趙陽，劉佳琨，陳強(qiáng)，徐杰，王天生

(1天津市第四中心醫(yī)院，天津300140；2天津市第五中心醫(yī)院)

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雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病的治療作用及機(jī)制

趙陽1，劉佳琨1，陳強(qiáng)1，徐杰1，王天生2

(1天津市第四中心醫(yī)院，天津300140；2天津市第五中心醫(yī)院)

摘要：目的觀察雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病的治療作用，并探討其作用機(jī)制。方法將45只Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、對照組和實(shí)驗(yàn)組，各15只。對照組和實(shí)驗(yàn)組予以鏈脲佐菌素55 mg/kg腹腔內(nèi)注射建立糖尿病腎病大鼠模型，正常組給予同等劑量的生理鹽水腹腔注射。建模成功后，實(shí)驗(yàn)組大鼠給予雷公藤多苷1.8 g/(kg·d)灌胃，1次/d；正常組及對照組給予同等劑量的生理鹽水灌胃，1次/d。三組大鼠自由飲水進(jìn)食，不給予任何降糖處理。三組大鼠灌胃前(治療前)及灌胃12周后(治療后)分別檢測其血糖、24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮。同時于灌胃12周末處死大鼠，檢測其腎皮質(zhì)結(jié)締組織生長因子(CTGF)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠治療前24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平高于正常組(P均<0.05)；實(shí)驗(yàn)組大鼠治療后24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平較治療前降低(P均<0.05)，且低于對照組治療后(P均<0.05)。正常組、實(shí)驗(yàn)組和對照組治療后大鼠腎皮質(zhì)CTGF相對表達(dá)量分別為0.18±0.03、0.52±0.07、0.69±0.08，實(shí)驗(yàn)組、對照組與正常組相比，實(shí)驗(yàn)組與對照組相比，P均<0.05。治療后實(shí)驗(yàn)組大鼠24小時蛋白尿與腎組織中CTGF表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.54,P<0.05)。結(jié)論 雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病有明顯的治療作用，可能通過下調(diào)糖尿病大鼠腎臟CTGF表達(dá)抑制蛋白尿、保護(hù)腎功能。

關(guān)鍵詞：雷公藤多苷；糖尿??；糖尿病大鼠；結(jié)締組織因子；腎功能；蛋白尿；動物實(shí)驗(yàn)

糖尿病腎病是糖尿病患者最為常見的腎臟并發(fā)癥，并已成為腎功能衰竭的重要原因[1]。我國糖尿病腎病的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯上升趨勢，目前已成為終末期腎病的第二位原因，僅次于各種腎小球腎炎。由于糖尿病腎病患者存在復(fù)雜的代謝紊亂，一旦發(fā)展到終末期腎病，往往比其他腎病的治療更加棘手。因此，及時治療糖尿病腎病意義重大。目前糖尿病腎病確切發(fā)病原因及機(jī)制并不十分清楚，大多數(shù)研究認(rèn)為與高血糖、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)紊亂、腎臟血流動力學(xué)紊亂有關(guān)[2]。近年來的研究[3,4]顯示，結(jié)締組織生長因子(CTGF)在糖尿病腎病的發(fā)病中也發(fā)揮重要作用。2014年1月10日～ 2014年6月10日，我們觀察了雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病的治療作用，并對其作用機(jī)制進(jìn)行了探討?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1材料與方法

1.1動物、藥品、試劑及儀器清潔級Wistar大鼠45只，購自天津醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。雷公藤多苷，購自遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國)有限公司。羊抗鼠CTGF單隆抗體，購自美國Cell Signaling公司；羊抗鼠β-actin抗體，購自Sigma公司；鏈脲佐菌素，購自Sigma公司。臺式微型離心機(jī)(Mierofuge18)，購自BechmanCoulter公司；渦旋振蕩器(Vortex-GenieZ)，購自美國Scilnd公司；全自動生化分析儀，購自美國貝克曼庫爾特公司。

1.2大鼠分組、模型制作及給藥將45只清潔級Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、對照組和實(shí)驗(yàn)組，各15只。對照組和實(shí)驗(yàn)組予以鏈脲佐菌素55 mg/kg腹腔內(nèi)注射建立糖尿病腎病大鼠模型，正常組給予同等劑量的生理鹽水腹腔注射。建模成功后實(shí)驗(yàn)組大鼠給予雷公藤多苷1.8 g/(kg·d)灌胃，1次/d；正常組及對照組給予同等劑量的生理鹽水灌胃，1次/d。三組大鼠自由飲水進(jìn)食，不給予任何降糖處理。

1.3血糖、24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮、腎皮質(zhì)CTGF檢測三組大鼠灌胃前(治療前)及灌胃12周時(治療后)分別檢測其血糖、24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮。同時于灌胃12周末處死大鼠，采用免疫印跡法檢測其腎皮質(zhì)CTGF。

