惡性卵巢上皮性腫瘤組織中Gab2蛋白的表達(dá)變化及意義

王哲1，劉欣2

(1濰坊醫(yī)學(xué)院，山東濰坊261000；2濰坊市人民醫(yī)院)

摘要：目的觀察惡性卵巢上皮性腫瘤組織中Grb2協(xié)同結(jié)合蛋白2(Gab2)蛋白的表達(dá)變化，并探討其意義。方法采用免疫組化法對(duì)惡性卵巢上皮性腫瘤組織(75例份)、良性卵巢上皮性腫瘤組織(20例份)、正常卵巢組織(20例份)中的Gab2蛋白進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果惡性卵巢上皮性腫瘤組織、良性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為61%(46/75)、15%(3/20)，正常卵巢組織中3例呈弱陽(yáng)性(陽(yáng)性表達(dá)率為0)；組間Gab2陽(yáng)性表達(dá)率相比，P<0.05；惡性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與良性卵巢上皮性腫瘤組織及正常卵巢組織相比，P均<0.05；良性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2陽(yáng)性表達(dá)率與正常卵巢組織相比，P>0.05。Gab2蛋白陽(yáng)性表達(dá)與惡性卵巢上皮性腫瘤組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論 Gab2蛋白在惡性卵巢上皮性腫瘤組織中高表達(dá)，其高表達(dá)可能預(yù)示著該腫瘤侵襲性高、預(yù)后差、易復(fù)發(fā)。

關(guān)鍵詞：卵巢腫瘤；惡性卵巢上皮性腫瘤；卵巢癌；Grb2協(xié)同結(jié)合蛋白2蛋白

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.023

中圖分類號(hào)：R737.31文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

收稿日期：(2015-07-11)

通信作者：劉欣

惡性卵巢上皮性腫瘤發(fā)病隱匿，發(fā)病機(jī)制尚不清楚，診斷及治療效果不理想。在人類惡性腫瘤中，DNA的擴(kuò)增是導(dǎo)致癌基因活化的一種普遍機(jī)制。Grb2協(xié)同結(jié)合蛋白2(Gab2)基因定位于染色體長(zhǎng)臂11q14.1，而11q13～11q14.1段的擴(kuò)增則常發(fā)生于人類的惡性腫瘤中[1]。研究[2]發(fā)現(xiàn)，約15%的惡性卵巢上皮性腫瘤患者存在Gab2基因組的擴(kuò)增，其中漿液性囊腺癌細(xì)胞的Gab2 mRNA和多種卵巢癌細(xì)胞系的Gab2蛋白呈過(guò)度表達(dá)。本研究采用免疫組織化學(xué)PV-9000二步法對(duì)惡性卵巢上皮性腫瘤組織中的Gab2蛋白進(jìn)行了檢測(cè)，觀察其表達(dá)變化，并探討其意義。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源2012～2015年濰坊市人民醫(yī)院病理科保存的經(jīng)病理檢查確診的惡性卵巢上皮性腫瘤組織75例份(漿液性卵巢上皮性癌30例份，黏液性卵巢上皮性癌24例份，子宮內(nèi)膜樣癌12例份，透明細(xì)胞癌9例份)，良性卵巢上皮性腫瘤組織20例份，正常卵巢組織20例份。75例份惡性卵巢上皮性腫瘤組織的組織學(xué)分級(jí)為G1級(jí)27例份、G2級(jí)23例份、G2級(jí)25例份，F(xiàn)IGO分期為Ⅰ期18例份、Ⅱ期21例份、Ⅲ期24例份、Ⅳ期12例份。

