于峰

淺析沙門菌屬的臨床檢驗方法與意義

于峰

目的探討沙門菌屬的臨床檢驗方法與意義。方法26例腸胃炎患者,對其血液、糞便及尿液進(jìn)行實驗室檢驗,總結(jié)分析檢驗結(jié)果。結(jié)果對26例腸胃炎患者進(jìn)行血液、糞便及尿液的實驗室檢驗,26例患者的采集樣本中均檢出沙門菌屬。結(jié)論沙門菌屬?？蓪?dǎo)致患者出現(xiàn)腸胃炎、腸熱癥及敗血癥等疾病,為臨床中常見細(xì)菌,通過對患者采集樣本的實驗室檢驗,可以確定患者發(fā)病原因,進(jìn)行對癥治療。

沙門菌屬；檢驗方法；鑒定

沙門菌屬為一群寄生在人類與動物腸道內(nèi)的生化反應(yīng)與抗原結(jié)構(gòu)相類似地革蘭陰性桿菌,其可以從人與動物的體內(nèi)分離獲得［1］。沙門菌屬的致病性具有一定的種屬特異性,如傷寒沙門菌、乙型副傷寒沙門菌及甲型副傷寒沙門菌等種屬均對人可致病,會引發(fā)患者出現(xiàn)腸炎與腸熱癥,而豬霍亂沙門菌、鼠傷寒沙門菌及腸炎沙門菌等種屬對人與動物均存在一定的致病作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年8月～2016年2月本院收治的腸胃炎患者26例,其中男13例,女13例,年齡16～66歲,平均年齡(39.2±14.1)歲,所有患者均根據(jù)病情的不同采集器血液、糞便及尿液,并進(jìn)行實驗室檢驗。

1.2 標(biāo)本采集 根據(jù)患者病情與病程的不同,提取不同的標(biāo)本進(jìn)行檢驗(標(biāo)本最好在患者使用抗生素前進(jìn)行采集)。如根據(jù)患者腸熱癥的病程不同,在第1周內(nèi)可取血液進(jìn)行實驗室檢驗,在第2～3周可取糞便或尿液進(jìn)行實驗室檢驗［2］。血清學(xué)的診斷需要在病程的不同時期分別進(jìn)行2～3份的標(biāo)本采集。如胃腸炎患者可取糞便及嘔吐物進(jìn)行實驗室檢驗。

1.3 方法

1.3.1 檢驗方法

1.3.1.1 標(biāo)本直接檢查 取糞便、尿液等標(biāo)本直接制作涂片,在革蘭染色后進(jìn)行鏡檢。

1.3.1.2 分離培養(yǎng) 進(jìn)行分離沙門菌時常使用腸道培養(yǎng)基(MAC、SS、EMB等)與強(qiáng)選擇性的培養(yǎng)基(亞硫酸鉍瓊脂與孔雀綠瓊脂等)［3］。在對非傷寒沙門菌及各型副傷寒沙門菌之外的沙門菌分離時使用孔雀綠瓊脂的效果相對較好,而進(jìn)行傷寒沙門菌分離時選用亞硫酸鉍瓊脂的效果相對較好。除此之外,在暴發(fā)流行及篩選帶菌患者時,當(dāng)菌量較少時,初次進(jìn)行分離使用亞硒酸鹽及革蘭陰性菌肉湯(GN肉湯)增菌效果相對較好。不同的樣本在制作檢驗標(biāo)本時所選用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法各不相同,其方法分別為：①當(dāng)樣本為血液與骨髓液時,取血液樣本5ml或骨髓樣本0.5ml,將其加入到50ml的膽汁葡萄糖肉湯中進(jìn)行增菌培養(yǎng),如果有生長則可以移種到血平板與SS平板等培養(yǎng)基上；②當(dāng)樣本為糞便及肛門拭子時,可直接將其同時接種在SS平板與EMB/MAC平板等培養(yǎng)基上；③當(dāng)樣本為尿液與體液時,其需要以3 000 r/min進(jìn)行離心操作30min后,取其沉淀物在增菌后接種在血平板或EMB/MAC平板等培養(yǎng)基上；④當(dāng)樣本為可疑食物時,需將其在研磨后加入10倍量無菌的生理鹽水內(nèi)進(jìn)行混勻,而后接種在增菌肉湯與腸道選擇性的平板上。沙門菌屬在SS平板上為透明或不透明、中央黑色或無色的菌落,在MAC與 EMB平板上呈現(xiàn)無色透明的菌落群［4］。

