摘要：內(nèi)蒙古烏蘭察布市是我國(guó)最大的馬鈴薯脫毒種薯、商品薯生產(chǎn)和鮮薯加工基地，在該地區(qū)的7個(gè)主要產(chǎn)區(qū)采集了167份具有典型病毒病癥狀的樣品和疑似樣品，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)（DAS-ELISA）法進(jìn)行檢測(cè)，篩查6種常見病毒，即PVX、PVY、PLRV、PVA、PVS和PVM。結(jié)果表明：有42份樣品檢測(cè)到病毒，PVY的檢出率最高，PVX次之，11份樣品檢測(cè)出是由多種病毒復(fù)合侵染造成的，大田種薯的復(fù)合侵染率高于脫毒種薯苗和原原種。試管苗PVS發(fā)生較多，原原種和大田種薯PVY發(fā)生比例最高。

關(guān)鍵詞：烏蘭察布市；馬鈴薯病毒；調(diào)查；DAS-ELISA

中圖分類號(hào)： S435.32文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）11-0189-03

收稿日期：2015-05-26

基金項(xiàng)目：內(nèi)蒙古自治區(qū)教育廳基金（NJZC14384）。

作者簡(jiǎn)介：苑智華（1982—），女，碩士，講師，主要從事馬鈴薯等植物的生理、病毒病檢測(cè)與防治教學(xué)與研究工作。E-mail：512136865@qq.com。馬鈴薯由于耐旱、耐瘠薄、高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)、適應(yīng)性廣、營(yíng)養(yǎng)成分全等優(yōu)點(diǎn)而受到世界各國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的高度重視，目前全球馬鈴薯產(chǎn)銷量?jī)H排在小麥、玉米和水稻之后，居第四位[1]。然而，目前已報(bào)道的感染馬鈴薯的病毒達(dá)30種以上，其中危害比較嚴(yán)重的有6 ～7種[2-3]。除11種病毒外，大多數(shù)病毒能夠通過(guò)種薯傳播。在田間，病毒主要傳播方式為接觸傳播、介體傳播和土壤傳播[4]。馬鈴薯病毒對(duì)馬鈴薯生產(chǎn)的影響與馬鈴薯病毒種類、環(huán)境條件、品種抗性和侵染時(shí)期有關(guān)。在氣候溫暖、傳毒媒介和毒源復(fù)雜的省份和地區(qū)，由于種薯感病較重，一般減產(chǎn)10%～30%，重者達(dá)80%以上。

內(nèi)蒙古烏蘭察布市作為全國(guó)馬鈴薯的主產(chǎn)區(qū)，對(duì)馬鈴薯病毒種類、侵染情況及侵染方式的調(diào)查將對(duì)馬鈴薯的栽培和病毒病的防治具有較強(qiáng)的實(shí)踐指導(dǎo)意義。本試驗(yàn)應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)（DAS-ELISA）法對(duì)烏蘭察布市7個(gè)地區(qū)的試管脫毒苗、原原種和大田種薯（包括原種、一級(jí)種薯、二級(jí)種薯）的6種病毒，即常見的馬鈴薯X病毒（PVX）、馬鈴薯Y 病毒（PVY）、馬鈴薯A病毒（PVA）、馬鈴薯S病毒（PVS）、馬鈴薯M病毒（PVM）及馬鈴薯卷葉病毒（PLRV）進(jìn)行了調(diào)查和檢測(cè)分析。

1材料與方法

1.1材料

于2014年馬鈴薯現(xiàn)蕾期和收獲期，馬鈴薯材料分2次采自烏蘭察布市集寧區(qū)、察哈爾右翼中旗、察哈爾右翼后旗、四子王旗、商都縣、化德縣、興和縣，共7個(gè)旗（縣、區(qū)）進(jìn)行病毒病田間檢驗(yàn)和調(diào)查。試管脫毒苗樣品隨機(jī)抽取，原原種（G1）、原種（G2）、一級(jí)種薯（G3）和二級(jí)種薯（G4）[5]選擇花葉、斑駁、卷葉或壞死等病毒或疑似病毒的樣品，無(wú)癥狀的田塊采取5點(diǎn)取樣法進(jìn)行隨機(jī)取樣。共采集試管脫毒苗樣品34個(gè)，原原種（G1）樣品49個(gè)，原種（G2）樣品43個(gè)，一級(jí)種薯（G3）樣品21個(gè)、二級(jí)種薯（G4）10個(gè)。涉及4個(gè)品種：克新1號(hào)、大西洋、夏波蒂、費(fèi)烏瑞特。

