王荻，廉超，劉紅柏

（1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070；2.即墨市海洋與漁業(yè)局，山東 青島 266200）

中草藥添加劑對(duì)施氏鱘生長及血液生化指標(biāo)的影響

王荻1，廉超2，劉紅柏1

（1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070；2.即墨市海洋與漁業(yè)局，山東 青島 266200）

在22℃下，采用口灌法研究當(dāng)歸、魚腥草及自制中草藥復(fù)方（方四）的水煎劑對(duì)1+齡施氏鱘Acipenser schrenckii生長及血清中酶活性及活性物質(zhì)含量的影響。將施氏鱘飼養(yǎng)在循環(huán)水族箱中，每組兩個(gè)平行，每個(gè)平行30尾魚，按照當(dāng)歸、魚腥草及方四分別為0.3g/kg、0.54g/kg、0.8g/kg體質(zhì)量的給藥劑量每日口灌給藥1次，連續(xù)給藥14d，以口灌蒸餾水為對(duì)照組。停藥24h后，每組取半數(shù)鱘在高溫30℃下熱刺激2h，然后與常溫組同時(shí)尾動(dòng)（靜）脈采血，測(cè)定血清中總膽紅素、甘油三酯含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶等酶的活性及魚的體質(zhì)量。結(jié)果表明：當(dāng)歸及魚腥草不能有效促進(jìn)鱘生長；高溫?zé)岽碳ぜ又亓索\肝腎的負(fù)擔(dān)，損傷了肝功能；而方四顯著提高了鱘的生長性能，在高溫?zé)岽碳は?，仍能顯著降低鱘血液中尿素、肌酐等物質(zhì)的含量，具有一定的保肝護(hù)腎功能，可作為鱘抗熱應(yīng)激中草藥添加劑的備選方劑。

當(dāng)歸；魚腥草；方四；施氏鱘

中草藥富含生物堿、多糖、皂甙、蒽類、揮發(fā)油、有機(jī)酸等多種物質(zhì)，可有效調(diào)節(jié)機(jī)體健康狀況，改善機(jī)體免疫功能[1]，具抗病和營養(yǎng)的雙重作用。天然藥用植物具有來源豐富、低毒、低殘留、耐藥性不顯著等優(yōu)點(diǎn)[2]，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中已廣泛應(yīng)用[3]。中草藥種類繁多、配伍多樣，可針對(duì)不同物種及作用目的采用多種單方或復(fù)方。

鱘是現(xiàn)存魚類中最古老、最原始的種類之一，素有“活化石”之稱[4]，加之體態(tài)優(yōu)美、營養(yǎng)豐富，更有“黑色黃金”美譽(yù)的鱘魚籽醬，成為世界上利潤較高的產(chǎn)業(yè)之一[5]。中國作為世界上最大的鱘養(yǎng)殖國，2011年養(yǎng)殖量占世界鱘養(yǎng)殖總產(chǎn)量的84.97%，2012年鱘魚籽醬的產(chǎn)量高達(dá)28.88t[6]。

魚類是變溫動(dòng)物，生理活動(dòng)受水溫影響較大[7]，而目前養(yǎng)殖過程中環(huán)境污染、高溫運(yùn)輸?shù)炔豢杀苊獾那闆r時(shí)有發(fā)生，故而篩選適用于鱘的中草藥添加劑具有切實(shí)的應(yīng)用價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。當(dāng)歸Angelica sinensis為《神農(nóng)本草經(jīng)》記載的無毒上品藥，富含苯酞類、酚酸類、多糖、黃酮等多種化學(xué)成分，具有補(bǔ)血調(diào)血、抗癌免疫功效[8]。魚腥草Houttuynia cordata是中國藥典收錄的具有清熱解毒、健胃消食等功效的草藥[9]。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明，魚腥草還具有抗菌、抗病毒、提高機(jī)體免疫力等作用。本文選取當(dāng)歸、魚腥草及自制復(fù)方中草藥方劑，采用口灌法研究這些中草藥水煎劑對(duì)1+齡施氏鱘Acipenser schrenckii生長及血清中酶活性及活性物質(zhì)含量的影響，以篩選適于鱘使用的飼料添加劑。

