龔曉猛，張美，吳珊珊，李夢(mèng)琪，胡麒， 胡昌江

·炮制制劑·

山枝仁炒制前后槲皮素的含量測(cè)定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

龔曉猛，張美，吳珊珊，李夢(mèng)琪，胡麒， 胡昌江

目的：測(cè)定山枝仁炒制前后槲皮素含量，擬建立生山枝仁和炒山枝仁質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：按照藥典相應(yīng)項(xiàng)目下規(guī)定，測(cè)定山枝仁炮制前后的水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物含量；并采用高效液相色譜法，測(cè)定槲皮素含量。結(jié)果：生山枝仁水分不得超過(guò)12％，總灰分不得超過(guò)6.0％，酸不溶性灰分不得超過(guò)0.7％，浸出物不得少于10.0％，含槲皮素量均不得少于0.10％；炒山枝仁水分不得過(guò)11％，總灰分不得超過(guò)6.0％，酸不溶性灰分不得過(guò)0.8％，浸出物不得少于11.0％，槲皮素含量不得少于0.13％。結(jié)論：建立了山枝仁炒制前后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并測(cè)定了炮制前后槲皮素含量，其操作方法簡(jiǎn)便，具有良好的精密度和重復(fù)性，可作為本產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法。

生山枝仁；炒山枝仁；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；槲皮素；含量測(cè)定

山枝仁為海桐花科海桐花屬植物皺葉海桐Pittosporumcrispulum Gagnep.或海金子Pittosporum illicioides Mak.的干燥種子。秋后果實(shí)成熟時(shí)采收，除去果殼及雜質(zhì)，干燥。本品歷代本草未見(jiàn)記載，但在四川有較長(zhǎng)使用歷史。主產(chǎn)于四川省大邑縣、宜賓市、瀘州市、富順縣、樂(lè)山市等地。具有清熱利濕、生津止咳、收斂止瀉的功效。用于虛煩心熱，口渴咽痛，痢疾，腸炎，白帶，體倦乏力等［1～2］。山枝仁在臨床使用，品種來(lái)源不清，導(dǎo)致品種混亂，影響臨床療效［3］。目前，山枝仁收載于《四川中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2010年版一部，收載了海金子，皺葉海桐植物形態(tài)描述、產(chǎn)地分布，薄層鑒別，水分，總灰分，酸不溶性灰分，浸出物含量，但缺少對(duì)山枝仁化學(xué)成分含量測(cè)定［2］?！端拇ㄊ≈兴幉臉?biāo)準(zhǔn)》2010年版已收載炒山枝仁飲片規(guī)格，但無(wú)該飲片標(biāo)準(zhǔn)，考慮到炒山枝仁在市場(chǎng)有流通，因此，本文對(duì)山枝仁炮制前后槲皮素含量測(cè)定進(jìn)行研究，還擬定了炒山枝仁水分，總灰分，酸不溶性灰分，浸出物限量，為進(jìn)一步制定山枝仁炮制前后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

山枝仁（10批藥材經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)蔣桂華教授鑒定為海桐花科海桐花屬植物海金子 Pittosporum illicioides Mak.的干燥種子），Agilent1200高效液相色譜儀，美國(guó)Agilent公司，KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司，電子天平，德國(guó)Sartorius公司，色譜純甲醇、水（二次蒸餾水），乙酸乙酯，石油醚（30～60 ℃），其它試劑均為分析純。

2 檢查

2.1水分

按照水分測(cè)定法（烘干法）［4］分別測(cè)定10批生山枝仁樣品，10批炒山枝仁樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。生山枝仁飲片10.88～11.91 ％，平均值為11.20 ％，炒山枝仁飲片為9.86～10.48 ％，平均值為10.06 ％。故規(guī)定生山枝仁水分不得超過(guò)12％，炒山枝仁水分不得過(guò)11％，收入標(biāo)準(zhǔn)正文。

