應(yīng)用NCCLS EP10-A2文件初步評(píng)價(jià)唾液酸試劑性能

齊立民1，孫安吉2

(1.聊城市冠縣人民醫(yī)院，山東 聊城 252500；2.寧波美康生物科技股份有限公司，浙江 寧波 315104)

摘要：目的利用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)EP10-A2文件初步評(píng)價(jià)唾液酸(SA)試劑盒的臨床應(yīng)用性能。 方法按照NCCLS EP10-A2文件規(guī)定，每天按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的順序連續(xù)測(cè)定各濃度樣本，連續(xù)5 d，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的偏差、總不精密度、截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移。結(jié)果低、中、高濃度SA樣本偏差分別為0.1、0.2 和0.7 mg/L；總不精密度分別為0.76%、0.51%、0.53%；截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移分別為-0.273、1.006、-0.032、0.000、-0.005(-4.60.01)。結(jié)論SA試劑盒準(zhǔn)確度、精密度良好，均在允許范圍內(nèi)，線性達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，攜帶污染率較低，穩(wěn)定性較好，能滿足臨床應(yīng)用要求。

關(guān)鍵詞：唾液酸；EP10-A2文件；評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)：

文章編號(hào)：1673-8640(2015)10-1030-03R446.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.10.016

作者簡(jiǎn)介：齊立民，男，1977年生，主管技師，主要從事臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)工作。

收稿日期：(2014-11-27)

唾液酸(sialic acid，SA)是九碳糖神經(jīng)氨酸衍生物的總稱，存在于各種組織細(xì)胞膜上，在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化時(shí)起著特殊的作用，是一種廣泛、有效的腫瘤標(biāo)志物[1-3]。為評(píng)估該項(xiàng)目在常規(guī)生化分析儀上應(yīng)用的可行性，我們參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(the National Committee for Clinical Laboratory Standards,NCCLS)EP10-A2(《定量臨床檢驗(yàn)方法的初步評(píng)價(jià)：批準(zhǔn)指南》)文件，對(duì)其試劑盒的偏差、總不精密度、截距、斜率、非線性、攜帶污染和漂移[4-6]進(jìn)行分析，初步評(píng)價(jià)其是否適用于臨床。

材料和方法

一、儀器與試劑

7180全自動(dòng)生化分析儀由日本日立公司生產(chǎn)；SA試劑盒(批號(hào)：20130928)購(gòu)自寧波美康生物科技股份有限公司。

二、分析樣本

樣本為寧波美康生物科技股份有限公司生產(chǎn)的定值質(zhì)控品。低值樣本(批號(hào)：20130928)靶值為55 mg/L。高值樣本(批號(hào)：20130928)靶值為160 mg/L 。將上述高值樣本和低值樣本1∶1混合，得到中值樣本，靶值為107.5 mg/L。高、中、低值樣本按每天用量進(jìn)行分裝，置2～8 ℃保存?zhèn)溆?，測(cè)定前取出，室溫放置30 min后混勻使用。

三、方法

1.樣本測(cè)定根據(jù) NCCLS EP10-A2文件，每天按中、高、低、中、中、低 、低、高、高、中的順序測(cè)定各濃度樣本一批，連續(xù)測(cè)定5 d。每批測(cè)定均為連續(xù)測(cè)定，第1個(gè)中值僅作為測(cè)定起始用，不納入統(tǒng)計(jì)，其余9個(gè)數(shù)據(jù)若任何1個(gè)不合格，則該批數(shù)據(jù)都棄掉，重新測(cè)定。

2.繪圖散點(diǎn)圖以標(biāo)準(zhǔn)品靶值(X)為橫坐標(biāo)、實(shí)測(cè)值(Y)為縱坐標(biāo)作圖；偏差圖以標(biāo)準(zhǔn)品靶值(X)為橫坐標(biāo)、實(shí)測(cè)值與靶值的差值(Y-X)為縱坐標(biāo)作圖；觀察線性和離群點(diǎn)情況。

3.偏差及總不精密度的允許范圍參照SA試劑生產(chǎn)商企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，偏差允許范圍設(shè)定為標(biāo)準(zhǔn)的1/2，即靶值±5%；總不精密度的允許范圍設(shè)定為標(biāo)準(zhǔn)的1/2，即5%。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Microsoft Excel 2002軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)算偏差、總不精密度、截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移。對(duì)截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移作回歸分析，其校正回歸值做t檢驗(yàn)，當(dāng)t>4.6或t<-4.6時(shí)，P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、繪圖、目測(cè)離群點(diǎn)和線性