1.3.2 鑒定方法 取上述的可疑菌落進(jìn)行涂片染色,進(jìn)一步的進(jìn)行生化試驗,如果反應(yīng)的結(jié)果符合數(shù)據(jù)要求,則可以初步鑒定其為沙門菌屬。而后再根據(jù)數(shù)據(jù)所列生化反應(yīng)試驗和血清學(xué)的試驗鑒定菌屬的種與型［5］。沙門菌屬血清學(xué)的鑒定基本方法為：使用沙門菌屬抗血清對已經(jīng)分離的菌株按照O抗原、第一相以及第二相H抗原的順序進(jìn)行玻片凝集。在臨床中常見的沙門菌屬>95%為A～F群,因此需要先使用A～F多價O血清進(jìn)行玻片的凝集,在確定其為A～F群后,使用單價O因子進(jìn)行血清鑒定至具體群,而后再使用第一相和第二相H因子進(jìn)行血清定型［6］。如果細(xì)菌生化的反應(yīng)符合沙門菌屬的反應(yīng),但和A～F多價O血清未產(chǎn)生凝集的現(xiàn)象,需要考慮是否存在表面抗原(Vi),可以將細(xì)菌懸液進(jìn)行水浴加熱30min后再次進(jìn)行凝集試驗。若除去Vi抗原后血清仍不能凝集,則需要考慮A～F以外的菌群可能。

2 結(jié)果

對26例腸胃炎患者進(jìn)行血液、糞便及尿液的實驗室檢驗,26例患者的采集樣本中均檢出沙門菌屬。

3 討論

沙門菌屬部分毒株可以借助菌毛吸附在小腸黏膜的上皮細(xì)胞處。存在Vi抗原的部分沙門菌屬具有較強(qiáng)的侵襲力,可以穿過小腸的上皮達(dá)固有層部分。沙門菌屬存在相對較強(qiáng)的內(nèi)毒素,可以引起患者出現(xiàn)發(fā)熱及白細(xì)胞改變,甚至是中毒性休克。其還能激活患者的補(bǔ)體系統(tǒng),引發(fā)一系列的病理與生理的變化［7］。部分沙門菌屬(如鼠傷寒沙門菌)可以產(chǎn)生與大腸埃希菌類似的腸毒素,會導(dǎo)致患者出現(xiàn)早期水樣的腹瀉。沙門菌屬主要通過污染水源與食物經(jīng)口進(jìn)行感染,可以引發(fā)胃腸炎、食物中毒、慢性腸炎及敗血癥。如果患者的腸熱癥的病程較長,因使用抗生素,患者的臨床癥狀不具有典型性,且臨床標(biāo)本的分離陽性率相對較低,因此常使用肥達(dá)反應(yīng)進(jìn)行輔助診斷。肥達(dá)反應(yīng)為使用已知的傷寒沙門菌O、H抗原與甲型、乙型及丙型副傷寒沙門菌H抗原同受檢患者的血清開展凝集試驗,檢測受檢患者的血清中是否存在相應(yīng)的抗體以及效價,以此來輔助診斷傷寒與副傷寒。其檢測結(jié)果需要結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)、病程及病史等情況進(jìn)行綜合的分析。O抗原刺激機(jī)體出現(xiàn)免疫球蛋白M(IgM)抗體,患者的癥狀出現(xiàn)的較早,抗體在其血清中存在時間相對較短［8-10］。H抗原在刺激機(jī)體后產(chǎn)生免疫球蛋白G(IgG),患者癥狀出現(xiàn)的較遲,但持續(xù)的時間相對較長。健康的機(jī)體因隱性的感染及疫苗的接種,在血清中可能會存在一定數(shù)量抗體。通常傷寒沙門菌 O凝集的效價達(dá)到1：80及以上、H抗體的效價達(dá)到1：160及之上、各型的副傷寒沙門菌的H抗體效價達(dá)到1：80及以上。通常情況下,O、H的凝集效價均會升高,則可判斷為傷寒或副傷寒等。O凝集的效價不提升,H凝集的效價上升。O凝集的效價上升而H凝集的效價不提升則可以判斷為早期感染或其他的沙門菌感染,其可以在1周后進(jìn)行復(fù)查,如果H升高則可以進(jìn)行診斷。

［1］陳強(qiáng),余曉君,李俏俏,等.引起兒童腹瀉的沙門菌屬臨床分離株的耐藥特點(diǎn)及分子流行病學(xué)研究.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2011,34(3):249-253.

［2］肖征,劉秀貞.恒溫擴(kuò)增核酸法檢測沙門菌屬效果分析.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2012,22(22):5167-5169.

［3］江曉,葉艷華,金萍,等.雙色實時熒光PCR法快速檢測感染性腹瀉人群中的沙門菌和志賀菌.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2015,25(15): 2453-2455.

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［8］李愛華,陳金玲,陳志曉,等.沙門菌屬流行血清型分型及耐藥性分析.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(23):3019-3020.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.21.031

2016-09-14］

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