2.2總灰分

按照總灰分測(cè)定法［4］分別測(cè)定10批生山枝仁樣品，10批炒山枝仁樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。生山枝仁飲片4.51～5.94％，平均值為5.14％，炒山枝仁飲片為3.95～5.33 ％，平均值為4.71 ％。故規(guī)定生山枝仁總灰分不得超過(guò)6.0％，炒山枝仁總灰分不得超過(guò)6.0％，收入標(biāo)準(zhǔn)正文。

2.3酸不溶性灰分

按照酸不溶性灰分測(cè)定法［4］分別測(cè)定10批生山枝仁樣品，10批炒山枝仁樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。生山枝仁飲片0.58～0.73 ％，平均值為0.63 ％，炒山枝仁飲片為0.63～0.77 ％，平均值為0.70 ％ 。故規(guī)定生山枝仁酸不溶性灰分不得超過(guò)0.7％，炒山枝仁酸不溶性灰分不得過(guò)0.8％，收入標(biāo)準(zhǔn)正文。

2.4浸出物

以50 ％乙醇為溶劑，按照醇溶性浸出物測(cè)定項(xiàng)下熱浸法［4］操作，分別測(cè)定10批生山枝仁樣品，10批炒山枝仁樣品，結(jié)果見(jiàn)表1。生山枝仁飲片10.97～12.09 ％，平均值為11.57 ％，炒山枝仁飲片為11.05～12.15 ％，平均值為11.64 ％。故規(guī)定生山枝仁浸出物不得少于10.0％，炒山枝仁浸出物不得少于11.0％，收入標(biāo)準(zhǔn)正文。

3 槲皮素含量測(cè)定方法與結(jié)果

3.1對(duì)照品溶液及供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取0.0074 g槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成濃度為1.48 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品粉末2 g，加石油醚（30～60 ℃）40 mL，超聲處理15 min，濾過(guò)，棄去濾液，殘?jiān)貜?fù)處理一次。殘?jiān)右宜嵋阴?0 mL，水浴回流30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液［5］。

3.2色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱： DiamonsilC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），甲醇-0.4 ％磷酸溶液（47∶53）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm，柱溫：35 ℃，進(jìn)樣量：10 μL，在上述色譜條件下，槲皮素的保留時(shí)間約為7.6 min，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)不低于2500。

3.3方法學(xué)考察

3.3.1線性關(guān)系考察 精密稱(chēng)取0.0074g槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成濃度為1.48 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按1，2，3，4，5，10 μL體積進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以槲皮素進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。經(jīng)計(jì)算得到槲皮素的回歸方程為Y= 992.1X- 3.3677，相關(guān)系數(shù)r= 0. 9999，表明槲皮素在 0.148～1.48 μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

3.3.2重復(fù)性考察 取同一批次的山枝仁6份，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定結(jié)果樣品中槲皮素含量（n=6）為0.998 ％，RSD為0.89 ％，表明本法的重復(fù)性良好，符合要求。

3.3.3精密度考察 按照“2.1”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，同一樣品精密吸取10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定結(jié)果槲皮素在樣品中的百分含量（n=6）為0.998 ％，RSD為1.8 ％，表明精密度良好。

3.3.4加樣回收率考察 精密稱(chēng)取對(duì)照品槲皮素含量（0.998 ％） 約30 mg，共6份，分別精密加入供試品溶液1 mL，按2.1項(xiàng)下方法制備供試溶液，依法測(cè)定，計(jì)算結(jié)果平均回收率（n=6）為97.9 ％，RSD為0.89 ％，表明本法準(zhǔn)確性良好。

3.3.5穩(wěn)定性考察 精密吸取同一供試品溶液10 μL，間隔一定時(shí)間（0，2，4，8，16，24 h）進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD（n=6）為1.2 ％。