1 材料與方法

1.1 材料

健康非免疫狀態(tài)的1+齡施氏鱘購自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院鱘魚繁育技術(shù)工程中心；實(shí)驗(yàn)用中草藥購自哈藥集團(tuán)世一堂藥店，烘干粉碎后備用。

1.2 方法

1.2.1 中藥水煎劑的制備

準(zhǔn)確計(jì)算、稱取魚腥草、當(dāng)歸及自制復(fù)方方四（以黨參 Codonopsis pilosula、白術(shù) Atractylodes macrocephala為主藥，茯苓Poria cocos、當(dāng)歸等為輔藥），放入砂鍋中，加水浸泡30min，分別以45min和30min熬制兩次，合并所得藥汁后濃縮成100mL，1mL藥液相當(dāng)于1g藥方（干物質(zhì)），高壓滅菌后存放于4℃冰箱中備用。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

每個(gè)受試組設(shè)兩個(gè)平行，每個(gè)平行30尾鱘，于室內(nèi)22℃循環(huán)水族箱中預(yù)飼兩周，每天按魚體質(zhì)量的2.0%投喂全價(jià)基礎(chǔ)飼料。

預(yù)飼結(jié)束后，按當(dāng)歸0.3g/kg、魚腥草0.54g/kg、方四0.8g/kg體質(zhì)量的劑量給鱘連續(xù)口灌14d，期間定期測(cè)定鱘體質(zhì)量。給藥結(jié)束時(shí)，取半數(shù)鱘于30℃控溫水族箱中熱刺激2h，尾動(dòng)（靜）脈采血，4℃4000r/min離心10min分離血清后，立即保存于-80℃冰箱中。

1.2.3 指標(biāo)檢測(cè)

用Beckman公司生產(chǎn)的CYNCHRON CH4PRO全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)鱘血清中相關(guān)活性物質(zhì)含量及酶活性。檢測(cè)指標(biāo)包括：總蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、總膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、乳酸脫氫酶、尿素氮、肌酐、尿酸，及谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶比值（谷丙∶谷草）、尿素氮和肌酐比值（尿素氮∶肌酐）。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

測(cè)定數(shù)據(jù)用SPSS軟件最小顯著差數(shù)法（LSD）進(jìn)行處理；生化指標(biāo)采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件中的單因子方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，用鄧肯氏法進(jìn)行多重比較。

表1 受試鱘體質(zhì)量的增加Tab.1 The increase in body weight of the experimental Amur sturgeon

2 結(jié)果與分析

2.1 受試鱘體質(zhì)量變化情況

實(shí)驗(yàn)過程中，連續(xù)記錄受試鱘的體質(zhì)量（表1）。鱘的終末體質(zhì)量和給藥14d時(shí)增重率最大值均出現(xiàn)在方四組。初始體質(zhì)量無顯著性差異的4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，經(jīng)連續(xù)口灌給藥14d后，終末體質(zhì)量出現(xiàn)顯著性變化，對(duì)照組和方四組鱘體質(zhì)量顯著高于當(dāng)歸組和魚腥草組。方四組鱘7d時(shí)增重率顯著低于對(duì)照組，10d時(shí)兩組無顯著性差異，14d時(shí)顯著高于對(duì)照組。

2.2 受試鱘血清中酶活性變化

常溫下，各組鱘血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶活性，及谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶比值（谷丙∶谷草）的變化情況見表2。鱘血清中4種酶活性由高至低為：乳酸脫氫酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶。谷草轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶的最高值均出現(xiàn)在方四組，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶的最大值均出現(xiàn)在當(dāng)歸組，而各實(shí)驗(yàn)組鱘血清中所測(cè)酶的活性均未呈顯著性差異。

高溫?zé)釕?yīng)激后，各組受試鱘血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶活性及谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶比值（谷丙∶谷草）的變化情況見表3。高溫?zé)釕?yīng)激2h后，鱘血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶和乳酸脫氫酶活性均略有上升，而谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性則大幅下降，谷丙∶谷草值顯著上升。當(dāng)歸組及魚腥草組鱘血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶均顯著或極顯著高于對(duì)照組，而堿性磷酸酶則顯著低于對(duì)照組。方四組鱘4種酶活性均與對(duì)照組差異顯著。

