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        2014年某市麻疹檢測結(jié)果的分析

        2016-01-29 15:40:34張立偉遼陽市疾病預(yù)防控制中心遼寧遼陽111000
        中國醫(yī)藥指南 2016年9期
        關(guān)鍵詞:麻疹病毒

        張立偉(遼陽市疾病預(yù)防控制中心,遼寧 遼陽 111000)

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        2014年某市麻疹檢測結(jié)果的分析

        張立偉
        (遼陽市疾病預(yù)防控制中心,遼寧 遼陽 111000)

        【摘要】目的 分析2014年遼陽市麻疹實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果,了解遼陽麻疹的流行狀況、野毒株基因型特征,為我市麻疹防控提供科學(xué)依據(jù)。方法 采集疑似麻疹病例的血清標(biāo)本690份,進(jìn)行麻疹I(lǐng)gM抗體檢測;56份咽拭子標(biāo)本,提取核酸后進(jìn)行PCR檢測;核酸陽性的樣品進(jìn)行基因分型檢測。結(jié)果 690份血清標(biāo)本中IgM抗體陽性467份,陽性率67.68%;56份咽拭子標(biāo)本PCR陽性45份,陽性率80.36%;基因型為H1a。結(jié)論 2014年遼陽市麻疹暴發(fā)流行,以基因型H1a為主,與全國的流行趨勢基本相同。

        【關(guān)鍵詞】麻疹病毒;IgM抗體檢測;核酸檢測;麻疹病毒基因分型

        麻疹是嚴(yán)重威脅我國人群健康的傳染病,該病毒屬副黏病毒科麻疹病毒屬,為單股負(fù)鏈RNA病毒。麻疹病毒只有一個(gè)血清型,有多個(gè)基因型,截至2005年,已發(fā)現(xiàn)8個(gè)基因組(A~H),22個(gè)基因型(A、B1~B3、C1、C2、D1~D9、E、F、G1~G3、H1、H2)在世界各地流行。我國以H1基因型為優(yōu)勢流行基因型,其中又以H1a為主要的流行亞型[1]。

        1 材料與方法

        1.1 標(biāo)本來源:2014年遼陽市疾控中心共收集散發(fā)及暴發(fā)的麻疹疑似病例血清標(biāo)本690份,咽拭子標(biāo)本56份。血清標(biāo)本-20 ℃保存,咽拭子標(biāo)本-70 ℃保存。

        1.2 儀器和試劑:麻疹I(lǐng)gM抗體檢測試劑由德國維潤賽潤研發(fā)有限公司生產(chǎn)提供;病毒RNA提取試劑由德國QIAGEN公司的Rneasy min Kit提取試劑;實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑由江蘇碩世生物科技公司生產(chǎn)提供,試劑均在有效期內(nèi)使用。設(shè)備為瑞士帝肯Sunrise全自動(dòng)酶標(biāo)儀、伯樂IQ5實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

        1.3 檢測方法

        1.3.1 麻疹I(lǐng)gM抗體檢測嚴(yán)格按照德國維潤賽潤麻疹試劑的說明書操作,大于cutoff上限判定樣品為陽性,小于cutoff下限判定樣品為陰性。

        1.3.2 病毒核酸檢測:使用real-time RT-PCR方法檢測,嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。①反應(yīng)體系:RT-PCR反應(yīng)液7.5 μL、酶混合液5 μL、模板RNA 4 μL、無RNA酶水3.5 μL。②反應(yīng)條件:逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)50 ℃,30 min;變性95 ℃,10 s,55 ℃,40 s,45個(gè)循環(huán)。③結(jié)果判斷:陰性結(jié)果Ct值>38或未檢出;陽性結(jié)果Ct值≤35;如35≤Ct值<38時(shí),應(yīng)重復(fù)檢測。