1.2所檢測(cè)的病毒種類

對(duì)常見的馬鈴薯主要病毒PVX、PVY、PVA、PVS、PVM、PLRV進(jìn)行檢測(cè)。

1.3檢測(cè)方法和試劑

DAS-ELISA法，檢測(cè)試劑盒購(gòu)于安德珍生物技術(shù)有限公司。

2結(jié)果與分析

2.1馬鈴薯試管脫毒苗、原原種和大田種薯病毒病發(fā)生情況

應(yīng)用DAS-ELISA對(duì)上述樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表1。

2.2烏蘭察布市主要產(chǎn)區(qū)馬鈴薯各級(jí)種薯病毒單獨(dú)和復(fù)合侵染情況

由表2可以看出，馬鈴薯病毒病既可以單獨(dú)侵染也可以復(fù)合侵染，這種現(xiàn)象普遍存在，但是可以看出，單獨(dú)侵染要比復(fù)合侵染存在更加普遍。單獨(dú)侵染的病毒中，PVY是危害最為嚴(yán)重的，發(fā)生比例明顯高于其他病毒。復(fù)合侵染中，均為2種病毒復(fù)合侵染：PVX+PVY、PVY+PLRV、PVS+PLRV、PVY+PVA等，未檢測(cè)出3種及3種以上病毒復(fù)合侵染。同時(shí)，大田種薯生產(chǎn)中，復(fù)合侵染出現(xiàn)的概率更高，更為常見，比例也明顯高于脫毒試管苗和原原種。

3結(jié)論與討論

3.1不同種薯級(jí)別與病毒檢出率的相關(guān)性

從表1可以看出，脫毒試管苗的脫毒率還是較高的，之所以檢測(cè)出PVX和PVS病毒，也是因?yàn)檫@2種病毒在莖尖組織培養(yǎng)時(shí)可能沒(méi)有進(jìn)行熱處理，這2種病毒也是較難脫毒的，所以操作起來(lái)剝離的莖尖應(yīng)小些，只帶有1個(gè)葉原基；像PVY或PLRV就比較容易脫毒，可不進(jìn)行熱處理，剝離的莖尖也可大些。PVY在脫毒試管苗中雖未檢出，但是可以看出，在后面幾代中PVY危害是最為嚴(yán)重的，說(shuō)明大田種薯生產(chǎn)環(huán)境多樣，控制難度也較大，即不同級(jí)別的種薯和商品薯的種植隔離不嚴(yán)格，使得PVY通過(guò)蚜蟲以非持久性方式在田間不同級(jí)別的種薯之間傳播，造成了大田種薯PVY的檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于脫毒試管苗或者是溫室苗床。PVX的檢出率也隨著代數(shù)的增加有所上升，但還是低于PVY的檢出率，可能原因是PVX導(dǎo)致輕花葉，癥狀不明顯，因此也存在漏檢現(xiàn)象。且PVX只有在復(fù)合侵染時(shí)癥狀才加重，而本試驗(yàn)在取樣過(guò)程中采用根據(jù)典型癥狀隨機(jī)取樣的原則，不可避免會(huì)影響其檢出率。PLRV這種病毒也是陸續(xù)出現(xiàn)在G2、G3和G4上，而脫毒種薯苗和原原種中未檢出，可能因?yàn)槠鋫鞑シ绞绞怯裳料x傳毒，不可以通過(guò)汁液接觸傳毒，此外，PLRV可以和多種病毒復(fù)合侵染從而造成減產(chǎn)。關(guān)于PVS，其在脫毒試管苗中檢出，G1和G2中未檢出，G3和G4中又有檢出，但與PVY的檢出率相比還是較低的，這與其主要傳毒方式密切相關(guān)，即汁液傳毒?？偟目磥?lái)，PVM和PVA的檢出率也并不高，但對(duì)馬鈴薯種薯生產(chǎn)存在潛在威脅。