SA試劑盒的偏差圖和線性趨勢(shì)圖見圖1、圖2，目測(cè)各濃度樣本測(cè)定結(jié)果無(wú)離群點(diǎn)，精密度良好，實(shí)測(cè)值與靶值間線性良好。

圖1　SA實(shí)測(cè)值與靶值的偏差圖

圖2　SA實(shí)測(cè)值與靶值的線性趨勢(shì)圖

二、數(shù)據(jù)分析

按照NCCLS EP10-A2文件所設(shè)計(jì)的數(shù)據(jù)處理表格要求進(jìn)行計(jì)算，得出最后統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

1.偏差評(píng)估以各濃度5 d的測(cè)定結(jié)果均值與其對(duì)應(yīng)靶值之差計(jì)算偏差，偏差均未超過設(shè)定的±5%范圍，臨床均可接受。見表1。

表1　SA試劑盒偏差分析結(jié)果

2.總不精密度分析按照 EP10-A2文件提供的方法，計(jì)算總不精密度。各濃度總精密度均未超過允許誤差，臨床均可接受。見表2。

表2　SA試劑盒不精密度分析結(jié)果

3.測(cè)定結(jié)果多重回歸分析表每天結(jié)果進(jìn)行回歸分析，計(jì)算每天測(cè)定結(jié)果的截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移，見表3。結(jié)果顯示截距、斜率、非線性、攜帶污染、漂移的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(-4.60.01)。

表3　SA試劑盒多元回歸分析匯總

討論

SA是一種廣泛、有效的腫瘤標(biāo)志物[1-3]，本研究參照EP10-A2文件對(duì)其進(jìn)行了初步評(píng)估，以探討其在臨床的應(yīng)用價(jià)值。偏差評(píng)價(jià)結(jié)果顯示低、中、高濃度的絕對(duì)偏差均在允許偏差范圍之內(nèi)，故其偏差是可接受的，并且多元回歸總結(jié)分析結(jié)果顯示斜率、截距的t值均在-4.6～4.6之間，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)，說明試劑測(cè)定的準(zhǔn)確度較好?？偛痪芏仍u(píng)價(jià)結(jié)果顯示低、中、高濃度樣本的總不精密度均低于最大允許總不精密度，說明其總不精密度也可以接受。多元回歸總結(jié)分析結(jié)果顯示攜帶污染、非線性的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)，試劑線性能力良好，攜帶污染率低，能較好地滿足臨床常規(guī)檢測(cè)要求。

稀土元素具有重要的指示性作用，可以判斷地層和礦體成因及物質(zhì)來(lái)源[10，12]。據(jù)徐紅偉(2009)等研究，礦區(qū)蝕變巖稀土配分曲線與花崗巖接近一致，反映出二者在成因上存在密切關(guān)系。

與傳統(tǒng)的評(píng)價(jià)方案相比，EP10-A2文件提供的評(píng)價(jià)方法需要的數(shù)據(jù)少，時(shí)間短，可操作性強(qiáng)，能完成傳統(tǒng)評(píng)價(jià)方法不具備的非線性度和漂移度檢驗(yàn)，提供了幫助實(shí)驗(yàn)室對(duì)實(shí)驗(yàn)方法或分析儀器進(jìn)行線性、偏差、精密度等方面進(jìn)行初步評(píng)價(jià)的一種簡(jiǎn)單方法，但此文件評(píng)價(jià)方法的結(jié)果僅建立于初步評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)之上，忽略了很多影響因素。SA是一種新的廣泛、有效的腫瘤標(biāo)志物，因此通過 NCCLS EP-10文件的初步評(píng)價(jià)后應(yīng)參考NCCLS的其他文件，如EP5、EP6、EP7及EP9等文件進(jìn)一步對(duì)試劑盒的空白吸光度及變化率、檢測(cè)限、分析靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍、干擾試驗(yàn)和穩(wěn)定性等性能進(jìn)行評(píng)價(jià)[7-11]。

參考文獻(xiàn)

[1]VARKI A. Sialic acids in human health and disease [J]. Trends Mol Med，2008，14(8)：351-360.

