林耿冰，郭　楠,林李嵩，施　斌

(1.福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院口腔科，福建 福州 350003；2.福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科，福建 福州 350003)

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表面增強拉曼光譜技術在口腔癌病理中的應用體會①

林耿冰1，郭楠1,林李嵩2，施斌2

(1.福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院口腔科，福建 福州 350003；2.福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科，福建 福州 350003)

摘要:目的:探討表面增強拉曼光譜技術在口腔癌病理中的應用效果。方法：對我院收治的31例口腔癌患者資料進行分析，將其設置為對照組，選擇同期醫(yī)院的31例正?；颊咦鳛閷φ战M，采用主成分分析和線性判別分析方采用表面增強拉曼光譜技術進行分析，比較兩組患者組織間的差異。結果：光譜的測量范圍400~1750cm-1波數(shù)。且和沒有加入膠體組織樣本常規(guī)拉曼光譜信號相比能夠明顯的觀察譜峰，并且則會增強譜峰強度，金膠與腫瘤病理組織之間具有較強的作用；31例正正常者口腔組織和口腔癌組織SERS光譜及其標準差具有較大的相似性和其他光譜峰強度差異顯著(P<0.05)。結論：口腔癌患者在進行口腔癌病理分析時采用表面增強拉曼光譜技術效果理想，能夠提高臨床確診率，值得推廣使用。

關鍵詞:表面增強拉曼光譜技術；口腔癌病理；應用效果

口腔癌是臨床上常見的疾病，這種疾病發(fā)病率較高，且隨著人們生活節(jié)奏的加快其發(fā)病率出現(xiàn)上升趨勢，患者發(fā)病后臨床癥狀顯著，且如果不采取積極有效的方法治療將會誘發(fā)其他疾病，威脅患者生命[1]。常規(guī)方法在檢測口腔癌時臨床誤診率或漏診率較高，病理診斷雖然能提高臨床精度，但是診斷時敏感性較差，從而延誤了患者最佳治療時機。近年來表面增強拉曼光譜技術在口腔癌病理中廣為使用，并取得階段性進展，這種方法和其他診斷方法相比優(yōu)勢較多，它能夠提高臨床確診率，為患者后續(xù)治療提供依據(jù)[2]。為了探討表面增強拉曼光譜技術在口腔癌病理中的應用效果。對2013-04~2014-04在我院治療的31例口腔癌患者資料進行分析，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

對在我院治療的31例患者資料進行分析，將其設置為實驗組，其中男21例，女10例，年齡35～68歲，平均(46±0.8)歲，患者從發(fā)病到入院治療時間為1.1~5.9月，平均病程為(3.2±1.1)月；選擇同期醫(yī)院的31例正?；颊咦鳛閷φ战M，男27例，女11例，年齡38～67歲，平均(45±1.3)歲。實驗組患者對治療方案、護理措施等有知情權，患者年齡、病程等差異不顯著(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

入選患者均給予常規(guī)方法檢查，采用主成分分析和線性判別分析方采用表面增強拉曼光譜技術進行分析，具體如下：(1)材料準備。采用上海國藥集團化學試劑有限公司產生的氯金酸、檸檬酸三那，采用質量法對混合統(tǒng)計以及溶液進行調配，實驗中所使用的天平誤差為是萬分之一。(2)金膠的調配。檢查時利用檸檬酸鹽還原氯金酸法進行配制，調配方法參照相關操作步驟進行。研究中最終獲得的金膠吸收峰為525mm，金那木離子的平均粒徑為(34±5)nm，然后在離心速度為15000r/min下進行10min離心，并將下層濃縮的金膠進行避光保存[3]。(3)樣品的準備和收集。取口腔癌患者以及健康者組織樣品直徑為5~10mm組織塊。所有樣品均采用生理鹽水進行清洗，并保存在-80℃條件下，將其制成厚度為25im的冰凍切片，放置在高純度鋁片上。(3)將2μL經(jīng)過離心濃縮在金膠均勻的滴在組織表面，1min后進行測量，SERS光譜的測量范圍為400~1650cm-1，設置相關參數(shù)，如：激光波長785nm，顯微鏡頭為20倍物鏡，曝光時間控制在10s，曝光2次[4]。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS16.0軟件進行分析，計數(shù)資料進行χ2檢驗；計量資料行t檢驗，采用(均數(shù)±方差)表示，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結果

本研究中，光譜的測量范圍400~1750cm-1波數(shù)。且和沒有加入膠體組織樣本常規(guī)拉曼光譜信號相比能夠明顯的觀察譜峰，并且則會增強譜峰強度，實驗結果顯示：金膠與腫瘤病理組織之間具有較強的作用，見圖1。

