可溶性止血紗布止血效果以及安全性評價試驗

目的 研究可溶性止血紗布對兔肝臟創(chuàng)面的止血效果以及安全性。方法 制作兔肝臟出血模型，空白對照組用無菌紗布止血，陽性對照組用泰綾止血，受試組用可溶性止血紗布止血。記錄止血時間，計算出血量，術(shù)后動物進行臨床癥狀觀察，測定肝和腎功能指標，組織病理學(xué)以及透射電鏡檢查。結(jié)果 受試組的出血量減少，止血時間縮短；其他檢查與空白對照組無差異。結(jié)論 未見受試組樣品對兔機體有毒性作用，止血效果較陽性對照組無差異。

可溶性止血紗布；泰綾；止血；安全性

吸收性止血綾（泰綾）為水溶性纖維素醚化衍生物，主要成分是羧甲基纖維素鈉（CMC），具有快速止血、防止術(shù)后粘連及促進組織愈合的作用，是目前常見的新型醫(yī)用止血材料之一[1]。它以止血性能好、可吸收、薄、輕、柔、不易造成組織粘連等特點贏得了外科醫(yī)生的青睞，被廣泛應(yīng)用于普外科、婦產(chǎn)科、心臟外科、胸科、骨科、神經(jīng)外科、泌尿外科等科室手術(shù)中[2-13]。特別是對于凝血功能障礙和實質(zhì)性臟器出血的患者，單單使用常規(guī)外科技術(shù)止血不能起到很好的效果，幫助控制毛細血管、靜脈出血。實驗以泰綾為對照品，對主要成分相同的可溶性止血紗布的止血效果和安全性進行評價研究，為其臨床應(yīng)用止血效果和安全性評價提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

新西蘭兔，雌雄各半，隨機分組，體重1.8～2.2 kg，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供；飼養(yǎng)環(huán)境：溫度：16～26oC；濕度：40%～70%；照明時間：12 h/12 h明暗交替。飼養(yǎng)一周后進行實驗，實驗前一天禁食不禁水。

1.2 實驗樣品

空白對照：醫(yī)用脫脂紗布塊，河南天和衛(wèi)生材料有限公司，規(guī)格：6 cm×8 cm-8P。

實驗樣品：可溶性止血紗布，南陽市久康醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：5 cm×8 cm。

對照樣品：吸收性止血綾（泰綾），北京泰科斯曼科技發(fā)展有限公司，規(guī)格：8 cm×5 cm。

1.3 主要實驗試劑和儀器

主要實驗試劑為：3%戊巴比妥鈉溶液 (默克)；10%甲醛溶液(煙臺市雙雙化工有限公司)；4%的戊二醛溶液 (河北醫(yī)科大學(xué)電鏡室配置)。主要儀器為：AMS-18A全自動生化儀；電子天平(沈陽龍騰電子有限公司)；H-7500 透射電鏡(日立H7500)；高速臺式離心機(sigma3-15)。

1.4 試驗方法

1.4.1 分組

試驗選用36只新西蘭兔，雌雄各半，隨機分為空白對照組（實施手術(shù)采用普通無菌紗布止血）、陽性對照組（吸收性止血綾（泰綾）進行止血）、受試組（可溶性止血紗布進行止血）。

1.4.2 手術(shù)方法

方法[14]，取新西蘭兔稱重，用3%戊巴比妥鈉溶液從新西蘭兔耳緣靜脈實施麻醉，備皮、消毒、打開腹腔，充分暴露右葉肝臟，用手術(shù)刀在右肝同一部位切一十字切口(深度約0.3 cm，長度約0.5 cm)，將樣品(1.5 cm×1.5 cm)敷于創(chuàng)面，輕壓10 s，并同時開始記時，用質(zhì)量相同的干凈濾紙吸取流出的血液，直到血液停止流出，此時停止計時，記錄出血時間；立即稱量吸血后濾紙的總重量，記錄濾紙片數(shù)，根據(jù)公式計算出血量：出血量＝吸血后濾紙總重量－(單片濾紙重量×濾紙片數(shù))，以此來評價其止血效果。術(shù)畢，逐層縫合，消毒，并腹腔注射青霉素，連續(xù)3 d，每天一次。

1.4.3 指標檢測臨床癥狀觀察

1.4.3.1 止血紗布可吸收程度觀察及病理組織學(xué)檢查

上述新西蘭兔分別于術(shù)后1、3、7、10 d各取3只新西蘭兔肝臟，打開腹腔，肉眼觀察樣品的吸收情況和肝臟大體變化。并取創(chuàng)傷部位組織保存于10%甲醛溶液中，送病理組織學(xué)檢查，觀察病理學(xué)改變。同時取三組樣品術(shù)后10 d各兩只新西蘭兔創(chuàng)傷部位組織保存于4%的戊二醛溶液中，送電鏡檢查，觀察細胞的顯微改變。