[2]張嘉寧，汪淑晶. 唾液酸生物學(xué)與人類健康和疾病[J]. 生命科學(xué)，2011，23(7)：678-684.

[3]劉沛，王舒，李變榮. 血清唾液酸在惡性腫瘤診斷中的臨床應(yīng)用 [J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(6)：687-688.

[4]National Committee for Clinical Laboratory Standards．Preliminary evaluation of quantitative clinical laboratory methods [S]．EP10-A2，NCCLS，2002.

[5]程明剛，程靜，劉香萍，等．應(yīng)用NCCLS EP10-A2文件初步評(píng)價(jià)定量鈣測(cè)定的性能[J]．熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2010，10(11)：1289-1292.

[6]劉懷平，劉樹業(yè)．實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可中封閉檢測(cè)系統(tǒng)的性能驗(yàn)證及評(píng)價(jià)[J]．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38(19)：3981- 3984．

[7]張葵．定量檢測(cè)系統(tǒng)方法學(xué)性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的基本方法[J]．臨床檢驗(yàn)雜志，2009，27(5)：321-323．

[8]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of precision performance of clinical chemistry devices； approved guideline[S]. EP5-A2，NCCLS，1999.

[9]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of the linearity of quantitative analytical methods： a statistical approach; approved guideline[S]. EP6-A，NCCLS，2003.

[10]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method comparison and bias estimation using patient samples： approved guideline[S]. EP9-A2，NCCLS，2002.

[11]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference testing in clinical chemistry： approved guideline[S]. EP7-A2，NCCLS，2002.

(本文編輯：龔曉霖)

上海市臨床檢驗(yàn)二級(jí)管理網(wǎng)絡(luò)年中總結(jié)會(huì)召開

2015年度上海市臨床檢驗(yàn)二級(jí)管理網(wǎng)絡(luò)年中總結(jié)會(huì)8月9日下午在南昌召開。因上海市臨床檢驗(yàn)二級(jí)管理網(wǎng)絡(luò)各區(qū)縣負(fù)責(zé)人、中心各專業(yè)科室負(fù)責(zé)人均作為上海代表參加華東六省一市第六次檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議，故本次會(huì)議合理利用華東六省一市會(huì)議間隙舉辦。會(huì)議由中心主任助理兼質(zhì)控業(yè)務(wù)科主任張健主持。本次會(huì)議主要內(nèi)容包括各區(qū)縣二級(jí)管理網(wǎng)絡(luò)負(fù)責(zé)人做2015年度上半年二級(jí)管理網(wǎng)絡(luò)工作總結(jié)、2015年度下半年工作計(jì)劃報(bào)告以及對(duì)區(qū)域化集中檢測(cè)及獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室設(shè)置等一些焦點(diǎn)問題進(jìn)行討論。

在各區(qū)縣總結(jié)中提到了一些基層醫(yī)院的共性問題，比如基層醫(yī)院對(duì)儀器性能驗(yàn)證的方式方法不了解甚至無(wú)從下手，基層醫(yī)院對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員的能力評(píng)估內(nèi)容較為簡(jiǎn)單、空洞。就這點(diǎn)而言，中心在前期對(duì)基層醫(yī)院的調(diào)研中，已經(jīng)了解并針對(duì)這些問題起草了一些配套文件，目前相關(guān)文件基本完稿，正待專家討論后及早發(fā)布以解決醫(yī)院的燃眉之急。此外，有部分區(qū)縣提出基層醫(yī)院信息系統(tǒng)落后，尚有較多醫(yī)院無(wú)LIS系統(tǒng)；民營(yíng)醫(yī)院兩極分化嚴(yán)重，甚至有民營(yíng)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室偽造檢驗(yàn)結(jié)果；部分醫(yī)院外送樣本的管理欠缺，危急值的項(xiàng)目多為外送等問題，這些問題都值得進(jìn)一步探討和專題研究。

關(guān)于集中化檢測(cè)的問題，大部分區(qū)縣認(rèn)為這是發(fā)展趨勢(shì)。從目前已運(yùn)作的區(qū)縣來(lái)看效果很好，但也存在一定的問題。

各區(qū)縣都認(rèn)為獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室作為醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室的補(bǔ)充，有其存在的意義，但應(yīng)加強(qiáng)管理。建議衛(wèi)生監(jiān)督部門加大監(jiān)督力度，審批過程中應(yīng)有技術(shù)部門介入。

(本刊編輯部)