張淑萍　楊利敏　朱曉峰　秦麗紅　宣兆博　許曉燕　吳成吉　劉文娟　于鳳偉　阿巴斯

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院神經科，黑龍江　佳木斯　154002)

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卡托普利對D-半乳糖聯(lián)合Aβ1～42致老年癡呆大鼠學習記憶能力的影響

張淑萍楊利敏朱曉峰秦麗紅宣兆博許曉燕吳成吉劉文娟于鳳偉阿巴斯

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院神經科，黑龍江佳木斯154002)

摘要〔〕目的觀察人血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)對D-半乳糖聯(lián)合β淀粉樣蛋白(Aβ)1～42致阿爾茨海默病(AD)大鼠學習記憶能力的影響。方法3個月齡健康SD大鼠75只，隨機分為青年(A)組、假手術(B)組、模型(C)組、模型+卡托普利(1.5 mg/kg/d)劑量(D)組、模型+卡托普利(2.5 mg/kg/d)劑量(E)組，每組15只。采用L-NNA腹腔注射制作高血壓模型，D-半乳糖聯(lián)合海馬區(qū)注射Aβ1～42制作AD模型。利用Morris水迷宮，觀察ACEI對高血壓合并AD大鼠學習記憶能力的影響。結果平均逃避潛伏期：與C組比，D組、E組明顯縮短(P<0.05)，D組、E組差異不顯著(P>0.05)。穿越平臺次數：與C組相比，D組、E組穿越平臺次數明顯增多(P<0.05)，且E組優(yōu)于D組(P<0.05)。藥物干預后D、E組較造模后穿越原平臺次數明顯增多(P<0.01)。結論ACEI可以改善高血壓合并AD大鼠學習記憶能力，阻止AD的認知功能減退。

關鍵詞〔〕血管緊張素轉換酶抑制劑；阿爾茨海默??；卡托普利；淀粉樣蛋白(Aβ)1～42

第一作者：張淑萍(1969-)，女，副教授，醫(yī)學碩士，碩士生導師，主要從事神經病學研究。

阿爾茨海默病(AD)的發(fā)病機制及病因尚不十分確切，亦無有效的抗AD藥物。Gao等〔1，2〕的研究結果顯示，中樞性血管緊張素轉化酶抑制劑(ACEI)作為一類可透過血腦屏障的高血壓藥物，與減緩認知下降相關。本實驗觀察卡托普利對AD大鼠學習記憶能力的影響，探究ACEI對老年癡呆的影響。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物分組3個月齡健康清潔級SD大鼠75只，體重(190.2±21.4)g(哈爾濱醫(yī)科大學實驗動物中心提供)。常規(guī)飼養(yǎng)1 w后，隨機分為青年組(A組)、假手術組(B組)、模型組(C組)、模型+卡托普利(1.5 mg·kg-1·d-1)組(D組)和模型+卡托普利(2.5 mg·kg-1·d-1)組(E組)，每組15只。

1.1.2主要藥物和試劑D-半乳糖溶液(上海試劑二廠)、Aβ1～42(上海江萊生物科技有限公司)；左旋硝基精氨酸(L-NNA)(Sigma)；卡托普利片(哈藥集團三精制藥諾捷有限責任公司)。

1.2方法

1.2.1造模與用藥L-NNA 15 mg·kg-1·d-1分兩次腹腔注射，連續(xù)4 w，建立高血壓大鼠模型〔3〕。同時大鼠頸背部皮下注射D-半乳糖0.125 g·kg-1·d-1，連續(xù)注射5 w后，在海馬區(qū)注入凝聚態(tài)Aβ1～42溶液(10 μg/μl)〔4〕。術后連續(xù)3 d腹腔注射青霉素10萬U/d，制作AD模型。造模成功后，D組給予卡托普利1.5 mg·kg-1·d-1灌胃，E組給予卡托普利 2.5 mg·kg-1·d-1灌胃，A、B和C組以等量生理鹽水灌胃，灌胃體積為20 ml·kg-1·d-1，連續(xù)30 d。

1.2.2行為學測試參照文獻〔5～7〕，利用Morris水迷宮進行定位航行和空間探索試驗，檢測大鼠對空間方向感和位置感的學習及記憶能力。采用直徑120 cm，高50 cm的圓形水池，預先在水池中注入含奶粉(濃度以看不見平臺為準)的清水，高出平臺2 cm(水深約30 cm)。溫度(21±1.5)℃，每只動物尋找的平臺位置不變，觀察記錄大鼠自入水到找到平臺的游泳路徑及時間(逃避潛伏期)。設2 min為最長游泳時間，若大鼠在2 min內找到平臺，讓其在平臺停留30 s。若找不到平臺，則將大鼠引導至平臺并停留30 s。每天訓練5次，持續(xù)6 d。第7天撤掉平臺，記錄1 min內大鼠跨越原平臺相應位置的次數。