2.3 受試鱘血清中活性物質(zhì)含量的變化

常溫下，各組鱘血清中總膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、尿素氮、肌酐、尿酸含量，及尿素氮和肌酐比值（尿素氮∶肌酐）的變化情況見表4。方四組僅尿素氮含量顯著低于對(duì)照組；當(dāng)歸組除尿素氮含量顯著低于對(duì)照組外，總膽紅素、尿酸含量均顯著高于對(duì)照組；魚腥草組甘油三酯、總膽固醇、肌酐含量均顯著低于對(duì)照組。

表2 常溫組受試鱘血清中酶活性變化Tab.2 The changes in enzyme activities in serum of experimental fish at normal temperature

表3 熱應(yīng)激組受試鱘血清中酶活性變化Tab.3 The changes in enzyme activities in serum of experimental fish at high temperature

表4 常溫組受試鱘血清中活性物質(zhì)含量變化Tab.4 The changes in active substance contents in serum of experimental fish at normal temperature

表5 熱應(yīng)激組受試鱘血清中活性物質(zhì)含量變化Tab.5 The change of active substance contents in serum of experimental fish at high temperature

高溫?zé)釕?yīng)激后，各組鱘血清中總膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、尿素氮、肌酐、尿酸含量，及尿素氮和肌酐比值（尿素氮∶肌酐）的變化情況見表5。與常溫條件下相比，對(duì)照組、方四組和魚腥草組各項(xiàng)測(cè)定指標(biāo)均有所上升；而當(dāng)歸組甘油三酯、肌酐和尿酸含量略有下降。由表5可知，方四組甘油三酯含量顯著高于對(duì)照組，而尿素氮?jiǎng)t顯著低于對(duì)照組；當(dāng)歸組總膽紅素含量顯著高于對(duì)照組，而尿素氮和肌酐含量顯著低于對(duì)照組；而魚腥草組僅肌酐與對(duì)照組差異顯著。

3 討論

有學(xué)者認(rèn)為“疾病是生物體內(nèi)‘生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物’（BRM）被致病因素破壞，導(dǎo)致動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)而引起的，若使機(jī)體BRM恢復(fù)正常即可痊愈”，并提出可通過體外補(bǔ)充、吸收藥物誘導(dǎo)或活化機(jī)體的BRM系統(tǒng)，使其恢復(fù)正常[10]。中草藥富含多種有效活性成分，其補(bǔ)益性質(zhì)以雙向調(diào)節(jié)為主要特征，促進(jìn)機(jī)體回復(fù)正常平衡[11]。

3.1 中草藥添加劑對(duì)施氏鱘生長的影響

中草藥添加劑含有多種營養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)，可促消化，誘攝食，有效提高魚類的生長[12,13]；也可增加魚類肌肉粗蛋白含量，提高鮮味氨基酸和脂肪酸含量，增加肌肉風(fēng)味，改善肌肉品質(zhì)[3,14,15]，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用廣泛。

當(dāng)歸味甘、辛、微苦，魚腥草有腥臭味，單味草藥使用時(shí)，會(huì)影響鱘的攝食欲，因而2個(gè)實(shí)驗(yàn)組鱘的增重率一直顯著或極顯著低于對(duì)照組。這與劉紅柏等[16]和宿斌等[17]報(bào)道的魚腥草與當(dāng)歸對(duì)魚類生長無顯著促進(jìn)作用相同。而復(fù)方制劑方四組中，鱘的增重率不斷提升，7d時(shí)顯著低于對(duì)照組，10d時(shí)持平，14d時(shí)已顯著高于對(duì)照組。這表明鱘適應(yīng)方四后，生長顯著提高，但促生長機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。