3.2烏蘭察布市與全國(guó)馬鈴薯病毒病發(fā)生情況的比較

表3是趙佐敏等前幾年調(diào)查的數(shù)據(jù)[7-9]。可以看出，試管苗不合格的主要問(wèn)題是攜帶PVS和PVY病毒，原原種和大田種薯生產(chǎn)中部分年份PVX、PVS和PLRV呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。2008年，PVM和PVA首次在各級(jí)種薯中檢測(cè)到，PVA在2007年被列入《中華人民共和國(guó)進(jìn)境植物檢疫性有害生物名錄》[10]，因此PVM和PVA的檢出，為種薯病毒檢測(cè)敲響了警鐘。2008年脫毒試管苗PVS的檢出率為18.94，烏蘭察布市為5.88%；2008年大田種薯PVY的檢出率高達(dá)62.58%，而2014年烏蘭察布市平均僅為31.62%。與2008和2010年全國(guó)馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)病毒病發(fā)生情況相比較，2014年烏蘭察布市馬鈴薯病毒病的發(fā)生有了明顯的改觀，說(shuō)明近幾年我國(guó)在馬鈴薯種薯監(jiān)測(cè)上有了長(zhǎng)足的進(jìn)步，而且烏蘭察布市作為中國(guó)的薯都，政府確實(shí)在種薯檢測(cè)上加大了監(jiān)管力度。當(dāng)然馬鈴薯各種病毒的發(fā)生率與馬鈴薯的種薯級(jí)別、品種和地區(qū)有很大的相關(guān)性，而且馬鈴薯病毒對(duì)馬鈴薯生產(chǎn)的影響與馬鈴薯病毒種類和環(huán)境條件也有關(guān)[9]。

3.3烏蘭察布地區(qū)馬鈴薯種薯繁育的現(xiàn)狀

烏蘭察布市地處內(nèi)蒙古自治區(qū)中部，區(qū)位優(yōu)越、交通便利。全市總面積5.5萬(wàn)km2，耕地資源大于80萬(wàn)hm2。海拔高度1 100～1 500 m，無(wú)霜期110 d，年均降水量300 mm左右。屬溫帶大陸性季風(fēng)氣候，晝夜溫差大，雨熱同季，降水集中，土壤多呈沙性，為馬鈴薯生長(zhǎng)發(fā)育提供了得天獨(dú)厚的優(yōu)越條件，是全國(guó)最適宜種薯繁育的地區(qū)。生產(chǎn)的馬鈴薯具有薯形好、芽眼淺、淀粉含量高等特點(diǎn)，加工產(chǎn)品特別是淀粉具有低蛋白、低酸性及良好的抗凝沉性，白度、黏度、糊化度、透明度均好于國(guó)內(nèi)同類產(chǎn)品。目前，烏蘭察布市是我國(guó)最大的馬鈴薯脫毒種薯、商品薯生產(chǎn)和鮮薯加工基地[11]。

3.4近幾年烏蘭察布市脫毒種薯的生產(chǎn)情況以及存在的問(wèn)題

烏蘭察布市馬鈴薯種薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展仍然處于發(fā)展初期，面臨的問(wèn)題較多?？偟膩?lái)說(shuō)，首先是種薯質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)體系還不健全。種薯生產(chǎn)和質(zhì)量監(jiān)管脫節(jié)，種薯繁育單位在生產(chǎn)過(guò)程中不進(jìn)行必要的檢驗(yàn)檢測(cè)，質(zhì)量控制水平低。質(zhì)量管理機(jī)構(gòu)工作經(jīng)費(fèi)不足，未能充分發(fā)揮其職能作用。種薯級(jí)別只通過(guò)繁殖代數(shù)來(lái)確定，缺乏檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的支撐，造成種薯級(jí)別界限不明，種薯質(zhì)量難以保證。其次是種薯繁育體系還不完善。種薯繁育設(shè)施薄弱，質(zhì)量控制水平和標(biāo)準(zhǔn)化程度較低，優(yōu)質(zhì)種薯的生產(chǎn)能力和供應(yīng)能力不高。再次是種薯企業(yè)整體實(shí)力還不強(qiáng)。絕大多數(shù)企業(yè)資金不雄厚，生產(chǎn)水平低，技術(shù)服務(wù)不完善，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力弱。種薯產(chǎn)業(yè)聚集程度低，資金、人才、技術(shù)等方面積累有限，標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化程度不高，研發(fā)、創(chuàng)新能力不足。面對(duì)全國(guó)市場(chǎng)，生產(chǎn)規(guī)模和市場(chǎng)開拓仍有較長(zhǎng)的路要走。最后是種薯市場(chǎng)不規(guī)范。無(wú)證、無(wú)序、自發(fā)生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)現(xiàn)象普遍，種薯質(zhì)量參差不齊，種薯級(jí)別不清，以次充好事件時(shí)有發(fā)生。

3.5降低馬鈴薯病毒病的舉措

由于病毒檢測(cè)結(jié)果是根據(jù)檢出限來(lái)判斷的，微量的病毒很難被檢測(cè)出來(lái)，所以試管苗即使檢測(cè)合格，病毒在繼代培養(yǎng)的過(guò)程中，也會(huì)不斷積累，從而導(dǎo)致脫毒試管苗的質(zhì)量下降。目前脫毒試管苗的檢測(cè)合格率為91.18%，雖然高于2008年張威等做的馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)病毒發(fā)生情況調(diào)查中的78.8%[13]，但表面病毒還是脫除不徹底，這樣會(huì)使原原種和大田種薯的產(chǎn)量面臨較大威脅。因此，還應(yīng)進(jìn)一步嚴(yán)把種薯質(zhì)量關(guān)，一方面，脫毒種苗需要不斷更新，避免病毒的積累以及生理性退化；另一方面，應(yīng)從種苗源頭抓起，在種苗擴(kuò)繁過(guò)程中，需要對(duì)莖尖剝離苗進(jìn)行嚴(yán)格檢驗(yàn)。