1.3統(tǒng)計學方法使用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，秩和檢驗。

2結果

2.1平均逃避潛伏期造模后，各組平均逃避潛伏期，C、D、E組與A、B組相比時間延長(P<0.05，P<0.01)，說明AD后，大鼠的學習、記憶能力下降；藥物干預后第1、2天，各組間平均逃避潛伏期差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，第3天，與A組、B組相比，C組明顯增加(P<0.01)；與C組相比，D組、E組明顯縮短(P<0.05)，D組、E組差異不顯著(P>0.05)。第4天，與A組、B組相比，C組明顯增加(P<0.01)；與C組相比，D組、E組明顯縮短(P<0.05，P<0.01)，D組、E組之間相比，差異不顯著(P>0.05)。第5天，D、E組較C組時間縮短(P<0.05，P<0.01)，但沒有達到A及B組的水平，見表1 。

2.2120 s穿越平臺次數造模后，與A組(7.90±1.47)、B組(7.75±1.54)比較，C組(3.85±1.40)、D組(3.80±1.33)、E組(3.85±1.29)穿越平臺次數明顯減少(P<0.01)，C、D、E組差異不顯著(P>0.05)；藥物干預后，D組(5.70±1.47)、E組(6.55±1.53)與C組(3.80±1.82)相比，穿越平臺次數明顯增多(P<0.05)，且E組優(yōu)于D組(P<0.05)，但是尚未達到A組(7.90±1.56)、B組(7.85±1.45)水平。藥物干預后D、E組分別較造模后明顯增多(P<0.01)。

組別造模后第1天第2天第3天第4天第5天藥物干預后第1天第2天第3天第4天第5天A組54.74±8.3746.67±8.0329.58±7.6923.30±7.3818.85±7.4253.47±8.5445.88±8.4828.67±9.6923.50±7.4318.53±7.87B組55.25±9.1645.25±8.4829.47±8.1123.57±7.3619.47±8.6054.16±10.1345.50±9.0428.42±8.8723.40±7.1619.10±8.30C組66.15±11.3260.28±11.291)52.38±10.261)47.75±10.652)42.35±11.242)65.75±11.0459.90±11.6653.85±10.692)47.14±11.312)33.27±10.502)D組65.47±12.0460.55±11.221)52.05±10.351)48.45±10.852)43.10±9.462)63.27±11.5056.45±10.5138.21±9.773)33.47±8.603)29.88±8.433)E組66.82±11.3659.77±10.481)51.80±11.221)47.70±11.802)42.25±10.252)61.70±10.6753.26±10.2236.66±9.832)31.34±8.334)26.46±8.364)

與A組或B組比較:1)P<0.05，2)P<0.01;與C組比較:3)P<0.05，4)P<0.01

3討論

AD是一種以認知和記憶損害為主要臨床表現(xiàn)的慢性、進行性、神經系統(tǒng)退行性疾病。其發(fā)病機制為細胞外Aβ沉積所導致的老年斑(SP)的形成，Tau蛋白過度磷酸化導致神經元纖維纏結(NFTs)及神經元的凋亡缺失〔8〕等。學習記憶的主要部位在海馬區(qū)及皮層經元。在高血壓的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用的是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAS)，其中血管緊張素Ⅱ是主要的效應肽。ACEI抑制血管緊張素Ⅰ轉換為血管緊張素Ⅱ，產生降壓效應。卡托普利是ACEI典型代表藥物之一〔9〕?？ㄍ衅绽梢愿纳艫D大鼠的學習記憶能力，可用于AD的治療，其信號傳導途徑及適當的劑量有待深入研究。

參考文獻4

1Gao Y，O′Caoimh R，Healy L，etal.Effects of centrally acting ACE inhibitors on the rate of cognitive decline in dementia〔J〕.BMJ Open，2013；3(7)：74-6.

2O′Caoimh R，Healy L，Gao Y，etal.Effects of centrally acting angiotensin converting enzyme inhibitors on functional decline in patients with Alzheimer′s disease〔J〕.J Alzheimers Dis，2014；40(3)：595-603.

3高連如，趙云濤，石湘蕓，等.左旋硝基精氨酸誘導大鼠持續(xù)性高血壓〔J〕.基礎醫(yī)學與臨床,1995;15(3)：49-53.

4George P，Charles W.The rat brain in sterrotaxic coordinated〔M〕.4th ed. Sydney:Academic Press Australia，1998:80-9.

5Hagan JJ，Salamone JD，Simpson J，etal.Place navigation in rats is impaired by lesions of medial septum and diagonal band but not nucleus basalis magnocellularis〔J〕.Behav Brain Res,1988;27(1)：9-20.

6王維剛，周嘉斌，朱明莉，等.Morris水迷宮實驗在小鼠表型分析中的應用〔J〕.中國細胞生物學學報，2011;33(1)：8-14.

7王俊亞，張冬梅.Morris 水迷宮實驗的測試方法介紹及注意事項〔J〕.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2012;28(21)：3289-90.

8Forman MS，Trojanowski JQ，Lee VM.Neurodegenerative diseases：a decade of discoveries paves the way for therapeutic breakthroughs〔J〕.Nat Med，2004;10(10)：1055-63.

9袁發(fā)煥，陳雨.ACEI / ARB 在腎臟病中的合理應用〔J〕.中國中西醫(yī)結合腎病雜志，2014;15(8)：659-62.

〔2014-09-11修回〕

(編輯苑云杰)

基金項目：黑龍江省自然科學基金(No.C201242)

中圖分類號〔〕R742〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)23-6694-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.021