圖1　食道癌組織與金膠的拉曼光譜

本研究中，31例正正常者口腔組織和口腔癌組織SERS光譜及其標準差具有較大的相似性和其他光譜峰強度差異顯著(P<0.05)，見圖2。

圖2　口腔癌組織與正常對照組織平均SERS光譜對比

3　討論

口腔癌是臨床上常見疾病，這種疾病發(fā)病率較高，且隨著人們生活節(jié)奏的加快其發(fā)病率出現(xiàn)上升趨勢，影響患者生活質量。目前，對于口腔癌診斷方法相對較多，常規(guī)診斷方法診斷率雖然較高，但是誤診率或漏診率也較高，對患者最佳治療等產生很大的影響臨。因此，臨床研究積極有效的口腔癌診斷方法具有重要意義[5]。

近年來，表面增強拉曼光譜技術在口腔癌診斷中廣為使用，且效果理想，本次研究中，光譜的測量范圍400~1750cm-1波數(shù)。對比未加入膠體的組織樣本常規(guī)拉曼光譜信號，SERS光譜中可以觀察明顯譜峰，譜峰強度也有顯著增強。由此說明：金膠與組織之間有著強烈的相互作用。研究中采用金納米為增強基底的組織SERS光譜結合PCA-LDA多元統(tǒng)計分析算法進行口腔癌組織的檢測和診斷研究，實驗結果顯示：正常組織和口腔癌組織在SERS光譜上存在一定的差異，并且診斷靈敏度和特異性也相對比較高。且口腔癌組織在發(fā)生和發(fā)展過程中生物分子變化明顯[6]。如：和正常組織樣本相比，癌組織中蛋白質結構發(fā)生明顯的變化，磷脂質的相對含量將出現(xiàn)明顯的降低，并且組織內的氨基化合物和組蛋白等含量將出現(xiàn)上升趨勢。同時，臨床上利用表面增強拉曼光譜技術聯(lián)合PCA-LDA多元技術能夠區(qū)分，提高口腔癌確診率。但是，臨床上采用表面增強拉曼光譜技術時對設備等要求相對較高，對醫(yī)師的專業(yè)技能等要求也比較高，這些均需要進一步研究和探討，從而為臨床應用提供更加準確、可靠的信息[7]。本次研究中，31例正正常者口腔組織和口腔癌組織SERS光譜及其標準差具有較大的相似性和其他光譜峰強度差異顯著(P<0.05)。Culha

和 Vo-Dinh等人進行了一次實驗，實驗中發(fā)展了一系列利用SERS基因探針對口腔癌患者基因BRCA1和抗凋亡基因BAX的檢測方法，這種檢測方法和其他檢測方法相比優(yōu)勢較多，它通常是將拉曼活性分子和寡核苷酸鏈結合形成拉曼檢測探針，并采用這個探針和目標鏈進行雜交，從而將信號分析轉移到金屬基底表明并且能夠產生SERS信號，從而能夠對目標鏈實現(xiàn)檢測。此外，Cao等人進行了一次實驗，實驗中將6種拉曼活性標志物到6中不同的寡核苷酸鏈上，并且和直徑控制在13nm的金納米粒子結合得到核酸探針，并且將這個探針和目標鏈在芯片上進行一定時間內的雜交，然后采用銀染的方法對信號進行增強，從而能夠實驗核酸的多組分檢測，實驗結果顯示：采用表面增強拉曼光檢測最低極限能夠達到20fM。根據(jù)相關研究結果顯示：針對口腔癌的致病基因設計的一段發(fā)卡形的分子新表，然后在其兩端修飾巰基和拉曼活性物分子并將其固定在銀納米粒子表面，當目標DNA和分子新表結合后可以實現(xiàn)不同基因的靈敏檢測[8]。綜上所述，口腔癌患者在進行口腔癌病理分析時采用表面增強拉曼光譜技術效果理想，能夠提高臨床確診率，值得推廣使用。

參考文獻:

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[5]陶站華，姚輝璐，王桂文，等．利用拉曼光譜分析順鉑誘導的胃癌細胞凋亡[J]．光譜學與光譜分析，2009，29(9)：2441-2445

[6]陳偉煒，馮尚源，林文碩，等. 白術煎劑表面增強拉曼光譜分析[J].光譜學與光譜分析，2009，29(9)：2450-2452

[7]王平，黃耀熊. 激光拉曼光譜法研究乙醇對血紅蛋白結構的影響 [J].Chinese Journal of Medical Physics，2011，28(3):2674-2676

[8]李寧，莊正飛， 郭周義，等.拉曼光譜技術及其在中醫(yī)藥鑒定中的應用 [J].中國醫(yī)學物理學雜志，2012，29(1)：3173-3175

中圖分類號：R739.8

文獻標識碼：B

文章編號：1008-0104(2015)06-0075-02

作者簡介：①林耿冰(1972～)男，福建泉州人，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：口腔頜面外科，口腔種植專科。

(收稿日期：2015-05-25)