馬建贏 胡如進(jìn) 柯立池 馮紅芳 劉 鋼 唐燕華

(鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院(湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院)乳甲外科，湖北 黃石 435000)

Ras相關(guān)區(qū)域1A基因異常甲基化與甲狀腺癌關(guān)聯(lián)的Meta分析

馬建贏 胡如進(jìn) 柯立池 馮紅芳 劉 鋼 唐燕華1

(鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石市中心醫(yī)院(湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院)乳甲外科，湖北 黃石 435000)

目的 應(yīng)用meta分析的方法對比已經(jīng)在國內(nèi)外公開發(fā)表的關(guān)于Ras相關(guān)區(qū)域1A(RASSF1A)基因異常甲基化與甲狀腺癌的臨床綜合研究。方法 采用Cochrane系統(tǒng)評價方法，計算機(jī)檢索pubmed，EMBASE,MEDLINE,Cochrane協(xié)作網(wǎng)數(shù)據(jù)庫，中國生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫，萬方數(shù)據(jù)庫等數(shù)據(jù)庫的文獻(xiàn)，收集有關(guān)比較RASSF1A基因異常甲基化與甲狀腺癌的對照研究實驗，并評價入選研究的質(zhì)量。結(jié)果 共納入符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)11篇，共803例患者，且11篇均為臨床對照實驗(CCT)。Meta分析結(jié)果顯示：與對照組相比，甲狀腺乳頭狀癌組的RASSF1A基因甲基化率高于對照組(95%CI：1.51～11.27，P<0.05)。但RASSF1A基因甲基化與甲狀腺癌的性別無統(tǒng)計學(xué)差異(OR=0.61，95%CI：0.21～1.35，P>0.05)。RASSF1A基因甲基化在50歲分界組無統(tǒng)計學(xué)意義，但RASSF1A基因甲基化在40歲分界組有統(tǒng)計學(xué)意義，即>40歲組RASSF1A基因甲基化表達(dá)增加(95%CI：1.38～6.73，P<0.05)。RASSF1A基因甲基化與甲狀腺癌的浸潤與轉(zhuǎn)移有統(tǒng)計學(xué)差異(OR=4.03，95%CI：1.39～11.75，P<0.05)。結(jié)論 RASSF1A甲基化是甲狀腺乳頭狀癌的危險因素，在甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用；RASSF1A甲基化與性別無明顯相關(guān)性，甲狀腺癌浸潤轉(zhuǎn)移組的RASSF1A基因甲基化陽性率高于與無浸潤轉(zhuǎn)移組，但與年齡相關(guān)性仍然需要大樣本多中心的研究。

甲狀腺腫瘤；乳頭狀甲狀腺癌；DNA甲基化；RASSF1A;Meta分析

甲狀腺癌根據(jù)組織類型不同分為甲狀腺乳頭狀癌(PTC)、甲狀腺濾泡狀癌(FTC)、髓樣癌(MTC)、未分化癌(UTC)。其中PTC是最常見的一種類型。國內(nèi)數(shù)據(jù)提示PTC占成人甲狀腺癌的60%和兒童甲狀腺癌的全部。美國一項研究數(shù)據(jù)提示PTC占所有甲狀腺癌的85%〔1〕，盡管PTC惡性程度較低，但是近年來甲狀腺癌的發(fā)病率越來越高〔2〕。DNA甲基化被認(rèn)為與PTC有密切的關(guān)系〔3〕。本文采用Meta分析方法，系統(tǒng)性比較Ras相關(guān)區(qū)域1A(RASSF1A)基因異常甲基化與甲狀腺癌的關(guān)聯(lián)，以期對于高危人群的篩選以及甲狀腺癌的早診斷起到積極的參考作用。

