李 萍，王慧琴，馬素好，邵南齊，李延卿

一種新型中草藥消毒劑殺菌效果研究

李 萍，王慧琴，馬素好，邵南齊，李延卿

中草藥消毒劑；殺菌；懸液定量殺菌試驗；穩(wěn)定性；現場消毒

隨著化學消毒劑對人體健康存在的威脅逐漸為人們所重視，人們更傾向于追求天然、綠色、安全、有效的消毒產品。具有清熱解毒、消炎抑菌等生物學活性的中草藥越來越受到人們的青睞［1］。由此中草藥消毒劑用于皮膚、空氣、器具、食物等消毒的研究和應用越來越多［2－4］。該研究選取了金銀花、野菊花、牡丹皮等中草藥提取制備而成一種新型中草藥消毒劑，原液呈淡黃色。并對該復方中草藥消毒劑殺菌效果及其穩(wěn)定性，進行了實驗室觀察?，F將結果報告如下。

1 材料與方法

1．1 菌懸液制備將金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、大腸桿菌 （ATCC 8099）、銅綠假單胞菌（ATCC 15442）及白色念珠菌（ATCC 10231）經37℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（白色念珠菌為沙保弱培養(yǎng)基）培養(yǎng)24 h的新鮮斜面培養(yǎng)物，用胰蛋白胨生理鹽水（TPS）稀釋液洗下菌苔，并配制成濃度為1×107～5×107cfu／ml的菌懸液。

1．2 中和劑鑒定試驗試驗菌為金黃色葡萄球菌和白色念珠菌，共6組試驗，按懸液定量殺菌試驗方法進行。結果判定，以第1組有極少量菌生長或無菌生長，第2組菌數超出100 cfu／ml，但明顯少于第3、4、5組，第3、4、5組間菌數的誤差率不超出15%，第6組不長菌，試驗需重復3次，結果一致，表明所選的中和劑及濃度適宜［5］。

1．3 懸液定量殺菌試驗試驗在20℃水浴中進行，試驗消毒劑和菌懸液需預先進行恒溫。在無菌試管中依次加入0．5 ml菌懸液和4．5 ml消毒劑（陽性對照為TPS），混勻。待作用至預定時間后，取0．5 ml上述混合液加入到4．5 ml已滅菌中和劑中再次混勻，中和作用10 min。取0．5 ml樣液接種進行活菌培養(yǎng)計數，試驗重復3次，計算殺滅對數值。

1．4 穩(wěn)定性試驗將該消毒劑原液密封后置于54℃恒溫箱中保存14 d，分別在保存前后進行金黃色葡萄球菌殺滅效果試驗，并對所得數據進行統計學分析，以比較存放前后殺菌效果變化情況。

1．5 手現場消毒試驗隨機選取30名志愿者，試驗前，受試者充分搓擦雙手。用無菌棉拭子在含有10 ml TPS稀釋液的試管中浸濕，對受試者左手指屈側進行涂抹采樣，作為陽性對照組樣本。然后用該消毒劑原液對受試者雙手進行兩遍擦拭消毒，消毒后用中和劑代替稀釋液，再按上述采樣方法對受試者右手指屈側上殘留的自然菌進行涂抹采樣，作為試驗組樣本。將棉拭采樣端剪入盛有5．0 ml中和劑的試管中，充分混勻，取0．5 ml洗脫液進行活菌計數，48 h后觀察結果，計算殺滅對數值。

1．6 統計學處理統計分析時采用SPSS軟件分析，采用t檢驗，以P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 中和劑鑒定試驗效果中和劑鑒定試驗結果見表1。結果表明，中和劑選用10 g／L甘氨酸+10 g／L硫代硫酸鈉+3 g／L卵磷脂的磷酸鹽緩沖液，能有效中和該復方消毒劑對試驗菌的殘留作用，且中和劑及中和產物對試驗菌生長無影響。

