鄭德彪　金嘉旻　施銘煜　韓奇宏　陸宇超　毛愛民

(1.無錫市濱湖區(qū)胡埭街道畜牧獸醫(yī)站,江蘇無錫 214021; 2.無錫市動物疫病預(yù)防控制中心,江蘇無錫 214021; 3.無錫市惠山區(qū)堰橋街道獸醫(yī)站,江蘇無錫 214021)

羊痘診斷及防治措施

鄭德彪1金嘉旻2施銘煜3韓奇宏2陸宇超2毛愛民2

(1.無錫市濱湖區(qū)胡埭街道畜牧獸醫(yī)站,江蘇無錫 214021; 2.無錫市動物疫病預(yù)防控制中心,江蘇無錫 214021; 3.無錫市惠山區(qū)堰橋街道獸醫(yī)站,江蘇無錫 214021)

羊痘是由羊痘病毒（Capripoxviurs，CPV）感染山羊和綿羊而引起的一種熱性、急性、接觸性傳染病，患畜以發(fā)熱、全身性起痘為典型特征。OIE將該病列為A類動物傳染病，我國也將其列為Ⅰ 類動物疫病。本文從羊痘病原及流行概況、癥狀與病變特征、診斷方法、疫苗研究概況等幾個方面闡述了羊痘的防治技術(shù)研究進(jìn)展，并提出羊痘預(yù)防措施和治療措施，對控制羊痘的發(fā)生和流行具有重要的參考意義。

羊痘 疫苗研究 診斷方法 預(yù)防措施

羊痘（Sheeppox and goatpox，SGP）又稱綿羊痘或山羊痘，是由羊痘病毒屬（Capripoxvirus，CPV）的綿羊痘病毒（Sheeppoxvirus，SPPV）或山羊痘病毒（Goatpox virus，GTPV）引起的羊的一種急性、熱性、接觸性傳染病。其主要表現(xiàn)為發(fā)熱、無毛或少毛的皮膚和黏膜上出現(xiàn)丘疹和皰疹為特征。典型病例初期為痘疹，最后干結(jié)脫落而痊愈，人也可偶感山羊痘[1]，是所有動物痘病中最為嚴(yán)重的一種，有較高的死亡率，能造成巨大的經(jīng)濟損失。有該病的國家和地區(qū)的易感動物及其相關(guān)產(chǎn)品被世界各國列為嚴(yán)格限制進(jìn)出的對象，嚴(yán)重影響國際貿(mào)易和養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展。世界上許多地區(qū)有該病發(fā)生的報道，如印度、尼日利亞、希臘等。我國的江蘇、廣東、貴州、山東、浙江、廣西、甘肅、黑龍江、福建等地均有該病發(fā)生，有的地區(qū)呈暴發(fā)流行。羊痘病毒（SGPV）還可作為生物武器，成為世界恐怖分子威脅世界和平的有力手段，被美國疾病控制中心（CDC）劃歸到Ⅱ類危險病毒。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將該病列為法定通報傳染病，我國將其列為Ⅰ類動物疾病[2]。

1 羊痘簡介

1.1 羊痘病原

羊痘病毒是痘病毒科、脊索動物痘病毒亞科、羊痘病毒屬。羊痘病毒屬包括山羊痘病毒（GTPV）、綿羊痘病毒（SP PV）和牛皮膚疙瘩病病毒（LSDV）；羊痘病毒基因組為線性雙股DNA，全長約為150kb，共有147個開放閱讀框，是唯一在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)復(fù)制的有囊膜的雙股DNA病毒。

1.2 易感動物

羊痘病毒可以感染各種年齡、性別、品種的羊，但羔羊、泌乳羊及老年羊更易感且癥狀嚴(yán)重。另外山羊痘病毒也能引起野兔和馴鹿發(fā)病。

1.3 傳播方式

主要通過呼吸道傳播，也可經(jīng)損傷的皮膚、黏膜侵入機體，經(jīng)常是由于感染動物與易感動物直接的、親密的接觸后發(fā)生；試驗證明通過昆蟲的叮咬可傳播山羊痘。另外，通過皮內(nèi)、靜脈以及皮下接種，可以引起易感動物的感染。

