馬兵兵 盧輝俊 胡亞立 趙曉溪

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫人民醫(yī)院，江蘇 無錫 214023)

硫化氫通過下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-1保持下肢深靜脈血栓摘取術(shù)后血管通暢

馬兵兵 盧輝俊 胡亞立 趙曉溪

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫人民醫(yī)院，江蘇 無錫 214023)

目的研究下肢深靜脈血栓摘取術(shù)后，應(yīng)用硫化氫(H2S)對維持下肢深靜脈血管管腔通暢的作用及其機(jī)制。方法 34例老年下肢深靜脈血栓患者，實施下肢深靜脈血栓摘取術(shù)后，隨機(jī)分為抗凝血對照組和抗凝血+H2S治療組?？鼓獙φ战M每天口服2.5～5 mg華法林鈉片；抗凝血+H2S治療組除了每天口服華法林鈉片外，尚每天口服1 mg硫氫化鈉片。每組持續(xù)服藥8 w后進(jìn)行血管造影，觀察手術(shù)區(qū)血管腔面積變化，ELISA檢測患者血清MMP-1，以及羥脯氨酸的含量變化。結(jié)果 與抗凝血對照組相比，抗凝血+H2S治療組血管管腔面積顯著增加(P<0.01)；抗凝血+H2S治療組MMP-1含量比術(shù)前明顯降低(P<0.01)，羥脯氨酸含量比術(shù)前明顯降低(P<0.01)。結(jié)論 H2S通過下調(diào)MMP-1的表達(dá)、降低膠原蛋白的含量而維持下肢深靜脈血栓摘取術(shù)后血管通暢，防止血管再狹窄。

硫化氫；外周動脈血管成形術(shù)；羥脯氨酸；下肢深靜脈血栓

近年來,由于飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣的變化，導(dǎo)致血管出現(xiàn)血栓等血管閉塞性病變的發(fā)病率不斷上升，嚴(yán)重威脅老年患者的生命安全〔1〕。雖然已有溶栓、手術(shù)、抗凝等各種治療方案，但是效果并不十分明顯，而且副作用較大。硫化氫(H2S)廣泛參與人體新陳代謝、能量轉(zhuǎn)化等重要生理過程，并拮抗血管損傷，對心血管系統(tǒng)具有保護(hù)效應(yīng)〔2〕；但對下肢深靜脈血栓術(shù)后血管管腔的影響研究較少。本研究擬觀察H2S對外周血管成形術(shù)后管腔再狹窄的影響，并探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 一般資料 我院2013～2015年收治的34例下肢深靜脈血栓患者，男19例，女12例，平均年齡(58.6±2.35)歲。排除糖尿病、心臟病、血液病、腫瘤等疾病，術(shù)前未進(jìn)行相關(guān)治療。所有患者實施下肢深靜脈血栓摘取術(shù)后，隨機(jī)分為抗凝血對照組和抗凝血+H2S治療組。各組病例的年齡、生活習(xí)慣、疾病史等無明顯差異?？鼓獙φ战M每天口服2.5～5 mg華法林鈉片(上海福達(dá)制藥有限公司)，抗凝血+H2S治療組在此基礎(chǔ)上每天加用口服1 mg硫氫化鈉片(上海福達(dá)制藥有限公司)。每組持續(xù)服藥8 w?；颊咭约凹覍倬橥狻?/p>

1.2 方法

1.2.1 血管管腔面積 兩組病例進(jìn)行血管造影檢查，計算管腔面積。

1.2.2 羥脯胺酸含量測定 兩組術(shù)前及治療后第8周抽取靜脈血，按照羥脯胺酸試劑盒(美國R&D公司)說明書嚴(yán)格操作，分光光度計比色，560 nm波長讀取吸光度，計算羥脯氨酸含量。

1.2.3 ELISA檢測基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-1蛋白表達(dá) 按照ELISA試劑盒(美國R&D公司)說明書嚴(yán)格操作，檢測血液中MMP-1、TIMP-1蛋白變化。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS18.0軟件行t檢驗。

2 結(jié) 果

與術(shù)前相比，兩組血管管腔面積均明顯增加羥脯氨酸基質(zhì)金屬蛋白酶含量降低(P<0.01)；與抗凝血對照組相比，抗凝血+H2S治療組血管管腔面積顯著增加羥脯氨酸基質(zhì)金屬蛋白酶含量降低(P<0.01)。見表1。

組別n血管管腔面積(mm2)羥脯氨酸(mmol/L)MMP?1蛋白(μmol/L)術(shù)前348 31±1 210 653±0 0980 642±0 127抗凝血治療組1759 19±1 471)0 532±0 1071)1 634±0 1041)抗凝血+H2S治療組1760 04±1 181)2)0 331±0 0761)2)3 577±0 1331)2)

與術(shù)前比較：1)P<0.01;與抗凝血治療組比較：2)P<0.01

3 討 論

由于老年人活動少、血管彈性降低等原因，下肢靜脈血栓多生發(fā)在老年患者。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的不斷深入和臨床治療技術(shù)的迅猛發(fā)展，經(jīng)靜脈血栓摘除術(shù)已經(jīng)成為挽救眾多下肢靜脈血栓患者生命的重要手段。但是術(shù)后出現(xiàn)的靜脈壁變薄、彈性降低、管腔狹窄等問題一直困擾著醫(yī)學(xué)界?；谙轮铎o脈血栓摘除術(shù)后再狹窄的病理改變是血管中膜層的膠原蛋白分泌增多導(dǎo)致的血管管腔狹窄，因此尋找抑制膠原蛋白增多的辦法有可能對外周血管成形術(shù)后再狹窄的發(fā)生具有重要意義。

