*：青海省(應(yīng)用)基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(2013-Z-735)

楊啟英(1965～)，女，漢族，青海籍，副主任檢驗(yàn)師

青海地區(qū)非小細(xì)胞肺癌患者EGFR突變狀態(tài)分析*

楊啟英，盧天龍

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，青海 西寧 810000)

摘要目的探討青海地區(qū)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC) 患者表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR) 基因的突變情況。方法經(jīng)病理確診的300例NSCLC患者，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增方法檢測(cè)EGFR第18、19、20和21外顯子的突變情況，并行相關(guān)分析。結(jié)果300例NSCLC患者標(biāo)本EGFR(exon18)突變4例，突變率1.3%；EGFR(exon19)突變36例，突變率12.0%；EGFR(exon20)未檢出；EGFR(exon21)突變54例，突變率18.0%。結(jié)論青海地區(qū)NSCLC患者EGFR基因外顯子19和21的突變(體細(xì)胞突變)率較高，可接受EGFR-TKIs治療。

關(guān)鍵詞非小細(xì)胞肺癌表皮生長(zhǎng)因子受體突變青海地區(qū)

中圖分類(lèi)號(hào)R734.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2015.03.001

AbstractObjectiveTo investigate the mutation of epidermal growth factor receptor(EGFR)gene in non small cell lung cancer(NSCLC)patients at Qinghai area.Methods 300 cases of patients with NSCLC were defined by pathological diagnosis and then using polymerase chain reaction(PCR)amplification method to detect the mutation in EGFR 18，19，20 and 21 exons.Results Of 300 patients with NSCLC there were 4 cases mutated in EGFR(exon18)，the mutation rate was 1.3%；36 cases in EGFR mutations(exon19)，the mutation rate was 12.0%；there was no mutation was found in EGFR(exon20)；54 cases mutated in EGFR (exon21)，the mutation rate was 18.0%.Conclusion The rate of mutation in exon 19 and 21(somatic mutation)of EGFR genes in patients with NSCLC is higher，and they can be treated with EGFR - TKIs.

KeywordsNon-small-cell lung cancerEpidermal growth factor receptorMutation Qinghai

收稿日期2015-04-03

ANALYSIS OF EGFR MUTATION IN NON-SMALL CELL LUNG

CANCER AT QINGHAI REGION

Yang Qiying，Lu Tianlong

(Dept.of clinical laboratory，The Qinghai university affiliated hospital，Xining，Qinghai 810000)

肺癌組織內(nèi)血管形成與表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)表達(dá)水平相關(guān)[1]。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的靶向治療已成為臨床重要的治療手段，EGFR被認(rèn)為是能有效治療非小細(xì)胞肺癌的靶點(diǎn)之一[2]，在開(kāi)展以EGFR靶向用藥前，進(jìn)行靶標(biāo)檢測(cè)和分子亞型區(qū)分成為接受EGFR-TKIs治療的必要過(guò)程。青海為高海拔地區(qū)，肺癌發(fā)病率高，肺癌靶向治療的靶點(diǎn)篩查空白。本研究通過(guò)實(shí)時(shí)熒光Taqman探針?lè)ǎ治銮嗪５貐^(qū)300例NSCLC患者肺癌病理切片，了解其EGFR突變情況，為NSCLC 患者的臨床藥物分子靶向治療提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1　標(biāo)本來(lái)源

選用青海地區(qū)300例臨床病理資料完整，未經(jīng)過(guò)放化療的肺癌組織標(biāo)本。標(biāo)本通過(guò)HE染色和免疫組織化學(xué)染色確定組織類(lèi)型。300例肺癌患者，男186例，女114例。年齡35～75歲，中位年齡55歲，<55歲56例，55歲244例。腫瘤標(biāo)本中鱗癌128例，腺癌172例。

1.2　試劑及儀器

石蠟切片組織DNA提取試劑購(gòu)自BIOMIGA公司，人EGFR基因突變檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司。檢測(cè)儀器為ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

1.3　研究方法

1.3.1檢測(cè)方法

利用實(shí)時(shí)熒光Taqman探針?lè)?，采用PCR體外擴(kuò)增，通過(guò)熒光信號(hào)的變化，檢測(cè)患者標(biāo)本中EGFR突變情況，具體實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.2結(jié)果判定方法

1.3.2.1陰性對(duì)照有效性判定：CT值≧38或顯示“Undet”。

1.3.2.2陽(yáng)性對(duì)照有效性判定：CT值<36。

1.3.2.3結(jié)果判定：參照試劑盒說(shuō)明。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，EGFR基因突變情況與臨床特征采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