2 羊痘的癥狀與病變特征

2.1 主要癥狀

潛伏期一般為6～8d，長的達(dá)16d；體溫驟升至41℃～42℃，精神不振，食欲減退，拱腰發(fā)抖[1]；典型的臨床病變?yōu)槠つw黏膜出現(xiàn)痘疹。病羊全身均可能發(fā)生痘疹，特別是在口唇、尾根、乳房等少毛或無毛的部位最易發(fā)現(xiàn)。痘疹開始為紅斑，1～2d后形成突出于皮膚表面的痘疹，隨后痘疹逐漸擴大變成灰白色或淡紅色的半球狀的隆起結(jié)節(jié)，質(zhì)地較硬。痘疹有兩種變化，一種逐漸變?yōu)樗?，如無繼發(fā)感染，則結(jié)痂脫落。如有繼發(fā)感染，則形成膿瘡。另一種直接結(jié)痂脫落，痂皮脫后流下星狀疤痕；對于易感羊群，感染率為75%～100%，死亡率為10%～58%。

2.2 主要病理變化

全身皮膚痘疹是最為顯著的臨床剖檢變化；呼吸系統(tǒng)：咽喉、氣管、支氣管和肺臟表面出現(xiàn)大小不一的痘斑，有時在咽喉、氣管、可見痘斑破潰形成潰瘍，而在肺臟可見有大片的肝變區(qū)，還可觀察到紫紅色或黃色圓形痘斑，直徑0.3～0.5cm，心外膜有大頭針大小的出血點和較大的出血斑。消化系統(tǒng)：唇、舌、瘤胃和皺胃黏膜上有大量白色的痘斑，質(zhì)地堅硬。有時痘斑破潰形成潰瘍，在痘疹集中部位皮下可見到不規(guī)整的斑點狀出血或黃色膠凍樣滲出物。真胃、十二指腸、回腸黏膜呈出血性炎癥，腸系膜淋巴結(jié)水腫；全身淋巴結(jié)，特別是頜下淋巴結(jié)、肺門淋巴結(jié)高度腫脹，切面多汁，有時可見周邊出血；腎臟有多發(fā)性灰白色結(jié)節(jié)出現(xiàn)。

3 羊痘診斷檢測方法

3.1 臨床診斷

典型的感染會引起牲畜明顯的臨床癥狀，根據(jù)這些特征可對羊痘病做出初步診斷。

3.2 病原診斷方法

3.2.1 電鏡觀察

采取病羊皮膚和黏膜的丘疹和水皰病料做成切片負(fù)染后直接在電鏡觀察病毒粒子是診斷羊痘的常用方法，但在發(fā)病區(qū)往往沒有這樣的設(shè)備，難以滿足快速診斷的需要[3]。

3.2.2 病毒培養(yǎng)

病毒培養(yǎng)有較高的特異性，羊痘病毒可在牛、綿羊、山羊源的組織培養(yǎng)細(xì)胞上生長，原代或次代羔羊睪丸細(xì)胞和羔羊腎細(xì)胞最為敏感[4]。很多研究表明在不同地點和不同時間分離獲得的羊痘病毒株，對各種細(xì)胞培養(yǎng)物的敏感性不盡一致。因此，在由病料初代分離羊痘病毒時，最好多用幾種細(xì)胞培養(yǎng)物。羊痘病毒在細(xì)胞培養(yǎng)物中生長緩慢，病毒培養(yǎng)比較耗時、費力，不適合進(jìn)行快速診斷。

3.3 血清學(xué)方法

3.3.1 傳統(tǒng)血清學(xué)方法

有病毒中和試驗（VNT）、熒光抗體試驗（FAT）、瓊脂擴散試驗（AGID）、免疫電泳（IE）、對流免疫電泳（CIE）、反向被動血凝試驗（RPHA）、乳膠凝集試驗（LAT）、單向輻射狀溶血試驗（SRH）、單輻射免疫擴散和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等[ 5 - 6]。

3.3.2 ELISA方法

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）因其操作便利、快速、敏感、特異性強，便于自動化，能檢測群體特異性抗體而倍受青睞。目前國外已建立了許多種檢測SGPV 抗原或抗體的ELISA 方法。

3.3.3 應(yīng)用特異性重組蛋白建立的方法

P32 蛋白是SGPV 共有的特異性很強的具有免疫原性的結(jié)構(gòu)蛋白，可用于診斷與預(yù)防，是目前羊痘研究領(lǐng)域的熱點之一。研究結(jié)果表明，全長P32 蛋白可溶性最大，且在ELISA 中的反應(yīng)性最好，但由于其跨膜區(qū)對細(xì)胞的毒性，使其表達(dá)量低，很難純化到重組P32 蛋白[7]。國內(nèi)外研究者多以截去跨膜區(qū)的P32 基因為研究對象，研究其重組蛋白的用途。雖然以重組P32 為基礎(chǔ)建立的ELISA 方法具有高度的特異性，與正痘病毒和副痘病毒沒有交叉反應(yīng)，但由于在ELISA 中的反應(yīng)性最好的全長P32 表達(dá)量低，因此其推廣受限。