1 材料與方法

1.1 文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn) (1)研究類型：臨床對照實驗(CCT)或隨機(jī)對照試驗，若數(shù)據(jù)符合病例對照設(shè)計的要求亦可，語種與時間不受限制；(2)研究樣本：甲狀腺癌組織標(biāo)本均通過術(shù)后的病理檢查確診，對照組則為癌旁組織或者良性的甲狀腺組織、正常的甲狀腺組織；(3)所有研究關(guān)于RASSF1A基因甲基化與PTC相關(guān)性的文獻(xiàn)；(4)所有納入的文獻(xiàn)都有數(shù)據(jù)提供，若數(shù)據(jù)不全，則聯(lián)系作者獲取相關(guān)數(shù)據(jù)。

1.1.2 文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn) (1)甲狀腺癌的診斷無病理診斷作為依據(jù)；(2)缺乏明確的RASSF1A基因甲基化的檢測方法；(3)綜述，動物實驗，案例報道除外；(4)重復(fù)發(fā)表，資料不完整的文獻(xiàn)；(5)非對照試驗研究。

1.2 檢索策略 計算機(jī)檢索Cochrane 圖書館、中國知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)庫、CBM、pubmed及Medline、EMBASE數(shù)據(jù)庫，收集2016年2月以前發(fā)表的關(guān)于RASSF1A基因異常甲基化與甲狀腺癌關(guān)聯(lián)的文獻(xiàn)，中文檢索詞包括：甲狀腺腫瘤；PTC；基因；DNA甲基化；RASSF1A；Meta分析。英文檢索詞包括：thyroid cancer;papillary thyroid carcinoma;gene;DNA methylation;RASSF1A;meta analysis。

1.3 資料提取 2名研究者獨立獲取相關(guān)信息，然后交叉互相核查結(jié)果。如果遇分歧，則協(xié)商解決。內(nèi)容主要包括基本信息(題目、出處、第一作者、單位，發(fā)表日期)、研究方法學(xué)特征、研究對象特征(樣本量的大小、年齡、性別、病理組織學(xué)類型、腫瘤分期)等。

1.4 文獻(xiàn)質(zhì)量評價 隨機(jī)對照試驗參照Cochrane Reviewer Handbook 5.1偏倚風(fēng)險評估標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)量評價，包括隨機(jī)序列生成、分配隱藏、盲法、數(shù)據(jù)不完整、選擇性報告結(jié)果、其他可能的偏倚等。非隨機(jī)對照研究用Cochrane協(xié)作網(wǎng)推薦的偏倚風(fēng)險評估方法(NOS)進(jìn)行質(zhì)量評價，包括組間可比性和結(jié)果評價。如NOS量表評分≥6分，則認(rèn)為該質(zhì)量較高。此評價由2名研究者單獨進(jìn)行，如遇分歧則通過討論或由新的第3名研究者解決。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用RevMan 5.3軟件。二分類變量則采用優(yōu)勢比(OR)作為合并統(tǒng)計量；連續(xù)型變量采用加權(quán)均數(shù)差(WMD)或標(biāo)準(zhǔn)化均數(shù)差(SMD)作為合并統(tǒng)計量；計算95%可信區(qū)間(CI)。分析各研究間的異質(zhì)性采用χ2檢驗，如研究結(jié)果間無異質(zhì)性(P>0.05,I2<50%)，采用固定效應(yīng)模型。如研究結(jié)果間存在異質(zhì)性(P<0.05，I2>50%)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型。當(dāng)納入的研究較多時，采用漏斗圖檢驗發(fā)表偏倚。

2 結(jié) 果

2.1 文獻(xiàn)納入結(jié)果 計算機(jī)檢索相關(guān)數(shù)據(jù)庫檢出相關(guān)文獻(xiàn)1 489篇。通過閱讀文題、摘要以及全文后，最終納入11篇文獻(xiàn)〔4～14〕，其中英文文獻(xiàn)4篇，中文文獻(xiàn)7篇。0篇隨機(jī)對照試驗，11篇CCT。見圖1。

