經(jīng)過6h反應后鎳鉻合金、鈷鉻合金、純鈦合金、金合金MMP-13表達水平分別為（2.179±0.068）ng/ml、（2.048±0.052）ng/ml、（1.937±0.014）ng/ml、（1.971±0.006）ng/ml；經(jīng)過24h反應后鎳鉻合金、鈷鉻合金、純鈦合金、金合金MMP-13表達水平分別為（3.286±0.1521）ng/ml、（3.156±0.084）ng/ml、（1.964±0.026）ng/ml、（1.984±0.017）ng/ml。

相對于鈷鉻合金、鎳鉻合金，金合金、純鈦合金組具有更高的MMP-13表達水平。延長反應時間至24 h，所得到的實驗結果與6 h反應結果相同。而鈷鉻合金、鎳鉻合金隨著適應時間的增加，MMP-13表達水平也隨之增加。

3 討論

在MMP-13表達水平方面，牙齦纖維細胞自身就可以生成一定量的MMP-13，進一步降解口腔中的原纖維細胞，尤其是在鈷鉻合金和鎳鉻合金的催化作用下，陰性對照比與MMP-13水平得到增強，而且隨著時間的延長，變化程度越明顯[6-8］。

綜上所述，鎳鉻合金和鈷鉻合金可以上調人牙齦成纖維細胞MMP-13表達水平，而純鈦和金合金對此影響不明顯。

[1]胡靜.烤瓷冠基底合金影響人牙齦成纖維細胞MMP-2、MMP-13表達的實驗研究[D］. 錦州：遼寧醫(yī)學院，2012：13-14.

[2]胡靜，黃克強，杜雅，等.烤瓷牙基底冠合金影響人牙齦成纖維細胞MMP-13表達的實驗研究[J］.中國醫(yī)學工程，2012，20（4）：16-18.

[3]劉淼，黃克強，趙芳英，等.金屬基底合金浸提液影響人牙齦成纖維細胞MMP-1、MMP-3表達的實驗研究[J］.遼寧醫(yī)學院學報，2010，31（3）：203-205.

[4]杜雅.烤瓷冠基底合金影響人牙齦成纖維細胞分泌前列腺素E_2及環(huán)氧合酶-2的實驗研究[D］. 錦州：遼寧醫(yī)學院，2012：4-5.

[5]蘆琳.烤瓷冠基底金屬浸提液對人牙齦成纖維細胞uPA和其抑制劑PAI-Ⅰ表達的影響[D］. 錦州：遼寧醫(yī)學院：53-54.

[6]劉婷.種烤瓷冠基底合金浸提液對人牙齦成纖維細胞細胞周期及Bcl-2和Bax表達的影響[D］. 錦州：遼寧醫(yī)學院，2013：28-29.

[7]劉婷，黃克強，李志剛，等.4種烤瓷冠基底合金浸提液影響人牙齦成纖維細胞中Bcl-2和Bax的表達[J］.中國組織工程研究，2012，16（16）：2943-2946.

[8]趙永超.不同金屬烤瓷全冠對種植體齦溝液中TNF-α和MMP-8水平的影響[D］. 石家莊：河北醫(yī)科大學，2008：25-26.

Study on the Exp ression of MMP-2 and MMP-13 in Hum an Gingival Fibroblast Cells of Porcelain Fused to Metal Crown

LIU Limei Department of Stomatology， The Affiliated Hospital of Jinlin Medical College， Jilin Jilin 132013， China

Ob jective To observe the effects of different kinds of porcelain fused to metal crown on the expression of MMP-2 and MMP-13 in human gingival fibroblast cells. Methods The preparation of pure titanium and cobalt chrom ium， nickel chrom ium alloy and gold extraction， by means of a modified tissue to fibroblast cells were cultured on the gums around， after leaching liquid immersion， were collected on a sample cell supernatant， the expression level of MMP-13 was determined as the sample determination method for ILISA determ ination. Resu lts The expression of CO Cr alloy and Ni Cr alloy MKMP-13 was higher than the negative control group and experimental group， comparison of various indexes， the difference was statistically significant （P＜0.05）. There was no significant difference in the expression level of MMP-13 and the negative control group （P＞0.05） in the gold and pure titanium alloy group. Conclusion Co Cr alloy and Ni Cr alloy MKMP-13 high expression level， to a certain extent w ill damage the gingival fibroblast； gold， pure titanium alloy biocompatibility is good.

Metal protein， Enzyme， Metal extraction， Cell culture，Gingival fibroblast

R-33

A

1674-9308（2016）27-0011-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.27.007

吉林醫(yī)藥學院附屬醫(yī)院口腔科，吉林 吉林 132013