3.4 分子生物學(xué)方法

用PCR 方法可以簡單、快速、特異地從組織培養(yǎng)上清液、活組織樣品中檢測出SGPV 的DNA 片段，還可以通過對PCR產(chǎn)物的酶切分析進(jìn)行CPV 種的鑒定。

4 預(yù)防措施

4.1 飼養(yǎng)管理

羊圈內(nèi)要經(jīng)常清掃，定期消毒，通風(fēng)良好，陽光充足，經(jīng)常保持干燥。保證羊吃飽喝足。冬天注意防寒保暖，夏天防高溫，消滅蚊蠅，為羊提供一個舒適的環(huán)境，提高抗病能力。

4.2 檢疫

新引入的羊要隔離21d，經(jīng)觀察和檢疫后證明完全健康的方可與原有的羊群混養(yǎng)，不從疫區(qū)購羊。

4.3 預(yù)防接種

羊痘雞胚化弱毒疫苗：它對綿羊的毒力顯著地減弱，并且保持了優(yōu)良的免疫原性。在尾內(nèi)面或腋下無毛部皮內(nèi)接種0.5m1，接種后第4d部分羊就可以產(chǎn)生免疫力，至第6d可全部獲得堅強免疫力。免疫期可持續(xù)1～1.5年。

羊痘組織細(xì)胞苗：對綿羊完全無害，注射動物不擴散本病，因產(chǎn)生免疫力快，可用于緊急接種，已廣泛使用，免疫期＞1年。

4.4 加強消毒滅源

在發(fā)現(xiàn)羊群有癥狀病例和可疑病例時，應(yīng)立即與健康羊群隔離，對圈舍和環(huán)境進(jìn)行消毒，對健康羊群進(jìn)行緊急免疫，對病死羊深埋或作其他無害化處理，嚴(yán)防病原擴散。

5 治療措施

尚無特效藥治療，常采用對癥治療等綜合性措施。對于口腔有病變的羊，應(yīng)給予柔軟飼料，飲用清潔水。為防止口腔黏膜繼發(fā)感染，促進(jìn)糜爛的愈合，可用1%的醋酸液、2%的硼酸液或1%的來蘇水沖洗口腔。有潰瘍時，可用1%的硫酸銅溶液、1%的明礬溶液或0.1%的高錳酸鉀溶液沖洗。皮膚發(fā)生痘疹，局部可用0.1%的高錳酸鉀溶液洗滌，擦干后抹紫藥水或碘甘油等。惡性山羊痘采用新砷礬納明治療[8]。

康復(fù)羊血清治療用康復(fù)羊血治療可明顯增強病羊的免疫力。治療量：每只成年羊10～20m1，小羊5～10m1，皮下注射。發(fā)病早期治療效果較好，若已進(jìn)入膿皰期則加大劑量。另外，在進(jìn)行對癥治療的同時，要適當(dāng)使用青、鏈霉素等藥物進(jìn)行輔助治療，以防繼發(fā)感染。

[1] 路秀英，李占國，張云艷.羊痘的防控技術(shù)[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2013，29（8）：87-88.

[2] 王開功，虞天德，張大權(quán)，等.貴州省首次暴發(fā)山羊痘的診斷研究[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2003，24（4）：116 - 118.

[3] 陳軼霞.羊痘診斷技術(shù)進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（34）：15008-15009.

[4] BABIUKS，PARKYNG，COPPSJ，et a1 .Evaluation of an ovine testis cell line（OA3 .Ts）for propagation of capripoxvirus isolates and development of animmunostainingtechnique for viral plaque visualization[J] .J Vet Diagn Invest，2007，19（5）：486- 491 .

[5] RAOT VS，NEGI BS，BANSAL MP.Use of purified soluble antigens of sheeppoxvirus inserodiagnoss[J] .IndianJournal of Animal Sciences，1997，（67）：642 -645 .

[6] RAO T V S，NEGI B S，BANSAL MP.Development and standardization of arapid diagnosis test for sheep pox[J] .IndianJ Comp Microbiol Immunol InfectDis，1997，18（1）：47 - 51 .

[7] 陳軼霞，鄭亞東，竇永喜，等.羊痘病毒P32 蛋白基因的克隆與原核表達(dá)[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，28（1）：31- 34.

[8] 劉小芳，劉慧.羊痘的診斷和治療技術(shù)[J].河南畜牧獸醫(yī)，2010，31（6）：48-49.