于曉利 劉曉霞 周 強 徐精香 付立波

(長春師范大學，吉林 長春 130032)

外側(cè)韁核注射腺苷對正常大鼠鎮(zhèn)痛的影響

于曉利 劉曉霞 周 強 徐精香1付立波

(長春師范大學，吉林 長春 130032)

目的 探討在外側(cè)韁核注射不同濃度的腺苷對正常大鼠的鎮(zhèn)痛作用。方法 在正常大鼠的外側(cè)韁核中分別微量注射濃度為0.1,0.5,1.0和2.0 nmol腺苷。采用熱板和壓板測痛儀測試，分別記錄與觀察注射腺苷后大鼠在5,10,15,20,30,45和60 min 7個時間點上的后爪縮爪反應的潛伏期(HWL)，作為對腺苷調(diào)節(jié)痛覺的指標。結(jié)果 注射腺苷以后大鼠HWL較注射生理鹽水明顯延長。微量注射濃度為0.1,0.5,1.0和2.0 nmol對大鼠左、右爪機械刺激HWL均有極顯著差異(P<0.001；P<0.001)；其中微量注射濃度為1.0 nmol腺苷對大鼠左爪熱刺激HWL有顯著性差異(P<0.01)，對右爪熱刺激HWL有差異(P<0.05)；微量注射2.0 nmol腺苷對大鼠左、右爪熱刺激HWL有極顯著差異(P<0.001)。腺苷對正常大鼠的鎮(zhèn)痛作用具有一定劑量依賴性，且在15 min時效果最為明顯。結(jié)論 外側(cè)韁核內(nèi)腺苷注射對正常大鼠的HWL有明顯延長作用，即腺苷在外側(cè)韁核具有一定鎮(zhèn)痛作用。

腺苷；外側(cè)韁核；后爪縮爪反應潛伏期(HWL)；微量注射；鎮(zhèn)痛

腺苷(Ado)是腺苷一磷酸去磷酸后的產(chǎn)物，作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的一種神經(jīng)調(diào)質(zhì),它可降低CNS 神經(jīng)元的興奮性,在中樞許多部位具有抑制作用〔1,2〕。Ado是由腺嘌呤的N-9與D- 核糖的C-1，通過β-N9-糖苷鍵構(gòu)成的核苷。Ado形成于胞內(nèi)或者細胞膜表面，主要來自于胞內(nèi)外核苷酸的分解〔3〕。研究表明，Ado在CNS中直接或間接參與睡眠、機體防御、鎮(zhèn)靜及鎮(zhèn)痛等作用〔4〕。Ado對大鼠內(nèi)側(cè)韁核(Hb)神經(jīng)元自發(fā)放電起抑制作用，對外側(cè)Hb神經(jīng)元自發(fā)放電則有興奮作用〔5〕。Hb是在鎮(zhèn)痛作用中非常重要的核團，在大腦中作為邊緣前腦到腦干背側(cè)通路上一個重要樞紐，許多參與痛覺調(diào)節(jié)的部位都與Hb有密切的關(guān)系，Hb存在于脊椎動物的背側(cè)間腦，可分為內(nèi)側(cè)MHb和外側(cè)Hb(LHb)〔5,6〕，痛興奮性和痛抑制性兩類神經(jīng)元在MHb和LHb內(nèi)對傷害性的刺激表現(xiàn)出不同的反應〔7〕。而LHb又作為邊緣系統(tǒng)與中腦相同的樞紐，有痛的抑制性神經(jīng)元。有關(guān)Ado 在LHb 內(nèi)對大鼠痛覺調(diào)節(jié)的影響國內(nèi)外尚未見報道。本實驗分析Ado參與LHb對正常大鼠痛覺的調(diào)節(jié)作用，為揭示Ado在CNS內(nèi)鎮(zhèn)痛作用的機制提供新的位點，并為Ado受體的臨床應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 成年雄性Wistar大鼠(由吉林大學白求恩醫(yī)學院動物中心提供)12只，體重180～210 g，實驗期間進行分籠飼養(yǎng)，自由飲水與進食，并接受自然光照，飼養(yǎng)室溫度維持在20℃～24℃。試劑藥品有Ado(上海強耀生物科技公司提供)用生理鹽水配置為0.1、0.5、1.0、2.0 nmol，醫(yī)用酒精，H2O2，10%水合氯醛，亞甲基藍，牙托粉和牙脫水等。實驗器材為電子測壓儀(LYS-3E)，智能熱板儀(YLS-6B)，均由安徽淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)，腦立體定位儀(由深圳瑞沃德公司生產(chǎn)，68001)；體重測量儀，微量注射器，PE連接管；手術(shù)器械等。

