譚　杏　楊茜蕓　林亞平

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，湖南　長沙　410208)

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艾灸足三里穴對衰老大鼠學(xué)習(xí)記憶及抗疲勞能力的影響

譚杏1楊茜蕓林亞平

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，湖南長沙410208)

摘要〔〕目的觀察艾灸足三里穴對D-半乳糖致衰老大鼠學(xué)習(xí)記憶及抗疲勞能力的影響。方法健康青年雄性SD大鼠36只，按完全隨機(jī)設(shè)計分為3組：空白對照組、衰老模型組、艾灸組，每組各12只。模型組及艾灸組大鼠按0.125 g·kg-1·d-1從頸背部皮下注射10%D-半乳糖，連續(xù)6 w，每天1次，空白對照組每天注射等量的生理鹽水；艾灸組造模后每穴每天灸5壯，每次25 min左右，隔天1次，共治療15次，空白對照組及衰老模型組大鼠捆綁固定25 min，隔天1次，共15次。采用Morris水迷宮實驗檢測各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，動物跑臺實驗檢測各組大鼠的抗疲勞能力。結(jié)果造模后，衰老模型組及艾灸組大鼠Morris水迷宮潛伏時間及探索總路程較造模前明顯延長(P<0.01)；實際跑步時間較造模前明顯減少(P<0.01)、電擊次數(shù)顯著增加(P<0.01)；與空白對照組比較有明顯差異(P<0.01)。艾灸治療后，艾灸組大鼠Morris水迷宮潛伏時間及探索總路程較造模前顯著縮短(P<0.05)、實際跑步時間較造模前明顯增加(P<0.05)、電擊次數(shù)顯著減少(P<0.05)；與衰老模型組比較有明顯差異(P<0.01)。結(jié)論艾灸足三里穴能夠明顯改善衰老大鼠的學(xué)習(xí)記憶及抗疲勞能力。

關(guān)鍵詞〔〕艾灸；足三里穴；D-半乳糖；學(xué)習(xí)記憶；抗疲勞能力

1湖南中醫(yī)藥大學(xué)研究生院

第一作者：譚杏(1986-)，女，碩士，助教，主要從事針灸治病的臨床與實驗研究。

衰老是隨著年齡增長到成熟期后所出現(xiàn)的生理性退化。對于衰老研究有助于進(jìn)一步延續(xù)生命，增加壽限，提高生活質(zhì)量，認(rèn)識生命本質(zhì)。衰老是生命進(jìn)程中必然的客觀規(guī)律，學(xué)習(xí)記憶和抗疲勞能力的減退是衰老的重要標(biāo)志之一，在衰老進(jìn)程中出現(xiàn)較早且明顯〔1〕。因此改善學(xué)習(xí)記憶及抗疲勞能力是延緩衰老的一個重要環(huán)節(jié)。本實驗采用D-半乳糖致衰老大鼠模型，以衰老大鼠的一般狀況、學(xué)習(xí)記憶及抗疲勞能力為效應(yīng)指標(biāo)，觀察艾灸足三里穴延緩衰老的作用。

1材料與方法

1.1實驗動物健康清潔級雄性SD大鼠36只，體重250 g左右，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。飼養(yǎng)于12 h光照/12 h黑暗的環(huán)境下，自由攝食和飲水，標(biāo)準(zhǔn)大鼠顆粒飼料喂養(yǎng)，室溫控制在23℃～27℃，濕度保持在75%左右。

1.2藥品及試劑施灸材料為蘇州東方艾絨廠生產(chǎn)的“神灸300灸”艾炷(型號：東方一型),直徑0.5 cm，高0.8 cm。D-半乳糖由美國Sigma公司生產(chǎn)，用生理鹽水配成10%的濃度。