300例肺癌患者標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果：EGFR(exon18)突變4例，突變率1.3%，由于突變例數(shù)較少，結(jié)果顯示exon18突變情況在患者年齡大小、性別、吸煙情況、組織類(lèi)型等臨床特征無(wú)差異(P>0.05，表1)；EGFR(exon19)突變36例，突變率12.0%，結(jié)果顯示exon19突變情況在患者年齡無(wú)差異(P>0.05)，在性別、吸煙狀態(tài)、組織類(lèi)型等臨床特征有差異(P<0.05，表2)，不吸煙、女性、腺癌等臨床特征組exon 19突變率較高；EGFR(exon20)未檢測(cè)出突變，可能跟青海地區(qū)未使用EGFR-TKIs有關(guān)；EGFR(exon21)突變54例，突變率18.0%，結(jié)果顯示exon21突變情況在患者年齡無(wú)差異(P>0.05)，在性別、吸煙狀態(tài)、組織類(lèi)型等臨床特征有差異(P<0.05，表3)，不吸煙、女性、腺癌等臨床特征組exon21突變率較高。

表1　NSCLC患者EGFR(exon18)突變情況與臨床特征關(guān)系

表2　NSCLC患者EGFR(exon19)突變情況與臨床特征關(guān)系

表3　NSCLC患者EGFR(exon21)突變情況與臨床特征關(guān)系

3結(jié)論

EGFR的分子靶向藥物抑癌機(jī)制是，通過(guò)阻斷EGFR介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，抑制腫瘤血管生成，進(jìn)而抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，提高腫瘤細(xì)胞放化療的敏感性，促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡或死亡。EGFR的分子靶向藥物主要分兩類(lèi)：①酪氨酸激酶抑制劑(TKI)，通過(guò)抑制EGFR胞內(nèi)區(qū)酪氨酸激酶活性，阻斷其細(xì)胞信號(hào)通路產(chǎn)生抑癌作用；②單克隆抗體，通過(guò)與EGFR胞外區(qū)結(jié)合，阻斷EGFR活化產(chǎn)生抑癌作用。臨床運(yùn)用結(jié)果表明這些靶向藥物僅對(duì)部分患者有效，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)EGFR基因外顯子19和21的突變(體細(xì)胞突變)是此類(lèi)靶向藥物發(fā)揮效應(yīng)的必要前提[3-4]。美國(guó)哈佛醫(yī)學(xué)院的研究人員Lynch等2004年率先報(bào)道，肺腫瘤組織細(xì)胞中存在EGFR外顯子19缺失或外顯子21突變的患者，靶向藥物易瑞沙的有效率高達(dá)80%以上[5]。有臨床研究表明，EGFR突變分布與患者臨床使用EGFR-TKIs治療療效相符，主要為腺癌、女性、非吸煙患者及亞洲患者[6]。然而，一部分對(duì)EGFR-TKIs治療有效的患者最終都會(huì)對(duì)EGFR-TKIs產(chǎn)生耐藥性。進(jìn)一步臨床研究還表明，EGFR基因外顯子20的體細(xì)胞突變是EGFR-TKIs繼發(fā)耐藥的主要機(jī)制之一?；颊逧GFR的分子靶向藥物治療后復(fù)發(fā)肺癌，可引起EGFR外顯子20的第790位密碼子C→T的轉(zhuǎn)換，導(dǎo)致EGFR蛋白該位點(diǎn)的蘇氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榧琢虬彼?T790M)[7-8]。這一突變使得非小細(xì)胞肺癌患者對(duì)吉非替尼和厄羅替尼產(chǎn)生抗性[9-10]。2009年美國(guó)國(guó)家癌癥綜合網(wǎng)絡(luò)(NCCN)頒布的臨床指南[11]中明確指出，EGFR突變，尤其是腫瘤對(duì)如吉非替尼的敏感度與外顯子19缺失突變存在重要影響。

通過(guò)對(duì)青海地區(qū)300例NSCLC患者研究發(fā)現(xiàn)，青海地區(qū)EGFR基因突變主要為19和21外顯子，突變率分別為12.0%和18.0%。結(jié)果顯示exon19和exon21突變與患者年齡無(wú)關(guān)，與性別、吸煙狀態(tài)、組織類(lèi)型等有關(guān)，主要為腺癌、女性、非吸煙患者。無(wú)20號(hào)外顯子的突變，說(shuō)明青海地區(qū)非小細(xì)胞肺癌患者對(duì)吉非替尼和厄羅替尼敏感、無(wú)EGFR的分子靶向藥物抗性，肺癌患者有使用TKIs藥物指征，且無(wú)20號(hào)外顯子的突變。本研究采用實(shí)時(shí)熒光Taqman探針?lè)?，回顧分析青海地區(qū)大量的臨床標(biāo)本，檢測(cè)EGFR基因突變情況，探討其突變特點(diǎn)以及與多項(xiàng)臨床特征的關(guān)系，對(duì)指導(dǎo)青海NSCLC患者使用EGFR-TKIs進(jìn)行個(gè)體化治療具有十分重要的意義。

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