1.4.3.2 可溶性止血紗布對新西蘭兔肝腎功能的影響

上述新西蘭兔術(shù)后10 d，各組新西蘭兔禁食不禁水12 h后頸動脈取血，應(yīng)用AMS-18A全自動生化儀和試劑盒，分別測定肝功能指標：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，r-谷氨?；D(zhuǎn)移酶(r-GT)，堿性磷酸酶（ALP）和腎功能指標：尿素(BUN)，肌酐(Cr)，尿酸(UA)，比較各組間的差異。具體方法：從新西蘭兔頸動脈采血，血樣于離心管靜置約1 h后放于離心機離心，速度為3 000 r/min，離心15 min，取上清液置試管中。用AMS-18A全自動生化儀按試劑盒要求對肝、腎功能指標進行測定。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用IBM-SPSS20.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理，Excel繪制圖表。實驗結(jié)果以x±s表示，計量資料多組間比較采用方差分析（One-Way ANOVA）進行比較。

2 結(jié)果

2.1 出血時間和出血量

受試組、陽性對照組的出血時間明顯短于空白對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）， 出血量小于空白對照組（P＜0.05）；受試組的出血時間和出血量與陽性對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果表明可溶性止血紗布具有明顯的止血作用，見表1。

表1 止血時間和出血量（x±s，n=12）Tab.1 Hemostasis and blood loss （x±s，n=12）

2.2 血常規(guī)和血液生化指標

表2和表3肝腎功能指標的測定結(jié)果，盡管各組間數(shù)值有差異但是經(jīng)SPSS統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)P＞0.05，即各組間均無顯著性差異。尿酸在各組均未檢測到說明是由于手術(shù)造成的。說明可溶性止血紗布對新西蘭兔肝功能無明顯損害作用，結(jié)果見表2和表3。

表2 血液學(xué)統(tǒng)計結(jié)果（x± s，n=3）Tab.2 Hematology statistics （x± s，n=3）

表3 血清生化學(xué)統(tǒng)計結(jié)果（x± s，n=3）Tab.3 Serum biochemistry statistics（x± s，n=3）

2.3 剖檢及病理學(xué)檢查

剖檢：術(shù)后第1 d，三組樣品創(chuàng)面處有輕度水腫，受試組和陽性對照組的肝臟表面有淺白色未完全吸收的樣品覆蓋；第3，第7和第10 d各組肝臟表面光滑無異物，結(jié)果表明可溶性止血紗布在肝臟表面可被完全吸收。三組部分動物肝右葉與網(wǎng)膜有不同程度的粘連，其他臟器未見樣品相關(guān)的肉眼改變。

病理學(xué)檢查：空白對照組肝細胞輕度或中度水腫，被膜正?；蚵栽龊瘢瑹o纖維增生或略有纖維瘢痕形成。陽性對照組和受試組（圖1）肝細胞輕度或中度水腫變性，被膜增厚，纖維瘢痕形成，有少許或微量異物肉芽腫形成。各實驗組術(shù)后1 d～10 d水腫逐漸減輕，炎癥和壞死組織3 d達到高峰，7 d可見肉芽組織形成，被膜增厚，血管增生，10 d部分組織纖維化。結(jié)果表明可溶性止血紗布雖與空白對照組比較略有差別，但對肝臟的損害并不明顯。

圖1 (×400)受試組術(shù)后1、3、7、10 d的肝臟病理圖片F(xiàn)ig.1 (×400)Liver pathologic image after surgery 1,3,7,10 day in the test group

2.4 透射電鏡檢查

透射電鏡結(jié)果（圖2）顯示，空白對照組、陽性對照組和受試組術(shù)后 10 d肝細胞顯微變化基本相同，核圓核仁可見，核膜連續(xù)完整；線粒體正常，脊可見，有的稍有模糊；核旁見豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；細胞連接正常，有的間隙稍增大；細胞表面有微絨毛突起，有的略為減少，結(jié)果表明可溶性止血紗布可吸收止血紗布對肝細胞顯微結(jié)構(gòu)無明顯的影響。