1.2 實驗方法 ①實驗準備：為了保證實驗質(zhì)量減小誤差，需對大鼠進行前期的熱板和壓板訓練，使大鼠的反應的潛伏期(HWL)維持在一個相對穩(wěn)定的范圍，依據(jù)孫衍剛等〔8〕方法，訓練7 d，每天3輪，每輪3次，使熱板測試的反應時間在2～3 s，壓力測試的反應時間在5～8 s。②核團的微量注射：用10%水合氯醛對大鼠進行腹腔麻醉，在用酒精消毒的條件下，將大鼠的頭部水平固定在腦立體定位儀上，后將頭骨暴露，參考Watson鼠圖譜在LHb定位，插入焊接好的不銹鋼套管，并用牙托粉和牙托水固定，封住套管和顱骨之間的縫隙。術(shù)后讓大鼠恢復2～3 d后再進行1～2 d的壓板與熱板的訓練，開始行為痛覺的測試。Ado需要低溫保存，并現(xiàn)用現(xiàn)配，進行核團注射藥物前需要保證套管的通暢，將注射器插入套管，緩慢注射藥物，時間控制在90～120 s，每次注射后應該使注射針在套管中停留片刻取出。③行為痛覺的測試：注射藥物前需要測量一輪大鼠的HWL作為基礎(chǔ)值，以注射藥物后各時間點的HWL與之對比出現(xiàn)變化的百分比作為結(jié)論分析的參考值。測量過程中為了避免對組織的損傷，設(shè)定的測定量都有一個極限值不可超過，在注射藥物后特定時間點(5、10、20、30、45、60 min)對大鼠的HWL進行測量。④熱板測試：熱板的溫度控制在51.8℃～52.2℃，將大鼠待測的后爪緊貼于熱板上，開始計時，待大鼠后爪感覺疼痛主動縮回時，測試計時結(jié)束。⑤壓板測試：用壓力測試儀對大鼠進行壓力測試，同樣將大鼠待測后爪放在趾壓板上，接觸面應在大鼠后爪的趾關(guān)節(jié)處，待大鼠感覺疼痛主動縮回時，停止壓力計量。記錄注射Ado的和注射生理鹽水對照組HWL。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用獨立樣本t檢驗。

2 結(jié) 果

LHb內(nèi)微量注射0.1 nmol Ado與對照組相比，左、右爪機械刺激的HWL均有極顯著差異(P<0.001，P<0.001)，左、右爪熱刺激的HWL均無明顯差異(P>0.05，P>0.05)；0.5 nmol Ado引起大鼠左、右爪機械刺激的HWL均有極顯著差異(P<0.001，P<0.001)，左、右爪熱刺激的HWL均無明顯差異(P>0.05，P>0.05)；1.0 nmol Ado與對照組相比，左爪熱刺激的HWL有顯著差異(P<0.01)，右爪熱刺激的HWL有差異(P<0.05)，左、右爪機械刺激的HWL均有極顯著差異(P<0.001，P<0.001)；2.0 nmol Ado引起左、右爪熱刺激和機械刺激的HWL均有極顯著差異(P<0.001，P<0.001)。不同濃度Ado在LHb內(nèi)對正常大鼠具有鎮(zhèn)痛作用，這種鎮(zhèn)痛作用具有一定的劑量依賴性和時間規(guī)律性，且在15 min時效果最為明顯，見表1。