2結(jié)果

2.1治療前后三組大鼠血糖、24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平比較治療前實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平高于正常組(P均<0.05)；治療后實(shí)驗(yàn)組大鼠24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮較治療前明顯降低(P均<0.05)，且低于對照組治療后(P均<0.05)。詳見表1。

表1　 三組大鼠治療前后血糖、24小時尿蛋白、

注：與同組治療前相比，*P<0.05；與正常組和對照組治療后相比，#P<0.05。

2.2治療后三組大鼠腎皮質(zhì)CTGF表達(dá)比較治療后正常組、實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠腎皮質(zhì)CTGF相對表達(dá)量分別為0.18±0.03、0.52±0.07、0.69±0.08；實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠腎皮質(zhì)CTGF與正常組相比，P均<0.05；實(shí)驗(yàn)組CTGF與對照組相比，P<0.05。

2.3治療后實(shí)驗(yàn)組大鼠24小時蛋白尿與腎皮質(zhì)CTGF表達(dá)水平的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)組大鼠24小時蛋白尿與腎組織中CTGF表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.54,P<0.05)。

3討論

糖尿病腎病的病因和發(fā)病機(jī)制不清，目前認(rèn)為是多因素參與，在一定的遺傳背景以及部分危險因素的共同作用下致病[5]。糖尿病腎病早期可觀察到腎臟血流動力學(xué)異常，表現(xiàn)為腎小球高灌注和高濾過,腎血流量和腎小球?yàn)V過率升高，且增加蛋白攝入后升高的程度更顯著。血糖過高主要通過腎臟血流動力學(xué)改變以及代謝異常導(dǎo)致腎臟損害，其中代謝異常導(dǎo)致腎臟損害的機(jī)制主要有以下幾方面：腎組織局部糖代謝紊亂，可通過非酶糖基化形成糖基化終末代謝產(chǎn)物；多元醇通路的激活；二?；视?蛋白激酶c途徑的激活；已糖胺通路代謝異常。上述代謝異常除參與早期腎小球高濾過，更為重要的是促進(jìn)腎小球基底膜增厚和細(xì)胞外基質(zhì)蓄積，促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化和腎小球硬化。近年來的研究[4]發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制除與上述因素有關(guān)外，同時可能與腎皮質(zhì)中CTGF過度表達(dá)有關(guān)。CTGF是1991年Frazier等[6]首先在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的，它是一種由349個氨基酸組成、分子量為34～38 kD的富含半胱氨酸的分泌肽。最初研究[7]發(fā)現(xiàn)，CTGF對成纖維細(xì)胞具有趨化及促有絲分裂作用，隨后發(fā)現(xiàn)CTGF還具有促細(xì)胞增殖、遷移及分化等作用。體內(nèi)研究[8]發(fā)現(xiàn)，在早期糖尿病腎病階段，CTGF可介導(dǎo)系膜基質(zhì)的聚集和腎小球纖維化；在晚期糖尿病腎病中，CTGF可介導(dǎo)腎間質(zhì)纖維化。腎小球纖維化是糖尿病腎病的重要病理學(xué)特征。因此認(rèn)為CTGF在糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。

雷公藤多苷是由中藥衛(wèi)矛科雷公藤屬植物提取精制而成，是目前臨床上應(yīng)用較多的非甾體類免疫抑制劑，已廣泛用于治療多種原發(fā)性和繼發(fā)性腎小球疾病，對慢性腎小球腎炎、腎病綜合征、過敏性紫癜性腎炎、糖尿病腎病和狼瘡性腎炎等具有較好療效，可顯著減少尿蛋白排出。文獻(xiàn)[9]報道，雷公藤多苷對細(xì)胞免疫和體液免疫均有抑制作用。但關(guān)于雷公藤多苷可減少腎臟病患者蛋白尿的分子機(jī)制并不十分清楚。在本研究中，實(shí)驗(yàn)組雷公藤多苷灌胃12周后，其24小時尿蛋白、血清肌酐和尿素氮水平明顯降低，且低于對照組治療后，說明雷公藤多苷可降低糖尿病大鼠蛋白尿，對大鼠腎功能有一定的保護(hù)作用。同時本研究還發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組大鼠24小時蛋白尿與腎皮質(zhì)CTGF表達(dá)水平存在明顯的相關(guān)性，說明雷公藤多苷可能通過抑制腎臟中CTGF的表達(dá)來改善糖尿病大鼠腎功能。

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收稿日期：(2015-07-24)

通信作者：王天生

基金項(xiàng)目：天津市衛(wèi)生局科技 資助項(xiàng)目(2014247)。

中圖分類號：R589.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-266X(2015)47-0031-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.47.011