        1.3.3 病毒分離培養(yǎng):病毒分離方法將處理好的標(biāo)本接種到長成單層的Vero/SLAM細(xì)胞上。每細(xì)胞瓶接種0.3 mL,37 ℃吸附1.5 h后加維持液進(jìn)行培養(yǎng)。逐日觀察細(xì)胞病變(CPE)和液體pH值變化情況。CPE達(dá)到75%~90%時(shí)將細(xì)胞瓶置于-80 ℃凍存以備傳代或鑒定。未發(fā)生CPE的繼續(xù)培養(yǎng)至第3代,仍無CPE則判為陰性[2]。Vero/SLAM細(xì)胞為國家麻疹實(shí)驗(yàn)室提供。①病毒分離物使用 Rneasy mini kit 試劑盒提取MEV的RNA。用 One-Step RT-PCR kit 擴(kuò)增MEV H和N基因,使用Quick Gel Extraction Kit對(duì)陽性產(chǎn)物進(jìn)行純化,以上試劑盒均由QIAGEN公司提供。RT-PCR反應(yīng)條件及引物序列參照文獻(xiàn)[3]。②基因序列測定和結(jié)果分析:將純化產(chǎn)物送上海立菲生物技術(shù)有限公司測序。調(diào)出WHO MV 24個(gè)基因型的31個(gè)參考株序列,使用Sequencher4.0.5和MEGA 4.0.2軟件對(duì)這些參考株和本文分析的13株序列在N基因羧基末端的450個(gè)核苷酸的片段進(jìn)行核苷酸和氨基酸的變異比對(duì)分析(p-distance模型)和構(gòu)建進(jìn)化樹(鄰位-連接法,bootstrap檢驗(yàn),抽樣次數(shù)500,Kimura-2 Parameter模型)[4]。

        2 結(jié) 果

        通過檢測發(fā)現(xiàn),遼陽市690份血清標(biāo)本中IgM抗體陽性467份,陽性率67.68%;56份咽拭子標(biāo)本PCR陽性45份,陽性率80.36%;45份核酸陽性的咽拭子分離培養(yǎng)出11株毒株,將11株麻疹病毒N基因COOH末端450個(gè)核苷酸序列與WHO 24個(gè)基因型參考序列、中國1993年~1994年流行的H1基因亞型參考株和中國滬191疫苗株對(duì)應(yīng)序列做基因親緣性關(guān)系分析[5]。結(jié)果顯示,11株麻疹野病毒均為H1基因型的H1a基因亞型 。

        3 討 論

        麻疹病毒的基因組中,核蛋白(Nucleoprotein,N)基因和血凝素(Hemagglutinin,HA)基因是變異較大的基因,特別是核蛋白N基因羧基(COOH)末端450個(gè)核苷酸是麻疹病毒基因組中變異最大的區(qū)域,在不同的麻疹野毒株之間變異程度可達(dá)12%。故N基因是國際上公認(rèn)對(duì)麻疹毒株鑒定的重要指標(biāo)。我國自1995年起,經(jīng)20個(gè)?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市)連續(xù)8年的病毒學(xué)監(jiān)測證實(shí)Hl型是中國本土優(yōu)勢基因型,并將Hl基因型進(jìn)一步劃分為Hla、Hlb、Hlc基因亞型[6-10]。經(jīng)檢測遼陽市2014年的麻疹流行與全國的流行趨勢基本相同。

        參考文獻(xiàn)

        [1] 張燕,許文波,朱貞,等.中國2003年流行的麻疹野病毒分子流行病學(xué)分析[J].中國計(jì)劃免疫,2005,11(3):165-174.

        [2] 許文波,朱貞,張珍英,等.麻疹野病毒H1基因型在中國流行的分析[J].中國計(jì)劃免疫,2003,9(1):l-7.

        [3] 田疆,孫英杰,馬艷,等.遼寧省麻疹病例病毒分離結(jié)果及基因型分析[J].中國公共衛(wèi)生,2002,18(5):86.

        [4] 寧夏,姚文清,王艷,等.遼寧省2001~2003年麻疹流行病學(xué)分析[J].中國公共衛(wèi)生,2004,20(11):106.

        [5] 王晶.泰安市1985-2008年麻疹流行特征分析[J].中國公共衛(wèi)生, 2011,27(7):944.

        [6] 杜彥克.沈陽市于洪區(qū)2009年麻疹疫情分析[J].中國公共衛(wèi)生, 2010,26(5):565.

        [7] 趙生倉.青海省麻疹野毒株的分離及基因型分析[J].中國公共衛(wèi)生,2004,20(2):128.

        [8] 王繼健,杜丹.營口地區(qū)麻疹局部暴發(fā)病例血清學(xué)分析[J].中國公共衛(wèi)生,2006,22(10):1156.

        [9] 顧全忠.舟山市1998-2007年麻疹監(jiān)測結(jié)果分析[J].中國公共衛(wèi)生,2009,25(7):877-878.

        [10] 邊疆,李凡,易世紅.吉林省流行麻疹野病毒的核蛋白基因特征[J].中國公共衛(wèi)生,2007,23(1):97-98.

        中圖分類號(hào):R511.1

        文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

        文章編號(hào):1671-8194(2016)09-0079-01

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