2.2 納入Meta分析的文獻(xiàn)基本情況 見表1。

2.3 納入研究的文獻(xiàn)的質(zhì)量評價 見表1。

2.4 Meta分析結(jié)果

2.4.1 RASSF1A基因甲基化在PTC組與對照組表達(dá)的結(jié)果分析 11篇CCT〔4～14〕報道了RASSF1A基因甲基化在PTC組與對照組表達(dá)的情況。各項研究結(jié)果之間存在異質(zhì)性(I2=79%，P<0.05)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型合并統(tǒng)計量。結(jié)果顯示：PTC組的RASSF1A基因甲基化率高于對照組(95%CI：1.51～11.27，P<0.05)。見圖2。

2.4.2 RASSF1A基因甲基化與PTC性別的結(jié)果分析 3篇CCT〔8,10,14〕報道了RASSF1A基因甲基化與性別的關(guān)聯(lián)分析。各研究結(jié)果間不存在異質(zhì)性(I2=0%，P>0.05)，采用固定效應(yīng)模型合并統(tǒng)計量。結(jié)果顯示：RASSF1A基因甲基化與甲狀腺癌的性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(OR=0.61，95%CI：0.21～1.35，P>0.05)。見圖3。

圖1 文獻(xiàn)篩選途徑

表1 納入文獻(xiàn)基本情況

圖2 RASSF1A基因甲基化在實驗組與對照組表達(dá)的Meta分析

圖3 RASSF1A基因甲基化與甲狀腺癌患者性別的關(guān)系

2.4.3 RASSF1A基因甲基化與年齡的結(jié)果分析 3篇CCT〔8，10，14〕報道了RASSF1A基因甲基化與年齡的關(guān)系，其中一篇報道的是>40歲和<40組，另外兩篇研究的均是>50歲和<50歲組，將研究相同的進(jìn)行分組統(tǒng)計，研究提示不存在異質(zhì)性(I2=0%，P>0.05)，采用固定效應(yīng)模型合并統(tǒng)計量。結(jié)果顯示：RASSF1A基因甲基化與年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，即RASSF1A基因甲基化在50歲分界組無統(tǒng)計學(xué)意義。但總體存在統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性，采用固定效應(yīng)模型合并統(tǒng)計量，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(95%CI：1.38～6.73，P<0.05)，即RASSF1A基因甲基化在40歲分界組有統(tǒng)計學(xué)意義，即>40歲組RASSF1A基因甲基化表達(dá)增加。見圖4。

2.4.4 RASSF1A基因甲基化與PTC浸潤與轉(zhuǎn)移的結(jié)果分析 2篇CCT〔8,10〕報道了RASSF1A基因甲基化與PTC浸潤與轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)分析。各研究結(jié)果間不存在異質(zhì)性(I2=0%，P>0.05)，采用固定效應(yīng)模型合并統(tǒng)計量。結(jié)果顯示：RASSF1A基因甲基化與甲狀腺癌的浸潤與轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計學(xué)意義(OR=4.03，95%CI：1.39～11.75，P<0.05)，即可以認(rèn)為甲狀腺癌浸潤轉(zhuǎn)移組的RASSF1A基因甲基化陽性率高于與無浸潤轉(zhuǎn)移組。見圖5。

2.5 發(fā)表偏倚 漏斗圖分析提示納入的研究潛在發(fā)表偏倚的風(fēng)險。見圖6。

2.6 敏感性分析 由于研究指標(biāo)“RASSF1A基因甲基化在PTC組與對照組表達(dá)”存在異質(zhì)性(I2=89%)，但是去除徐美容等〔8〕的研究后異質(zhì)性顯著降低(I2=41%)，且研究最終結(jié)果沒有改變，仍然存在統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，去除徐美容等〔8〕研究后異質(zhì)性為0，總體仍有統(tǒng)計學(xué)意義，表明納入的文章質(zhì)量良好。見圖7。