3 討論

可溶性止血材料的主要成分是羧甲基纖維素鈉（CMC），與市面上銷售的可吸收性止血綾（泰綾）以及美國強生公司的止血材料—速即紗（Surgicel）主要成分相同。CMC 是一種可降解的生物高分子材料，能夠在生物體內(nèi)經(jīng)水解、酶解等過程，逐漸降解成低分子量化合物或單體，降解產(chǎn)物能參加體內(nèi)正常新陳代謝而消失。CMC 早已被用于食品、醫(yī)藥、化妝品工業(yè)中，并且國內(nèi)外大量的動物及臨床試驗證明可明顯減少手術(shù)后腹膜粘連的形成[15-18]。

圖2 透射電鏡結(jié)果Fig.2 Images by transmission electron microscopy

研究發(fā)現(xiàn)該類的止血材料通過物理、化學(xué)、生理三個途徑止血：1）吸收分泌液，形成凝膠，為血凝塊提供基礎(chǔ)，與血液接觸后迅速膨大，具有機械的阻塞作用；2）為血小板與血小板的相互黏著提供機械框架結(jié)構(gòu)，在出血部位促進血栓形成；3）溶解后可形成帶負電的膠粒，加速啟動內(nèi)源性凝血系統(tǒng)；4）可以激活內(nèi)源性凝血因子[19-21]。

實驗結(jié)果提示，可溶性止血紗布對新西蘭兔肝臟損傷后出血能產(chǎn)生明顯的止血作用，使出血時間較空白對照組顯著縮短，出血量明顯減少，其效果與泰綾的止血作用沒有明顯差異。同時其在體內(nèi)可被較快吸收，其中在肝臟表面3 d后可被完全吸收。因此術(shù)后無需取出，應(yīng)用于臨床將可以大大簡化手術(shù)過程 ，減少病人痛苦。肝功能和腎功能指標除尿酸外均無顯著性差異，由此可見，可溶性止血紗布對新西蘭兔肝腎功能尚未造成明顯影響。為進一步驗證其安全性，該實驗還進一步對新西蘭兔的肝臟進行病理切片和透射電鏡觀察，對肝臟組織和肝細胞顯微結(jié)構(gòu)做進一步的研究分析。肝臟病理組織學(xué)檢查結(jié)果表明可溶性止血紗布可溶性止血紗布雖與空白對照組比較略有差別，但對肝臟的損害并不明顯。透射電鏡結(jié)果表明可溶性止血紗布對肝細胞顯微結(jié)構(gòu)無明顯的影響。

Kheiraba認為理想的止血材料應(yīng)具備以下特點：被權(quán)威的機構(gòu)批準認可；對嚴重的動脈靜脈出血能快速止血（小于2 min）；沒有系統(tǒng)和局部毒性；應(yīng)用時無痛或造成燒傷；對單獨應(yīng)用的藥物和敷料無影響；堅固且輕盈；能輕松包扎和移除；能在嚴峻的條件下使用如光線弱或者下雨；不單單對包扎處的傷口有效；貯藏時間長（大于2年）；性價比高；生物可降解吸收[22]。目前尚沒有止血材料符合所有的條件，因此只有在充分了解各種止血材料性能的基礎(chǔ)上合理選擇使用止血材料，才能在臨床工作中起到事半功倍的效果。

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【作 者】徐玉茵1，周小婷1，柳小軍1，田林奇1，田源2
1 河南省醫(yī)療器械檢驗所，鄭州市，450000
2 南陽市久康醫(yī)療器械有限公司，南陽市，473000

The Hemostatic Effect and Safety Evaluation Tests of Soluble Hemostatic Gauze

【 Writers 】XU Yuyin1, ZHOU Xiaoting1, LIU Xiaojun1, TIAN Linqi1, TIAN Yuan2
1 Henan Medical Equipment Inspection Institute, Zhengzhou, 450000
2 Nanyang Jiukang Medical Equipment Co.Ltd., Nanyang, 473000

Objective The aim of this paper is to study the hemostasis and security of soluble hemostatic gauze in the rabbit liver hemorrhage model. Methods After making the rabbit liver hemorrhage model, the control group used sterile gauze to stop bleeding, the positive control group used TISTAT to stop bleeding, the test group used soluble hemostatic gauze to stop bleeding. Hemostasis, blood loss and animal clinical symptoms were measured. Liver and kidney parameters, along with histopathology were recorded and analyzed. Transmission electron microscopy examination was also done. Results The blood loss is cut back and hemostasis is shortened in the test group. Other tests have no difference with the control group. Conclusion No toxic effects on rabbit are found in the test group. The hemostatic effects have no difference with positive control group.

soluble hemostatic gauze, TISTAT, hemostasis, security

R605

A

10.3969/j.issn.1671-7104.2016.05.013

1671-7104(2016)05-0441-04

2016-05-06

徐玉茵，E-mail: 137368469@qq.com