表1 消毒劑中和劑鑒定試驗結果

2．2 定量殺菌試驗結果定量殺菌試驗結果表明，該消毒劑作用5 min，對懸液內金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌的平均殺滅對數值均>5．00，作用7．5 min，對白色念珠菌的平均殺滅對數值> 5．00（表2）。

2．3 穩(wěn)定性試驗結果穩(wěn)定性試驗結果表明，該消毒劑原液在54℃保存14 d后，對金黃色葡萄球菌的平均殺滅對數值差異無統計學意義，由此說明保存前后對金黃色葡萄球菌殺菌效果無影響（表3）。

2．4 手現場消毒試驗經手現場消毒試驗結果表明，用該復方中草藥消毒液對手部皮膚擦拭消毒后，對30人次手上自然菌的平均殺滅對數值均> 1．00，消毒合格。

表2 消毒劑殺菌試驗結果

表3 消毒劑放置前后對金黃色葡萄球菌的殺滅效果

3 討論

研究表明，金銀花對金黃色葡萄球菌抑菌作用最為顯著，對大腸桿菌無作用或敏感度較低［6］。野菊花對大腸桿菌抑菌作用最強［7］；牡丹皮中丹皮酚等抑菌有效成分對銅綠假單胞菌抑菌作用最強［8］，對白色念珠菌試驗菌株均有抑菌作用［9］。該研究首次選用以上三種具有廣譜抗菌功效的中草藥進行聯合配伍，提取得到該新型復方消毒劑。中藥復方的優(yōu)勢即中藥配伍后可產生不同的化學和藥理效應，起到協同抑菌作用［10］。該研究殺菌試驗結果表明該消毒劑對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌和白色念珠菌均有不同程度的殺滅作用，且穩(wěn)定性試驗、手現場消毒試驗亦符合消毒技術規(guī)范之要求。下一步還需對其毒性及應用做進一步研究。由于中草藥消毒劑符合安全、高效、不良反應小的要求，因此具有良好的研究開發(fā)前景。

［1］陳佳佳，廖森泰，孫遠明，等．中草藥抑菌活性成分研究進展［J］．中藥材，2011，34（8）：1313－1317．

［2］黃麗華，陳學杰．一種復方手消毒液殺菌效果及毒性的實驗觀察［J］．檢驗醫(yī)學與臨床，2011，8（6）：691－693．

［3］傅飛龍，馬 軍，石鳳敏，等．中草藥消毒劑防治空氣微生物污染的研究［J］．中國醫(yī)藥科學，2013，3（22）：22－26．

［4］邱真真，王莎莎，魯曉晴．新型復方中草藥消毒劑的消毒效果及其殺菌機理研究［J］．中國消毒學雜志，2014，31（3）：231－234．［5］中華人民共和國衛(wèi)生部．消毒技術規(guī)范［S］．2002：19－32．

［6］陳壽妮．金銀花提取液抑菌活性的研究［J］．時珍國醫(yī)國藥，2014，25（3）：609－610．

［7］蔣 雨，陳安均，于 新，等．野菊花提取物抑菌活性［J］．四川農業(yè)大學學報，2010，28（3）：328－332．

［8］杜 凡，李惠芬，王宇歆，等．牡丹皮中丹皮酚、總苷、多糖單用及合用后的協同抑菌作用考查［J］．天津藥學，2008，20（2）：10－12．

［9］倪 玲，肖 蕾，陳 剛，等．中草藥抗白色念珠菌活性成分研究進展［J］．中國消毒學雜志，2014，31（5）：503－505．

［10］梁生旺，王淑美，陳阿麗．中藥配伍前后的化學變化研究及分析方法［J］．河南中醫(yī)學院學報，2007，22（1）：44－46．

［2015-10-14收稿，2015-11-12修回］

［本文編輯：吳 蓉］

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10.14172/j.issn1671-4008.2016.04.022

450064河南鄭州，鄭州澍青醫(yī)學高等?？茖W校（李萍，王慧琴，馬素好，邵南齊）；450000河南鄭州，河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科（李延卿）