3.2 中草藥添加劑對(duì)施氏鱘血清中酶活性的影響

常溫下，3種中草藥方劑均未顯著影響鱘血清中各種酶的活性，維持了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。高溫?zé)岽碳ず?，鱘各項(xiàng)指標(biāo)受到中草藥方劑的影響，尤其是當(dāng)歸組和魚腥草組顯著提高了鱘體內(nèi)谷草轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶活性，降低了堿性磷酸酶活性；而方四組則抑制了血清中2種轉(zhuǎn)氨酶活性的上升。谷丙和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性及谷丙∶谷草值可作為肝損傷的指示物，魚體受到急性應(yīng)激時(shí)，肝臟受損，血清中酶活力顯著上升，谷丙∶谷草值增大[18]。熱刺激下，灌服當(dāng)歸、魚腥草可能進(jìn)一步加重肝的代謝負(fù)擔(dān)，造成功能損傷，而方四在高溫應(yīng)激下具有一定的保肝、護(hù)肝功能。

3.3 中藥方劑對(duì)施氏鱘血清中活性物質(zhì)含量的影響

魚類對(duì)溫度變化有一定的適應(yīng)能力，但過高或過低的溫度刺激依然會(huì)引起水產(chǎn)動(dòng)物血液生理生化指標(biāo)的變化[19,20]。膽紅素主要由衰老的紅細(xì)胞在肝、脾和骨髓等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)內(nèi)破壞降解生成，通過肝腸循環(huán)排出體外。血液中總膽紅素含量的變化可指示肝的受損情況[21]。尿素是蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的終產(chǎn)物，尿酸是嘌呤分解代謝產(chǎn)物，肌酐是肌肉組織中儲(chǔ)能物質(zhì)肌酸的代謝終產(chǎn)物，血液中尿素、尿酸和肌酐含量均可用于指示腎臟功能的受損情況[22]。本實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)歸組和魚腥草組未取得較好的保肝護(hù)腎效果，但方四組在常溫條件下能顯著降低鱘血清中尿素氮含量，高溫?zé)岽碳は履苡行б种蒲逯心蛩氐图◆康纳叨Ｗo(hù)腎臟。

綜上所述，自制中草藥復(fù)方四，能顯著提高鱘生長性能，在高溫刺激下，具有保肝護(hù)腎功能，可作為鱘抗熱應(yīng)激中草藥添加劑的備選方劑。

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Effects of Chinese Herbal Additives on Growth and Serum Biochemical Parameters in Amur sturgeon（Acipenser schrenckii）

WANG Di1,LIN Chao2,LIU Hong-bai1
（1.Heilongjiang River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070,China；2.Jimo Ocean and Fisheries Bureau,Qingdao 266200,China）

The effects of Chinese herbal additives including Angelica sinensis,Houttuynia cordata and prescription IV（PIV）on growth and serum biochemical parameters were investigated in 1+years old Amur sturgeon（Acipenser schrenckii）oral administration of the Chinese herbal decoction at water temperature of 22℃.The Amur sturgeon juveniles were reared in tanks at a rate of 30 fish per tank and orally administrated decoction of Angelica sinensis,Houttuynia cordata and PIV at a dosage of 0.3 g/kg,0.54 g/kg and 0.8 g/kg once a day with distilled water control group with duplication for 14 d.At the withdrawal of 24 h,half of fish in each group were thermally stimulated at 30℃for 2 h and then the blood samples were collected from caudal arteries（veins）together in the experimental groups at 22℃for detection of contents of total bilirubin and triglyceride in serum and the activities of glutamic-pyruvic transferase and other enzymes.The results showed that promoted growth was not observed in the experimental fish with oral administration of Angelica sinensis and Houttuynia cordata,and that disorder of liver and kidney function was found in the experimental fish under thermal stimulation.However,significantly good growth performance and lower contents of urea and creatinine in blood were observed in the fish with oral administration of PIV,indicating that the PIV led to protection of liver and kidney functions and could be used as the candidates of anti-thermal stress Chinese herbal additives.

Angelica sinensis;Houttuynia cordata;prescription IV;Amur sturgeon

S948

A

1005-3832（2016）03-0016-05

2016-03-22

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)（201203085）.

王荻（1980-），女，助研，博士研究生，從事魚類病害及免疫研究.E-mail:wangdi_2014@163.com

劉紅柏.E-mail:liuhongbai@sina.com