大田種薯的病毒發(fā)生率高，原因也較復(fù)雜，這與人工操作過(guò)程中，切種、打藥、中耕、灌溉等農(nóng)事操作以及蚜蟲的遷飛等密切相關(guān)。因此除了要嚴(yán)格對(duì)農(nóng)機(jī)具和切刀等進(jìn)行消毒外，更重要的是在馬鈴薯生長(zhǎng)季節(jié)，通過(guò)噴灑殺蟲劑和礦物油來(lái)控制蚜蟲種群數(shù)量[14]，適時(shí)殺秧，就可以在很大程度上降低病毒危害，從而保證產(chǎn)量。

另外，烏蘭察布地區(qū)馬鈴薯脫毒種薯檢測(cè)體系不健全，制度不完善，亂繁濫制種薯的現(xiàn)象普遍存在，致使相當(dāng)一部分未經(jīng)檢測(cè)的種薯進(jìn)入市場(chǎng)[15]，這也是病毒病高發(fā)的重要原因之一。這就有待于加大政府和市場(chǎng)對(duì)馬鈴薯脫毒種薯的監(jiān)管力度，切實(shí)提高馬鈴薯脫毒種薯應(yīng)用水平，為廣大農(nóng)民服務(wù)[16]。

參考文獻(xiàn)：

[1]張金良，宋楊，宋兆杰.黑龍江墾區(qū)馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展初探[J]. 現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)，2008（10）：19-20.

[2]Salazar L F. 馬鈴薯病毒及其防治[M]. 謝開石，譯. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2000.

[3]谷愛(ài)仙. 馬鈴薯病毒病及其防治[J]. 植物醫(yī)生，1998，11（5）：11-12.

[4]高艷玲，張威，白艷菊，等. 馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)病毒病發(fā)生情況調(diào)查分析[J]. 植物保護(hù)，2011，37（3）：149-151.

[5]GB18133—2012，馬鈴薯種薯[S]. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013.

[6]田波，張光學(xué). 馬鈴薯無(wú)病毒種薯生產(chǎn)的原理和技術(shù)[M]. 北京：科學(xué)出版社，1980：20.

[7]趙佐敏，艾勇. 馬鈴薯組培脫毒試管苗繁育技術(shù)[J]. 中國(guó)馬鈴薯，2003，17（5）：301-304.

[8]張洪峰，陳陽(yáng)婷，孟 興，等. 馬鈴薯A病毒及其風(fēng)險(xiǎn)分析[J]. 植物檢疫，2010（4）：48-51.

[9]范國(guó)權(quán)，白艷菊，高艷玲，等. 我國(guó)馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)病毒病發(fā)生情況調(diào)查[J]. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（3）：68-72，87.

[10]安穎蔚，孟令文，張輝. 馬鈴薯脫毒及微型薯繁育技術(shù)體系的研究與應(yīng)用[J]. 雜糧作物，2006，26（3）：197-199.

[11]吳永新，李萬(wàn)忠. 烏蘭察布市全力打造“中國(guó)薯都”[[J]. 中國(guó)今日論壇，2007（8）：2-3.

[12]劉鵬飛 劉永祥，徐慧萍.借力小土豆發(fā)展大經(jīng)濟(jì)[N]. 中國(guó)信息報(bào)，2011-04-28（4）.

[13]張威，白艷菊，高艷玲，等. 馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)病毒病發(fā)生情況調(diào)查[J]. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（4）：71-73，86.

[14]于德才，張抒，白艷菊，等. 馬鈴薯種薯田有翅蚜的防治[J]. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009（4）：85-87.

[15]楊海鷹，云庭，段躍，等. 內(nèi)蒙古馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀與對(duì)策研究[J]. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2005（增刊1）：10-13.

[16]陳建保，閆振貴，劉海英，等. 烏蘭察布及周邊地區(qū)馬鈴薯脫毒種薯應(yīng)用現(xiàn)狀調(diào)查與分析[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（12）：72-73，93.劉世晶，穆蘭芳，周君，等. 樟巢螟成蟲對(duì)香樟樹主要揮發(fā)物的觸角電位反應(yīng)[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（11

：192-194.