1.2受檢標(biāo)本Gab2蛋白檢測(cè)方法采用免疫組化PV-9000二步法。兔抗人Gab2多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，免疫組化檢測(cè)試劑盒PV-9000、DAB顯色試劑盒、PBS購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。具體操作參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。Gab2蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比及著色強(qiáng)度分別計(jì)分。先在低倍鏡下尋找細(xì)胞著色最強(qiáng)區(qū)域，然后選5個(gè)高倍視野(200×)，各計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞<10%計(jì)0分、10%～25%計(jì)1分、26%～50%計(jì)2分、>50%計(jì)3分；細(xì)胞著色弱計(jì)1分，著色中等計(jì)2分，著色強(qiáng)計(jì)3分；上述兩分值相加得0分為陰性(-)、1～2分為弱陽(yáng)性(+)、3～4分為陽(yáng)性(++)、5～6分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，++、+++判為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1惡性卵巢上皮性腫瘤組織、良性卵巢上皮性腫瘤組織、正常卵巢組織Gab2蛋白的表達(dá)比較惡性卵巢上皮性腫瘤組織、良性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為61%(46/75)、15%(3/20)，正常卵巢組織中僅3例呈+(陽(yáng)性表達(dá)率為0)；組間Gab2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率相比，P<0.05；惡性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與良性卵巢上皮性腫瘤組織及正常卵巢組織相比，P均<0.05；良性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與正常卵巢組織相比，P>0.05。

2.2Gab2蛋白表達(dá)與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系Gab2蛋白陽(yáng)性表達(dá)與惡性卵巢上皮性腫瘤組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均<0.05)，與病理類型無(wú)關(guān)(P>0.05)，詳見(jiàn)表1。

表1　 Gab2蛋白表達(dá)與惡性卵巢上皮性腫瘤

3討論

Gab2基因是一個(gè)重要的癌癥相關(guān)基因。在對(duì)乳腺癌、卵巢癌、白血病和黑色素瘤的研究中，Gab2基因被鑒定為一個(gè)潛在的致癌基因[3，4]。本觀察結(jié)果表明，Gab2蛋白在61.33%的惡性卵巢上皮性腫瘤組織中高表達(dá)，而在正常卵巢組織中不表達(dá)或僅呈弱表達(dá)，提示Gab2與惡性卵巢上皮性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，同時(shí)支持Gab2的原癌基因特性。Gab2蛋白是一種支架協(xié)調(diào)蛋白，這類蛋白含有多個(gè)蛋白結(jié)合位點(diǎn)，可形成多蛋白復(fù)合體，為信號(hào)的連接和傳導(dǎo)提供一個(gè)平臺(tái)[5]。通過(guò)創(chuàng)傷修復(fù)和侵襲小室試驗(yàn)測(cè)定，Gab2蛋白高表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲、下調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá)，與之相反，將Gab2沉默后，則抑制細(xì)胞的遷移和侵襲、上調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá)[2]。Gab2蛋白的作用主要通過(guò)激活PI3K信號(hào)通路來(lái)完成。Gab2/PI3K/ZEB1信號(hào)通路可以作為治療由Gab2所誘發(fā)惡性卵巢上皮性腫瘤的一個(gè)新靶點(diǎn)。

Fleuren等[6]在研究Gab2與乳腺癌的關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，Gab2蛋白高表達(dá)于腫瘤發(fā)展階段的后期。本觀察發(fā)現(xiàn)，Gab2蛋白陽(yáng)性表達(dá)與惡性卵巢上皮性腫瘤組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，表明Gab2蛋白高表達(dá)可能預(yù)示著該腫瘤侵襲性高、預(yù)后差、易復(fù)發(fā)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Schwab M. Amplification of oncogenes in human cancer cells [J]. Bioessays, 1998,20(6):473- 479.

[2] Wang Y, Sheng Q, Spillman MA, et al. Gab2 regulates the migratory behaviors and E-cadherin expression via activation of the PI3K pathway in ovarian cancer cells[J]. Oncogene, 2012,31(20):2512-2520.

[3] Bocanegra M, Bergamaschi A, Kim YH, et al. Focal amplification and oncogene dependency of Gab2 in breast cancer [J]. Oncogene, 2010,29(5):774-779.

[4] Horst B, Gruvberger-Saal SK, Hopkins BD, et al. Gab2-mediated signaling promotes melanoma metastasis[J]. Am J Pathol, 2009,174(4):1524-1533.

[5] Sarmay G, Angyal A, Kertesz A, et al. The multiple func-tion of Grb2 associated binder (Gab) adaptor/scaffolding protein in immune cell signaling [J]. Immunol Lett, 2006,104(1-2):76-82.

[6] Fleuren ED, O′ Toole S, Millar EK, et al. Overexpression of the oncogenic signal transducer Gab2 occurs early in breast cancer development [J]. Int J Cancer, 2010,127(6):1486-1492．