張冬云 遼寧省盤錦市雙臺(tái)子區(qū)疾病預(yù)防控制中心 (遼寧 盤錦 124000)

酶標(biāo)儀在血液檢驗(yàn)上的應(yīng)用分析

張冬云 遼寧省盤錦市雙臺(tái)子區(qū)疾病預(yù)防控制中心 (遼寧 盤錦 124000)

目的：觀察酶標(biāo)儀在梅毒、艾滋病中的臨床應(yīng)用效果。方法：結(jié)合臨床化學(xué)檢驗(yàn)操作規(guī)程，設(shè)定相應(yīng)的工作程序，建立采血、測定到打印結(jié)果超微量化學(xué)檢驗(yàn)流程，分析酶標(biāo)儀在血液檢驗(yàn)中的臨床應(yīng)用效果。結(jié)果：以梅毒、艾滋病為例，分別取三份血清，采用本法進(jìn)行批內(nèi)、批間20次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。其中，批內(nèi)CV為4.5%、4.9%、4.2%；批間CV為6.9%、5.6%及5.1%。當(dāng)樣本梅毒、艾滋病活性升高到160卡門單位時(shí)，檢測結(jié)果已經(jīng)不是線性關(guān)系，此時(shí)可以采用等滲鹽水將標(biāo)本稀釋后再進(jìn)行檢測。在三種已經(jīng)確定梅毒、艾滋病的血清中加入分別加入一種梅毒、艾滋病，混合后根據(jù)梅毒、艾滋病方法進(jìn)行測定，結(jié)果顯示：標(biāo)本回收率為93.4%、97.6%及102.0%，平均回收率為97.6%。穩(wěn)定性結(jié)果顯示：10～90min內(nèi)相對比較穩(wěn)定，顯色10min后比色相對比較理想。結(jié)論：血液檢驗(yàn)上艾滋病和梅毒預(yù)防中采用酶標(biāo)儀測定效果理想，能準(zhǔn)確、穩(wěn)定、微量、快速、簡便的提高效率，降低檢驗(yàn)成本，減少消耗，值得推廣應(yīng)用。

酶標(biāo)儀 血液檢驗(yàn) 應(yīng)用效果 檢驗(yàn)成本

艾滋病、梅毒是臨床上常見的性病，其傳播主要以性傳播為主，患者發(fā)病后如果不采取積極有效的方法治療將會(huì)誘發(fā)其他疾病，嚴(yán)重者將威脅患者生命。目前，臨床上對于艾滋病、梅毒尚缺乏理想的診斷方法，但是長期療效欠佳，臨床誤診率或漏診率較高，難以達(dá)到預(yù)期的診斷效果。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，自動(dòng)生化分析儀在化學(xué)檢驗(yàn)中得到應(yīng)用，且效果理想，該方法能實(shí)現(xiàn)臨床化學(xué)檢驗(yàn)的微量快速分析[1]。但是，該診斷方法對設(shè)備要求較高，難以在基礎(chǔ)醫(yī)院推廣普遍。近年來，酶標(biāo)儀在血液檢驗(yàn)中得到應(yīng)用，該方法能實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、微量目的，并且能大大提高工作效率，報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 儀器

①SLT400SF酶標(biāo)儀；②edp-2自動(dòng)加樣器；③234系列UBA微量加樣器；④RA-XT全自動(dòng)生化分析儀；⑤酶標(biāo)板及0.2ml聚苯乙烯離心管；⑥D(zhuǎn)G-3022A型酶標(biāo)儀。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

將SLT400SF酶標(biāo)儀根據(jù)要求編制相應(yīng)的程序，采用程序分吸光度值和測定值進(jìn)行打印。同時(shí)，DG-3022A型酶標(biāo)儀根據(jù)實(shí)驗(yàn)測定內(nèi)容校準(zhǔn)波長，做好比色測定[2]。向所選的酶標(biāo)儀中加入空白試劑在酶標(biāo)儀上進(jìn)行比色，打印各個(gè)孔的吸光度值。校準(zhǔn)edp-2自動(dòng)加樣器和234系列UBA微量加樣器，保證加樣器準(zhǔn)確度誤差≤±1%，變異系數(shù)＜1%。