組別部位HWL(s)5min10min15min20min30min45min60minF值P值0．1nmol 熱板測試Ado組左2 00±0 071 91±3 71-0 62±3 930 09±3 223 58±2 956 09±5 372 64±5 831 28±5 181 5172790 241624右2 04±0 085 22±4 67-0 82±3 77-0 14±7 40-1 50±4 062 75±5 81-3 09±4 921 99±5 650 0295060 866479對照組左2 06±0 08-1 67±2 931 01±1 66-0 40±2 092 44±3 212 64±3 182 46±3 61-0 88±4 96右2 17±0 063 07±1 842 76±3 353 02±2 69-0 34±2 570 68±2 28-3 71±3 300 65±3 28壓板測試Ado組左128 58±2 048 81±6 8423 97±8 1733 39±4 1518 36±5 4712 02±5 5110 93±4 5214 03±3 413)29 5290560 000152右127 83±1 8025 26±5 9226 42±5 4814 44±6 2021 89±7 8316 39±7 3211 11±4 5417 10±4 563)64 5845260 000004對照組左131 13±2 580 26±2 08-1 87±2 93-3 59±3 27-1 87±1 70-2 02±1 283 29±2 31-2 11±2 34右131 61±1 360 71±2 15-0 74±2 670 79±2 650 36±2 352 03±1 823 37±2 841 39±5 040．5nmol熱板測試Ado組左2 09±0 0521 93±6 2011 29±6 491 82±6 162 21±4 090 40±7 358 41±4 993 23±4 254 4211550 057274右2 06±0 0511 4±3 533 57±6 016 39±6 0511 43±6 37-1 72±5 81-4 17±4 55-49 1±4 481 1416200 306333對照組左2 06±0 08-1 67±2 931 01±1 66-0 40±2 092 44±3 212 64±3 182 46±3 61-0 88±4 96右2 17±0 063 07±1 842 76±3 353 02±2 69-0 34±2 570 68±2 28-3 71±3 300 65±3 28壓板測試Ado組左120 75±2 533246±7 2236 60±9 0843 65±7 1835 23±6 8832 43±6 9119 08±6 6817 36±4 843)76 6711260 000002右122 12±4 1047 92±14 2038 69±8 8736 27±10 6240 05±15 0722 66±11 3312 47±6 3410 96± 5 823)27 2777800 000214對照組左131 13±2 580 26±2 08-1 87±2 93-3 59±3 27-1 87±1 70-2 02±1 283 29±2 31-2 11±2 34右131 61±1 360 71±2 15-0 74±2 670 79±2 650 36±2 352 03±1 823 37±2 841 39±5 041．0nmol熱板測試Ado組左1 92±0 0611 75±6 2220 08±6 3323 19±7 9316 68±5 324 45±3 701 22±4 304 64±4 452)10 9127210 006300右1 98±0 0318 15±5 9621 85±6 1314 48±5 6719 97±5 410 89±4 76-0 87±6 44-2 38±4 781)5 2120930 041453對照組左2 06±0 08-1 67±2 931 01±1 66-0 40±2 092 44±3 212 64±3 182 46±3 61-0 88±4 96右2 17±0 063 07±1 842 76±3 353 02±2 69-0 34±2 570 68±2 28-3 71±3 300 65±3 28壓板測試Ado組左127 79±1 9227 89±12 1823 43±9 8037 68±8 5431 63±7 3831 14±9 8213 01±5 718 90±4 833)41 1754830 000033右126 29±2 8841 93±10 52 12±15 1649 56±10 8822 14±6 5833 45±11 0726 88±10 0114 30±4 983)37 8861370 000049對照組左131 13±2 580 26±2 08-1 87±2 93-3 59±3 27-1 87±1 70-2 02±1 283 29±2 31-2 11±2 34右131 61±1 360 71±2 15-0 74±2 670 79±2 650 36±2 352 03±1 823 37±2 841 39±5 042．0nmol熱板測試Ado組左1 99±0 0510 30±4 7417 45±5 8615 93±6 6415 06±6 035 03±5 579 11±5 0110 94±6 533)38 9241830 000043右2 02±0 0514 24±7 9817 15±7 8713 70±5 6012 57±4 868 53±5 223 77±5 754 49±4 803)20 6990200 000667對照組左2 06±0 08-1 67±2 931 01±1 66-0 40±2 092 44±3 212 64±3 182 46±3 61-0 88±4 96右2 17±0 063 07±1 842 76±3 353 02±2 69-0 34±2 570 68±2 28-3 71±3 300 65±3 28壓板測試Ado組左123 50±1 9024 75±8 4725 52±7 7231 07±11 8625 61±10 1336 97±9 5923 82±6 8436 52±10 733)172 8478420 000001右128 85±1 8453 95±8 7841 94±7 6044 26±10 4048 41± 11 4341 48±9 8341 14±8 4338 90±6 983)457 4277710 000001對照組左131 13±2 580 26±2 08-1 87±2 93-3 59±3 27-1 87±1 70-2 02±1 283 29±2 31-2 11±2 34右131 61±1 360 71±2 15-0 74±2 670 79±2 650 36±2 352 03±1 823 37±2 841 39±5 04