3.3.6含量測(cè)定 照高效液相色譜法（附錄Ⅵ D）測(cè)定。以槲皮素作為生山枝仁，炒山枝仁的含量指標(biāo)；參考《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版相關(guān)飲片品種下槲皮素含量測(cè)定方法，制定山枝仁飲片含量測(cè)定方法和相關(guān)規(guī)定。取生、炒山枝仁各10批，分別按照“2.1”項(xiàng)下制得供試品，注入液相色譜儀，測(cè)定槲皮素的峰面積，根據(jù)槲皮素的峰面積，從回歸方程求出各樣品中槲皮素的含量，生山枝仁為0.1600～0.1800％，平均含量為0.1712 ％；炒山枝仁0.1535～0.1693％，平均含量為0.1591 ％。故規(guī)定槲皮素分別不得少于0.10％和0.13％，收入標(biāo)準(zhǔn)正文，結(jié)果見(jiàn)表1。

4 結(jié)論

根據(jù)10批生山枝仁的測(cè)定結(jié)果，生山枝仁水分不得超過(guò)12％，總灰分不得超過(guò)6.0％，酸不溶性灰分不得超過(guò)0.7％，浸出物不得少于10.0％，含槲皮素量均不得少于0.10％；炒山枝仁水分不得過(guò)11％，總灰分不得超過(guò)6.0％，酸不溶性灰分不得過(guò)0.8％，浸出物不得少于11.0％，槲皮素含量不得少于0.13％?？勺鳛楸井a(chǎn)品的質(zhì)量控制方法。為進(jìn)一步研究山枝仁不同炮制品化學(xué)成分含量差異的科學(xué)內(nèi)涵奠定基礎(chǔ)。

［1］ 羅達(dá)尚主編.新修晶珠本草［M］.成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2004：513.

［2］ 四川省衛(wèi)生廳：四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)2010年版，四川出版集團(tuán)，四川科學(xué)技術(shù)出版社，2011.

［3］ 張俊.川產(chǎn)山枝仁及其近緣種的生藥學(xué)研究［D］.成都中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

［4］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部［S］北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［5］ 李祥勝，汪興生，周亞球，等.HPLC法測(cè)定復(fù)方金錢(qián)草排石顆粒中槲皮素和山柰素的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2011，15（12）：1510.

［6］ 崔濤，夏偉軍，彭玲芳，等.七葉蓮提取物中總黃酮和槲皮素的含量測(cè)定［J］.藥物分析雜志，2011，31（11）：54.

（責(zé)任編輯：李蕓霞）

Quercetin content determination and quality standard research of raw and processed Shanzhiren /

GONG Xiao-meng，ZHANG Mei，WU Shan-shan， LI Meng-qi， HU Lin， HU Chang-jiang//（School of Pharmacy， Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu 611137， Sichuan）

Objective: To detect quercetin content in raw and processed Shanzhiren， and research the quality standards of raw and processed Shanzhiren. Method: According to Chinese pharmacopoeia， the content of moisture， total ash， acid-insoluble ash and extracts were determined. High performance liquid chromatography （HPLC） method was used to determine quercetin content. Result: The quality of raw shanzhiren included： water less than 12 ％， total ash content less than 6.0％， acid insoluble ash content less than 0.7％， extract more than 10.0％， and quercetin content more than 0.10％. The quality of processed shanzhiren included：water less than 11 ％， total ash content less than 6.0％， acid insoluble ash content less than 0.8％， extract more than 11.0％， and quercetin content more than 0.13％. Conclusion: The quality standards of raw and processed Shanzhiren are established. The determination method of quercetin content is simple with good precision and reproducibility， which can be used for quality control of the product.

Raw Shanzhiren； processed Shanzhiren； quality standard； quercetin； content determination

R 284.1

A

1674-926X（2016）03-006-03

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 611137

龔曉猛（1990-），男，碩士在讀，主要從事中藥炮制學(xué)方向研究Tel：13880687572 Email：gongjin20080621@126.com

胡昌江（1952-），男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥炮制原理與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方向研究Tel：13980980796 Email：hhccjj@hotmail.com

2015-08-02