1.2.2 采血方法

使用的血量甚微，一般只需要在手指、耳垂等末梢部位進(jìn)行常規(guī)方法刺血即可。采用微量吸管吸住血，將其注入0.2ml小離心管中，待血液凝固后進(jìn)行5min離心，速度為3000rpm。在96孔酶標(biāo)板A1、A2作為空白對照組，A3-A4作為標(biāo)準(zhǔn)孔，各標(biāo)準(zhǔn)孔均為雙控，其余各孔均為測量孔，設(shè)置測定總量為300ul，操作相關(guān)操作步驟必須嚴(yán)格遵循儀器及試劑盒相關(guān)操作進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料行x2檢驗(yàn)，采用n（%）表示，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，采用（±s）表示，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 精密度測定

為了保證酶標(biāo)儀在血液檢驗(yàn)中測定更具針對性，實(shí)驗(yàn)中以梅毒、艾滋病為例，分別取三份血清，采用本法進(jìn)行批內(nèi)、批間20次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。其中，批內(nèi)CV為4.5%、4.9%、4.2%；批間CV為6.9%、5.6%及5.1%。

2.2 線性范圍

采用等滲鹽水將高活性的梅毒、艾滋病血清作為試驗(yàn)標(biāo)本測定其線性范圍，結(jié)果顯示：當(dāng)樣本梅毒、艾滋病活性升高到160卡門單位時(shí)，檢測結(jié)果已經(jīng)不是線性關(guān)系，此時(shí)可以采用等滲鹽水將標(biāo)本稀釋后再進(jìn)行檢測[3～5]。

2.3 回收率

在三種已經(jīng)確定梅毒、艾滋病單位的血清中加入分別加入梅毒、艾滋病，混合后根據(jù)梅毒、艾滋病方法進(jìn)行測定，結(jié)果顯示：標(biāo)本回收率為93.4%、97.6%及102.0%，平均回收率為97.6%。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

采用1份血清測定梅毒、艾滋病生成量，加入濃度為0.4mmol/LNaOHh顯色后在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行比色（5、10、15、30、60、90及120min），結(jié)果顯示：10～90min內(nèi)相對比較穩(wěn)定，顯色10min后比色相對比較理想。

3.討論

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)時(shí)七十年代初在酶聯(lián)免疫組織化學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，并且在國內(nèi)血站臨床試驗(yàn)中主要的檢測技術(shù)，由于多數(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)最后均需要采用比色測定，使得酶標(biāo)儀成為酶聯(lián)免疫吸附中重要的工具[6]。本研究中，根據(jù)酶標(biāo)儀精密的比色系統(tǒng)和儀器軟件，配備一些簡單的附件，根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目程序并參考全國臨床檢驗(yàn)操作方法按照一定比例縮小，從而形成了采血、檢測到打印結(jié)果的工作流程。本研究中，為了保證酶標(biāo)儀在血液檢驗(yàn)中測定更具針對性，實(shí)驗(yàn)中以梅毒、艾滋病為例，分別取三份血清，采用本法進(jìn)行批內(nèi)、批間20次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。其中，批內(nèi)CV為4.5%、4.9%、4.2%；批間CV為6.9%、5.6%及5.1%。