圖4 RASSF1A基因甲基化與年齡的關(guān)系

圖5 RASSF1A基因甲基化與浸潤與轉(zhuǎn)移的關(guān)系

圖6 RASSF1A基因甲基化在甲狀腺乳頭狀癌組與對照組的結(jié)果分析的漏斗圖

圖7 敏感性分析

3 討 論

甲狀腺癌是臨床上最多見的起源于甲狀腺上皮細(xì)胞的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，目前病因?qū)W不明確，隨著表觀遺傳學(xué)的快速發(fā)展，人們越來越重視其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展的重要作用。最近研究比較多的表觀遺傳學(xué)是DNA甲基化，DNA甲基化與癌基因，抑癌基因的轉(zhuǎn)錄有一定的關(guān)系，癌基因的去甲基化以及抑癌基因的高度甲基化都可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生并可能促進(jìn)腫瘤的快速發(fā)展。國內(nèi)外研究顯示，甲狀腺腫瘤與p53,p16,RASSF1A等相關(guān)基因有關(guān)聯(lián)，其中RASSF1A為新近研究的一種基因，基因庫查詢知，其位于人類染色體3p21.3，該區(qū)域較常見的出現(xiàn)雜合子和純合子的丟失最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生〔15,16〕，然而對于RASSF1A與PTC的相關(guān)性仍然處于初步的探索階段。

本研究最終納入英文文獻(xiàn)4篇，中文文獻(xiàn)7篇，共包含803名受試者。對于RASSF1A基因甲基化在PTC組與對照組表達(dá)的結(jié)果分析提示PTC組的RASSF1A基因甲基化率高于對照組，與最近Mohammadiasl等〔17〕研究的結(jié)果符合，故可以認(rèn)為RASSF1A甲基化是PTC的危險因素，在PTC的發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。RASSF1A基因甲基化與年齡研究的結(jié)果提示RASSF1A基因甲基化在50歲分界組無統(tǒng)計學(xué)意義，但是由于納入文獻(xiàn)的研究的年齡區(qū)間不同，分組研究后發(fā)現(xiàn)RASSF1A基因甲基化在40歲分界組有統(tǒng)計學(xué)意義，即>40歲組RASSF1A基因甲基化表達(dá)增加，由于納入的文獻(xiàn)較少，對于RASSF1A基因甲基化與年齡的關(guān)系需要大樣本的多中心研究予以證實。

本篇Meta分析有一定局限性，首先，納入的文獻(xiàn)數(shù)量有限，缺乏隨機(jī)對照試驗，而且普遍質(zhì)量不高，英文文獻(xiàn)較少。其次，納入的病例對照試驗多為回顧性試驗，相關(guān)數(shù)據(jù)不排除有重疊的可能，這都可能影響分析結(jié)果。再者，每一篇文獻(xiàn)的研究年限不一樣，可能導(dǎo)致文獻(xiàn)有異質(zhì)性，本研究部分指標(biāo)存在異質(zhì)性。另一個方面，納入文獻(xiàn)的樣本量不多，其中不是所有的指標(biāo)都涉及，最終可能導(dǎo)致分析的可靠性降低。最后，本篇Meta分析研究的指標(biāo)較少，并沒有對RASSF1A基因甲基化與不同類型的甲狀腺癌的相關(guān)性進(jìn)行分析，亦沒有RASSF1A基因甲基化與腫瘤TNM分期的關(guān)系進(jìn)行評估。

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〔2016-04-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

國家自然科學(xué)基金(81160019)

胡如進(jìn)(1962-)，男，碩士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，主要從事乳甲外科常見疾病的相關(guān)研究。

馬建贏(1986-)，男，碩士，住院醫(yī)師，主要從事乳甲外科常見疾病的相關(guān)研究。

R604

A

1005-9202(2016)24-6175-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.062

1 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院