細(xì)胞生長的重要微環(huán)境依賴于細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)形成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)和其內(nèi)的眾多細(xì)胞因子的影響，膠原蛋白是構(gòu)成ECM的重要組成部分〔3〕。造成膠原蛋白增多的主要原因是MMP和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMP)比例失調(diào)。正常生理狀態(tài)下，MMPs/TIMPs比例為1∶1，MMPs主要作用是降解膠原蛋白，TIMPs則對膠原蛋白具有保護(hù)作用，二者動態(tài)調(diào)控著ECM和膠原蛋白、彈性纖維、硫酸軟骨素等蛋白的合成和降解，若MMPs/TIMPs比例失調(diào)，則會出現(xiàn)膠原蛋白合成和降解失衡，導(dǎo)致器官或組織的纖維化疾病〔4〕。MMPs活性增強(qiáng)也可以引起膠原蛋白降解和變性，從而導(dǎo)致組織或器官的間質(zhì)出現(xiàn)纖維化改變。MMP-1作為MMPs家族重要成員，參與心血管系統(tǒng)ECM和膠原蛋白的代謝活動〔5〕。羥脯氨酸作為膠原蛋白的重要組成成分，其含量可以間接反映細(xì)胞外基質(zhì)中膠原蛋白的含量變化，是測定膠原蛋白含量的重要指標(biāo)，因此，本文檢測羥脯氨酸而確定膠原蛋白的含量。

H2S參與了多種細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)及心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，尤其是對心血管組織的重塑具有重要意義〔6〕。本實驗發(fā)現(xiàn)，給予H2S的抗凝血+H2S治療組，下肢深靜脈血栓摘除術(shù)后的靜脈管腔明顯比對照組增大，這可能是由于血管的中膜層膠原蛋白含量發(fā)生變化。由于H2S通過下調(diào)MMP-1表達(dá)水平，糾正了MMP/TIMP表達(dá)失衡，進(jìn)而減輕外周血管成形術(shù)損傷后的血管內(nèi)膠原蛋白含量，進(jìn)而有利于維護(hù)血管管腔的通暢性。研究發(fā)現(xiàn)，H2S可下調(diào)肝癌細(xì)胞中MMP-9、MMP-2的表達(dá)，對抑制肝臟腫瘤細(xì)胞遷移具有重要意義〔7〕;并發(fā)現(xiàn)H2S通過下調(diào)MMP-1表達(dá)，對改善心肌纖維化、逆轉(zhuǎn)心臟功能具有重要作用〔8〕。

綜上，H2S發(fā)揮調(diào)節(jié)ECM的效果，對抑制組織或器官纖維化、改善器官功能具有重要意義。關(guān)于H2S在下肢深靜脈血栓摘除術(shù)的作用機(jī)制，不排除H2S與MAPK/Erk信號通路有關(guān)〔9〕，關(guān)于H2S在血管中的作用還需要進(jìn)一步研究。

1 王宏宇.中國血管醫(yī)學(xué)學(xué)科的形成與發(fā)展趨勢〔J〕.解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2014;39(7)：513-6.

2 張紀(jì)存,柳云恩,王文越,等.硫化氫對心力衰竭發(fā)生發(fā)展影響的研究進(jìn)展〔J〕.臨床心血管病雜志,2014;30(5)：371-3.

3 袁發(fā)煥.細(xì)胞外基質(zhì),基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制因子的研究進(jìn)展〔J〕.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2000;38(2)：62-5.

4 李珍美玉,顧 蕓,易 晟.細(xì)胞外基質(zhì)在組織工程中的應(yīng)用〔J〕.交通醫(yī)學(xué),2014;28(5)：425-9.

5 陳華江,王杰軍.基質(zhì)金屬蛋白酶的結(jié)構(gòu)及其調(diào)節(jié)機(jī)制〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志,2001;28(1)：20-3.

6 鄧 平,趙正春.硫化氫與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.中國心血管雜志,2013;18(2)：146-8.

7 陳 寧,王珊珊,陳玉涵,等.外源性硫化氫對肝癌細(xì)胞系HepG2自噬的影響〔J〕.首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2015;36(1)：116-20.

8 張巧麗,杜軍保.氣體信號分子硫化氫與心血管疾病研究進(jìn)展〔J〕.實用兒科臨床雜志,2010;25(1)：63-71.

9 李 芳,曾 歐,羅 健,等.硫化氫對糖尿病大鼠心肌纖維化及MAPK1/3和MMP-8表達(dá)的影響〔J〕.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2015;35(4)：549-52.

〔2016-01-15修回〕

(編輯 曲 莉)

南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫人民醫(yī)院基金項目(YT201310)

趙曉溪(1982-),女,碩士,主治醫(yī)師,主要從事心血管疾病發(fā)病機(jī)制研究。

馬兵兵(1982-),男,博士,主治醫(yī)師,主要從事心血管外科疾病發(fā)病機(jī)制研究。

R541.4

A

1005-9202(2016)24-6218-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.082