與對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，3)P<0.001

3 討 論

Hb位于邊緣并作為中腦環(huán)路中一個重要的中轉(zhuǎn)站，是多種生理功能的匯聚點，其神經(jīng)元的電活動具有明顯的晝夜節(jié)律性〔9〕。Ado是一種在體內(nèi)廣泛存在的神經(jīng)調(diào)質(zhì)，特別在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用〔10〕，并且在早期被證明在外周神經(jīng)系統(tǒng)中Ado通過不同受體介導，在痛覺傳導通路中發(fā)揮著重要的作用。而Ado的主要來源與ATP密切相關(guān)。ATP是廣泛存在于周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)遞質(zhì)，與疼痛密切相關(guān)。在炎癥反應及神經(jīng)損傷時，ATP 作為一種疼痛介質(zhì)激活感覺傳入纖維。在外周組織中ATP有神經(jīng)元以及非神經(jīng)元釋放兩種來源〔11〕。有研究者把Ado的相應受體(A1R,A2R,A3R)放在外周痛覺信息調(diào)控中探究其作用，發(fā)現(xiàn)A1R在術(shù)后，炎癥等鎮(zhèn)痛中具有重要的作用，其中對A2R激動劑CGS61280親和力低的A2BR有痛覺傳導作用，其選擇性拮抗劑與A1R均可減少急性與炎癥痛的相關(guān)行為，A3R的激活具有促炎作用，可作為治療炎癥痛的新起點。最后證明了大鼠在Ado釋放相應增加時，受A1R的影響，痛敏程度下降，且主要表現(xiàn)為脊髓水平上的鎮(zhèn)痛〔11，12〕。聯(lián)系A(chǔ)do可增加LHb神經(jīng)元的放電，對LHb 神經(jīng)元有興奮作用〔5〕，同時再與同樣有研究表明的可卡因可直接對LHb作用，可提高LHb神經(jīng)元的興奮性，抑制其對痛的誘發(fā)反應〔13〕這一結(jié)論相結(jié)合，得出在正常大鼠的LHb中微量注射Ado對大鼠鎮(zhèn)痛作用的可能機制是LHb具有與痛覺相關(guān)的神經(jīng)元，而Ado可以增加LHb內(nèi)神經(jīng)元的放電，提高神經(jīng)元的興奮性，結(jié)合Ado中A1R受體在疼痛中的鎮(zhèn)痛調(diào)節(jié)作用，導致大鼠痛覺敏感程度下降從而起到鎮(zhèn)痛作用。但是對于在痛覺調(diào)節(jié)中Ado促進釋放的神經(jīng)元和Ado不同受體的結(jié)合和結(jié)合后與痛覺調(diào)節(jié)相作用具體的生理機制還有待于做進一步的研究。

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〔2015-01-19修回〕

(編輯 杜 娟)

吉林省教育廳“十二五”科學技術(shù)研究項目(吉教科合字〔2015〕第365號)

付立波(1965-)，男，教授，博士，碩士生導師，主要從事動物生理學研究。

于曉利(1981-)，男，主治醫(yī)師，主要從事中醫(yī)內(nèi)科研究。

R714

A

1005-9202(2016)24-6097-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.024

1 長春市農(nóng)安縣第五中學