高靜，陳玉東,劉相飛

(勝利油田中心醫(yī)院，山東東營(yíng)257034)

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血小板源性生長(zhǎng)因子D基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系

高靜，陳玉東,劉相飛

(勝利油田中心醫(yī)院，山東東營(yíng)257034)

摘要：目的分析血小板源性生長(zhǎng)因子D(PDGF-D)基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系。方法疑診冠心病患者349例，其中經(jīng)冠脈動(dòng)脈造影確診冠心病237例(觀察組)、排除冠心病112 例(對(duì)照組)，觀察組確診后行血管內(nèi)超聲檢查判斷斑塊穩(wěn)定性，兩組均采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性方法檢測(cè)PDGF-D rs7950273位點(diǎn)基因型。結(jié)果觀察組rs7950273位點(diǎn)CC、GG基因型頻率分別為26.2%、18.1%，C等位基因頻率為54.1%；對(duì)照組分別為14.2%、34.8%、39.7%，P均<0.05。觀察組易損斑塊者CC基因型、C等位基因頻率分別為31.5%、57.9%，混合斑塊者分別為31.3%、58.4%，均高于穩(wěn)定斑塊者的12.3%、43.1%(P均<0.05)，易損斑塊與混合斑塊者比較P均>0.05。結(jié)論冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊越不穩(wěn)定，PDGF-D rs7950273位點(diǎn)CC基因型頻率和C等位基因頻率越高；PDGF-D rs7950273位點(diǎn)C等位基因可能是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的遺傳易感基因。

關(guān)鍵詞：血小板源性生長(zhǎng)因子D；基因多態(tài)性；冠心病；動(dòng)脈粥樣硬化斑塊

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊(以下簡(jiǎn)稱斑塊)破裂和血栓形成是導(dǎo)致急性心血管事件的病理基礎(chǔ)。血小板源性生長(zhǎng)因子D(PDGF-D)是血清中的一種強(qiáng)有絲分裂原分子，與其受體結(jié)合后促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增生、遷移，促進(jìn)新生血管形成[1]。研究表明，冠心病患者血清PDGF-D水平明顯升高，是ACS發(fā)生的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素[2]。PDGF-D基因多態(tài)性與冠狀動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性是否存在關(guān)聯(lián)，尚未見報(bào)道。2013年1月～2014年12月，我們檢測(cè)了PDGF-D rs7950273位點(diǎn)基因多態(tài)性，分析其與冠狀動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇我院同期收治的并久居本地的疑診冠心病患者349例，其中經(jīng)冠脈動(dòng)脈造影(CAG)確診冠心病237例(觀察組)，男158例、女79例，吸煙78例，高血壓病128例，糖尿病76例；排除冠心病112 例(對(duì)照組)，男75例、女37例，吸煙37例，高血壓病61例，糖尿病35例。所有研究對(duì)象排除嚴(yán)重肝腎功能不全、腫瘤、吸毒或酗酒、既往血運(yùn)重建、存在導(dǎo)致預(yù)期壽命≤6個(gè)月的嚴(yán)重疾病。

1.2斑塊穩(wěn)定性檢查方法CAG確診冠心病后行血管內(nèi)超聲(IVUS)檢查，根據(jù)血管內(nèi)超聲虛擬組織學(xué)成像技術(shù)(VH-IVUS)將斑塊分為穩(wěn)定斑塊、易損斑塊、混合斑塊[3]。