1.3主要儀器Morris水迷宮，BI2000圖像分析系統(tǒng)(成都泰盟公司產(chǎn)品)。動物跑臺(上海欣軟信息科技有限公司產(chǎn)品)。

1.4動物分組及D-半乳糖致衰老大鼠模型的建立〔2〕健康清潔級SD雄性大鼠36只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，將大鼠編號、稱重，隨機(jī)分為空白對照組、衰老模型組、艾灸組，每組12只?？瞻讓φ战M大鼠按0.125 g·kg-1·d-1從頸背部皮下注射0.9%的生理鹽水，連續(xù)6 w，每天一次；衰老模型組按0.125 g·kg-1·d-1從頸背部皮下注射10%的D-半乳糖，連續(xù)6 w，每天1次。

1.5選穴及處理方法穴位定位根據(jù)《實驗針灸學(xué)》中“動物針灸穴位圖譜”所定〔3〕，“足三里”在膝關(guān)節(jié)下方，腓骨小頭下3 mm處的肌溝中。艾灸組用鼠板將大鼠仰臥位捆綁固定，剪去穴區(qū)毛發(fā)，將艾炷貼附于穴位處，用線香從上將其點燃，燃盡后更換1壯，每穴5壯，每次25 min左右，隔天1次，共治療15次。空白對照組、衰老模型組大鼠捆綁固定25 min，隔天1次，共15次。

1.6觀測指標(biāo)及實驗步驟

1.6.1一般狀況觀察觀察大鼠的精神狀態(tài)、皮毛色澤，掉毛情況，行為活動，飲食情況、大小便等，并在實驗過程中每周測1次體重，觀察體重的變化。

1.6.2Morris水迷宮法學(xué)習(xí)記憶能力測試Morris水迷宮圓形水池：為一圓形鐵皮水桶，直徑100 cm，高50～60 cm，水深30～40 cm，其中內(nèi)置1個直徑9 cm圓形平臺，藏匿于2 cm的水面之下，水池內(nèi)部不得有任何標(biāo)記。水中適量加入二氧化鈦，使其成為不透明的乳白色。在圓桶的上緣等距離地設(shè)置東、南、西、北4個標(biāo)記點，作為動物進(jìn)水池的入水點，這4個入水點在水面和水桶底部的投影點，將水面和水桶部分均等的分為4個象限。按實驗要求，可任意將平臺設(shè)置于某一象限的中間，水溫保持在23℃～25℃。先對動物進(jìn)行學(xué)習(xí)訓(xùn)練5 d，訓(xùn)練時，將大鼠面向池壁從4個入水點分別放入池中，記錄大鼠從入水到找到水下隱藏平臺并站立于其上所需要的時間，作為潛伏期，用(s)表示，大鼠找到平臺后，讓其在平臺上站立10 s，若入水后120 s大鼠未能找到平臺，則將其輕輕從水中拖上平臺，并停留10 s，然后進(jìn)行下一次訓(xùn)練。每只大鼠從四個入水點分別放入水池中為一次訓(xùn)練，兩次訓(xùn)練相隔30 s。每次訓(xùn)練完成后，迅速將動物洗凈擦干，置于加熱器旁，以防動物低體溫。于造模前、造模后、治療后每只大鼠訓(xùn)練3 d，每天測量4次，取其平均值〔4〕。

1.6.3動物跑臺法抗疲勞能力測試跑臺有三個跑道主體，中間有兩個隔離板將其隔開，跑道長度為580 mm，寬度為85 mm，高度為120 mm，電刺激量為0.8～4.2 mA，刺激電壓100 V范圍內(nèi)，跑道速度可調(diào)范圍0～40 m/min，跑臺傾角±35°范圍可調(diào)，實驗結(jié)果可通過與之相連的熱敏打印機(jī)打印出來。大鼠按順序編號，動物跑臺的每個通道分別放入一只大鼠，時間設(shè)置為5 min(300 s)，速度為30 m/min，電刺激為4.2 mA。觀察大鼠運動速度、測試時間、刺激次數(shù)、運行距離，以了解大鼠抗疲勞能力。于動物給藥前、給藥后、治療后各測1次。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法符合正態(tài)分布和方差齊性者，行配對t檢驗及方差分析，不符合正態(tài)分布者采用秩和檢驗，全部數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件。