酶標(biāo)儀是臨床上梅毒和艾滋病中常用的篩查方法，該方法具備軟件功能和精密的光學(xué)系統(tǒng)。通過軟件功能能控制整機(jī)測量及檢驗(yàn)程序的處理，并且能顯示或打印結(jié)果；而通過酶標(biāo)儀光學(xué)系統(tǒng)原理也是根據(jù)朗博-比爾定律演變而來，具有較高的精度，并且檢測速度較快，能實(shí)現(xiàn)批量檢測。本研究中，采用等滲鹽水將高活性的梅毒、艾滋病血清作為試驗(yàn)標(biāo)本測定其線性范圍，結(jié)果顯示：當(dāng)樣本梅毒、艾滋病活性升高到160卡門單位時(shí)，檢測結(jié)果已經(jīng)不是線性關(guān)系，此時(shí)可以采用等滲鹽水將標(biāo)本稀釋后再進(jìn)行檢測[7]。同時(shí)，酶標(biāo)儀檢測時(shí)不但可以實(shí)現(xiàn)酶標(biāo)儀一機(jī)多用，既可以實(shí)現(xiàn)免疫學(xué)試驗(yàn)，也可以作為多種臨床化學(xué)檢驗(yàn)，具有測試穩(wěn)定、采血微量、節(jié)約試劑等優(yōu)點(diǎn)。本研究中，在三種已經(jīng)確定梅毒、艾滋病單位的血清中加入分別加入梅毒、艾滋病，混合后根據(jù)梅毒、艾滋病方法進(jìn)行測定，結(jié)果顯示：標(biāo)本回收率為93.4%、97.6%及102.0%，平均回收率為97.6%。但是，臨床上采用不同酶標(biāo)儀作為標(biāo)板或同一酶標(biāo)板的不同孔對實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性均具有明顯的影響。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是多方面的，由于不同酶標(biāo)板底透光度不均一，同一板孔內(nèi)的液體存在重復(fù)性誤差，因此，臨床上采用酶標(biāo)儀測定時(shí)應(yīng)該進(jìn)行酶標(biāo)板的本底數(shù)值，從測定孔吸光度值中去除本底數(shù)值，提高檢測精度，在疾病篩查中發(fā)揮了重要的作用，能實(shí)現(xiàn)艾滋病和梅毒的篩查，正確的指導(dǎo)患者治療。本研究中，采用1份血清測定梅毒、艾滋病生成量，加入濃度為0.4mmol/NaOH顯色后在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行比色（5、10、15、30、60、90及120min），結(jié)果顯示：10～90min內(nèi)相對比較穩(wěn)定，顯色10min后比色相對比較理想。

綜上所述，血液檢驗(yàn)上艾滋病和梅毒預(yù)防中采用酶標(biāo)儀測定效果理想，能準(zhǔn)確、穩(wěn)定、微量、快速、簡便的提高效率，降低檢驗(yàn)成本，減少消耗，值得推廣應(yīng)用。

[1] 苑瑞琴, 興安, 張力, 等. 290例血液標(biāo)本不合格原因分析及對策[J]. 臨床輸血與檢驗(yàn), 2012,13(2):363-366.

[2] 宿振國, 周玉明, 高梅蘭, 等. 濱州市健康成人靜脈血血細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)參考范圍調(diào)查[J]. 濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2012,17(6):249-252.

[3] 付增祺, 趙蔭林, 馬光湖, 等. 關(guān)于臨床血液檢驗(yàn)質(zhì)量控制的探討[J]. 西北國防醫(yī)學(xué)雜志, 2011,16(1):150-155.

[4] 李乃魚, 張錄喜, 馮鳳, 等. 血液檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控存在的若干問題及對策[J]. 實(shí)用醫(yī)技雜志, 2012,23(15):180-184.

[5] 陶敏. 影響檢驗(yàn)分析前血液標(biāo)本質(zhì)量的因素分析[J]. 大家健康:學(xué)術(shù)版, 2014，8(1):57-57.

[6] 張林淵. 免疫學(xué)檢驗(yàn)分析前采血標(biāo)本質(zhì)量控制的問題與應(yīng)對措施分析[J]. 大家健康:學(xué)術(shù)版, 2014,8(7):57-58.

[7] 楊姣. 免疫學(xué)檢驗(yàn)分析前采血標(biāo)本質(zhì)量控制的問題與應(yīng)對策略[J]. 基層醫(yī)學(xué)論壇, 2014,18(2)：222-223.

1006-6586(2016)07-0037-02

R446.1

A