1.3PDGF-D基因多態(tài)性檢測(cè)方法采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法。入院后即刻EDTA抗凝管采集3 mL靜脈血于-80 ℃冰箱備用，用血液基因組DNA提取試劑盒提取DNA。采用Oligo 6.0軟件設(shè)計(jì)并合成PDGF-D rs7950273位點(diǎn)上、下游引物，分別為5′-GCCACA-TTTAGCCATTCT-3′、5′-TGTTGGGATGAAGAAAGG-3′，PCR擴(kuò)增片段長(zhǎng)度是320 bp。取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，用限制性內(nèi)切酶BsmAⅠ進(jìn)行酶切。用3%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)酶切后的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分離，凝膠成像儀器進(jìn)行拍照，進(jìn)而得到基因型。CC基因型出現(xiàn)320 bp 1條條帶，GG基因型出現(xiàn)192、128 bp 2條條帶，雜合子CG基因型出現(xiàn)320、192、128 bp 3條條帶)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。各基因型頻率及等位基因頻率分布差異行χ2檢驗(yàn)，用 Hardy-Weinberg遺傳平衡定律進(jìn)行等位基因確認(rèn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1斑塊穩(wěn)定性檢查結(jié)果 觀察組中，穩(wěn)定斑塊65例、易損斑塊89例、混合斑塊83例。

2.2PDGF-D基因多態(tài)性及其與冠狀動(dòng)脈斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系兩組PDGF-D rs7950273位點(diǎn)的基因型頻率均符合Hardy-Weinberg平衡，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組PDGF-D基因rs7950273位點(diǎn)基因型及等位基因分布比較，見表1。

表1　兩組PDGF-D基因rs7950273位點(diǎn)基因型

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與觀察組易損斑塊、混合斑塊比較，#P<0.05。

3討論

遺傳因素在冠心病的發(fā)生、發(fā)展過程中居于極其重要的地位,其在冠心病發(fā)病中的貢獻(xiàn)可達(dá)50%[4～7]。目前認(rèn)為，冠心病是遺傳-遺傳、遺傳-環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。單核苷酸多態(tài)性(SNP)主要表現(xiàn)為基因組核苷酸水平上的變異導(dǎo)致DNA序列多態(tài)性，在人類遺傳學(xué)研究中有重要意義[8]。自2002年開始[9]，以SNP為基礎(chǔ)的全基因組相關(guān)分析成為冠心病遺傳易感性研究的主流方法。與以往的候選基因研究及家系研究相比，其研究范圍更廣，所獲結(jié)果更可靠，且不同研究所得數(shù)據(jù)可實(shí)現(xiàn)共用，進(jìn)一步提高了檢驗(yàn)效力[10，11]。

RPDGF-D是由平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等分泌后，從無活性酶原形式經(jīng)水解形成同源二聚體PDGF-DD，再與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，導(dǎo)致自身和受體磷酸化反應(yīng)，參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而促進(jìn)成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)元等細(xì)胞增殖與分化，在動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈損傷后的修復(fù)、纖維增生性疾病和惡性腫瘤的發(fā)生中起重要作用[12～14]。研究已證實(shí)，PDGF-D參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程，而動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病重要的發(fā)病機(jī)制，提示PDGF-D可能是誘發(fā)冠心病的候選基因。Awazu等[14]對(duì)PDGF-D rs3809021、rs7950273位點(diǎn)與腦卒中的關(guān)聯(lián)性及功能進(jìn)行了研究，但未見PDGF-D與冠心病的相關(guān)性研究。本研究發(fā)現(xiàn)，PDGF-D rs7950273位點(diǎn)的CC基因型和C等位基因頻率觀察組顯著高于對(duì)照組，觀察組易損斑塊和混合斑塊者均顯著高于穩(wěn)定斑塊者，提示PDGF-D rs7950273位點(diǎn)基因多態(tài)性與冠心病的發(fā)病和斑塊不穩(wěn)定可能相關(guān)，該位點(diǎn)C等位基因可能是冠狀動(dòng)脈斑塊不穩(wěn)定的遺傳易感基因。其具體機(jī)制可能與 C 等位基因干預(yù)了PDGF-D 基因rs7950273蛋白翻譯效率，影響PDGF-D的表達(dá)有關(guān)。

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收稿日期：(2015-08-12)

通信作者：陳玉東

基金項(xiàng)目：山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2011HW075)。

中圖分類號(hào)：R541.4

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2015)46-0066-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.46.029