2結(jié)果

2.1艾灸足三里穴對D-半乳糖致衰老大鼠一般狀態(tài)及體重的影響空白對照組大鼠毛色白且光澤，無掉毛現(xiàn)象，精神狀態(tài)佳，活動自如，反應(yīng)靈敏，飲食正常，尿液和糞便色形正常；衰老模型組大鼠個體大，毛色枯黃卷曲，掉毛現(xiàn)象嚴(yán)重，光澤度欠佳，精神不振，活動減少，反應(yīng)遲鈍，飲食不佳，大便溏浠臭穢，小便次數(shù)多騷臭；艾灸組大鼠的精神狀態(tài)明顯改善，行動相對靈活，毛發(fā)較潤澤，食欲、大小便情況均有所改善。與空白對照組比，衰老模型組大鼠體重增長明顯緩慢(P<0.05)，艾灸足三里穴后，衰老大鼠體重顯著增長，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2艾灸足三里穴對D-半乳糖致衰老大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響造模后，衰老模型組及艾灸組大鼠Morris水迷宮潛伏時間及探索總路程較造模前明顯延長(P<0.01)；與空白對照組比較有明顯差異(P<0.01)。治療后，艾灸組大鼠Morris水迷宮潛伏時間及探索總路程較造模前顯著縮短(P<0.05)；與衰老模型組比較有明顯差異(P<0.05)。見表2。

表1各組大鼠體重變化(g,n=12)

組別1w2w3w4w5w6w7w8w9w10w空白對照組233.75250.21275.58306.41335.21351.15366.78374.53391.41421.58衰老模型組240.581)275.181)272.041)260.921)270.081)279.461)289.31)294.411)298.671)308.421)艾灸組240.552)265.582)286.922)314.162)338.732)351.262)367.652)374.422)382.772)416.762)

與空白對照組比較：1)P<0.05，與衰老模型組比較：2)P<0.05

組別潛伏時間(s)造模前造模后治療后探索總路程(cm)造模前造模后治療后空白對照組47.89±29.5042.65±39.3742.01±18.71515.70±172.56391.81±155.40340.21±128.37衰老模型組46.56±15.6198.13±30.53)113.75±21.81)3)526.70±88.252885.0±105.203)3190.90±355.701)3)艾灸組44.29±16.6379.72±38.053)32.24±7.671)2)4)600.18±56.471867.30±90.543)641.83±53.821)2)3)

與造模前比較：1)P<0.01；與治療后比較：2)P<0.05;與空白對照組比較：3)P<0.05；與衰老模型組比較：4)P<0.05,5)P<0.01，下表同

2.3艾灸足三里穴對D-半乳糖致衰老大鼠抗疲勞能力的影響造模后，衰老模型組及艾灸組實際跑步時間較造模前明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，電擊次數(shù)顯著增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與空白對照組比較有明顯差異，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。治療后，艾灸組實際跑步時間較造模后明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，電擊次數(shù)顯著減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；艾灸組大鼠實際跑步時間較衰老模型組明顯延長、電擊次數(shù)明顯減少(P<0.01)。見表3。

組別實際跑步時間(s)造模前造模后治療后電擊次數(shù)(次)造模前造模后治療后空白對照組286.08±9.56262.08±36.49251.00±33.166.00±6.628.20±6.6210.20±3.76衰老模型組297.92±2.4385.75±41.631)3)25.42±24.113)6.50±2.8327.80±11.011)3)36.40±7.573)艾灸組294.00±7.67102.00±39.581)2)3)251.92±32.085)7.10±3.0730.90±12.961)2)3)10.20±2.975)

3討論

中醫(yī)對于延緩衰老的研究及實踐有著悠久的歷史，早在《素問·上古天真論》中就有關(guān)于衰老的精辟論述，“上古之人，其知道者，法于陰陽，和于術(shù)數(shù)，食飲有節(jié)，起居有常，不妄作勞，故能形與神俱，而盡終其天年，度百歲乃去”。灸療法是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中針灸學(xué)重要組成部分，具有溫通氣血、扶病祛邪和防病保健等功效?！夺t(yī)學(xué)帛書》中就提出“灸則強食產(chǎn)肉”?！侗怡o心書》提出：“保命之法，灼灸第一.人于無病時常灸關(guān)元、氣海、命門、中脘.雖未得長生，亦可保百余年壽矣”?！额惤?jīng)圖翼》：“神闕行隔鹽灸，艾灸至三五百壯，不惟疾愈，亦且延年”?？梢娍顾ダ系陌寞煼ㄔ趥鹘y(tǒng)中醫(yī)理論實踐中具有悠久歷史，古代醫(yī)家認(rèn)為艾灸不僅可以益壽延年，還可無病先防，有病早治?，F(xiàn)代研究也表明，艾灸具有鎮(zhèn)痛、改善血循環(huán)、調(diào)整代謝紊亂、調(diào)節(jié)免疫功能、調(diào)整臟腑功能、抗感染等作用〔5〕。足三里穴是多氣多血足陽明胃經(jīng)之合穴,為氣血百川歸海之穴,有調(diào)脾胃、養(yǎng)氣血、扶正壯陽之功,為中醫(yī)傳統(tǒng)的強壯保健要穴。通過在具有保健功效作用的足三里穴上施灸，逐漸積累灸效，以達(dá)到防病保健的目的。常灸之能溫中散寒、宣通氣機(jī)、延年益壽〔6,7〕?！夺樉恼嫠琛啡眨骸熬娜锟墒怪畾獠凰?，故稱長壽之灸”?！锻馀_秘要》曰：“三里養(yǎng)后天之氣，灸三里可使元氣不衰。”《資生經(jīng)》云：“若要安,丹田三里不曾干”?！叭锞摹?自古為歷代醫(yī)家所推崇，且在延緩衰老及保健防病方面的作用更是得到了國際公認(rèn)〔8〕?，F(xiàn)代研究表明，王淑娟等〔9〕艾灸關(guān)元、足三里穴可以提高不同月齡大鼠的學(xué)習(xí)及記憶能力；韋良玉等〔10〕艾炷灸、電針能夠改善D-半乳糖衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。

學(xué)習(xí)是指接受外界環(huán)境的信息而影響自身行為的過程；而記憶是指對獲得的信息在腦內(nèi)進(jìn)行儲存、加工和提取的過程。腦為元神之腑，為精髓匯聚之處，具有統(tǒng)領(lǐng)全身的作用。而學(xué)習(xí)、記憶是腦的高級神經(jīng)活動，既是認(rèn)知活動的組成部分，也是重要的智力因素〔11,12〕?！鹅`樞·海論》說：“髓海有余，則輕勁多力，自過其度；髓海不足，則腦轉(zhuǎn)耳鳴，脛酸眩冒，目無所見，懈怠安臥”。現(xiàn)代研究證實衰老首先從大腦開始，繼而遍及全身各組織器官。疲勞是機(jī)體復(fù)雜的生理生化變化所體現(xiàn)的綜合反應(yīng)。機(jī)體在代謝過程中，如果自由基產(chǎn)生過多或清除速度減慢，都會對組織細(xì)胞造成損傷，使運動耐力下降，最終產(chǎn)生體力疲勞〔13〕。

學(xué)習(xí)記憶力及抗疲勞能力下降是衰老重要標(biāo)志之一,本實驗提示其學(xué)習(xí)和記憶的獲得與鞏固過程提高；在動物跑臺實驗中，艾灸組大鼠的實際跑步時間長于衰老模型組、電擊次數(shù)顯著少于衰老模型組，提示其抗疲勞能力提高。

總之，艾灸足三里穴可以明顯改善D-半乳糖致衰老模型大鼠的一般狀況、學(xué)習(xí)記憶力及抗疲勞能力，能在一定程度上延緩衰老，為臨床延緩衰老、防治老年疾病選穴及治療方法提供理論依據(jù)。

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〔2014-02-17修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)

通訊作者：林亞平(1956-)，女，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事針灸治病的臨床與實驗研究。

基金項目：湖南省中醫(yī)藥管理局課題(No.201132)

中圖分類號〔〕R749〔

文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)24-6976-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.005