鎖陽三萜咀嚼片的工藝研究

許海燕1，王常喜1，張麟1，馬超美1，楊勇智2

(1.內(nèi)蒙古大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特010021；2.萬銘集團，內(nèi)蒙古 呼和浩特010021)

摘要：以富含3種三萜成分的鎖陽乙醇提取物為原料，研制鎖陽三萜咀嚼片.探討鎖陽三萜咀嚼片的加工工藝和相關(guān)技術(shù)，確定出鎖陽三萜咀嚼片的配方(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為：30%鎖陽三萜、15%奶粉、17%糖粉、27%玉米淀粉、10%微晶纖維素、0.22%甘草酸、0.78%檸檬酸等，制得口感好、表面光滑美觀、色澤均勻、硬度好、咀嚼性優(yōu)良的新型鎖陽三萜咀嚼片.另外，建立了超高效液相-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用方法測定提取物及咀嚼片中3種三萜的含量.

關(guān)鍵詞：鎖陽；三萜；咀嚼片；超高效液相-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用

DOI：10.3969/j.issn.1000-1565.2015.05.007

中圖分類號：TS201.1文獻標(biāo)志碼：A

收稿日期:2015-04-22

基金項目：鎖陽三萜的保肝功能食品研發(fā)橫向課題(21400-5156007)

Formulation and evaluation of chewable tablet of

triterpenes fromCynomoriumsongaricium

XU Haiyan1，WANG Changxi1，ZHANG Lin1，MA Chaomei1，YANG Yongzhi2

(1. College of Life Sciences, Inner Mongolia University, Hohhot 010021, China;

2. Wan Ming Industrial (Group) Co., Ltd., Hohhot 010021, China)

Abstract:Triterpene chewable tablets were prepared with an ethanol extract containing the 3 major triterpenoid constituents of Cynomorium songaricium as main material.The formula (mass percent) of the chewable tablet was determined as: 30% ethanol extract of C. songaricium, 15% milk powder, 17% sugar powder, 27% corn starch, 10% microcrystalline cellulose, 0.22% glycyrrhizic acid, 0.78% citric acid and so on. Cynomorium triterpene chewable tablets with good taste, smooth surface, identical color, proper hardness and good chewability have been produced. In addition, an ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole mass spectrometry (UPLC-QQQMS) method was developed to quantify the 3 Cynomorium triterpenes in the extract and the tablets.

Key words: cynomorium songaricium; triterpene; chewable tablets; UPLC-QQQMS

第一作者：許海燕(1987-)，女，內(nèi)蒙古呼和浩特人，內(nèi)蒙古大學(xué)在讀碩士生，主要從事天然藥物與功能食品研究.

E-mail：582828746@qq.com

通信作者：馬超美(1962-)，女，陜西三原人，內(nèi)蒙古大學(xué)教授，博士后，主要從事天然藥物與功能食品研究.

E-mail：cmma@imu.edu.cn

鎖陽(Cynomoriumsongaricium)又名不老藥，是一種多年生肉質(zhì)寄生草本植物，常寄生于蒺藜科白刺等植物的根上，生長于內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅等地的草原化荒漠地帶，是一種傳統(tǒng)的中藥，用于補腎、助陽、益精、潤腸等[1].當(dāng)?shù)厝藗冞€把它添加在茶和酒里，或者當(dāng)作蔬菜食用.鎖陽中含有世界衛(wèi)生組織公布的7種人體必需的微量元素鐵、銅、鋅、錳、鎳、鉬、鈷，鉬、鐵和鋅含量較高[2].王宗兵等報道鎖陽可以提高小鼠運動耐力[3].有研究發(fā)現(xiàn)，鎖陽具有保護神經(jīng)細(xì)胞的作用[4].現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鎖陽具有抗氧化、抗糖尿病、抑制HIV-1蛋白酶活性、提高免疫力等功能.鎖陽中主要化合物包括：三萜類、甾體類、木脂素類、黃酮類等.鎖陽中已有報道的4種三萜類化合物為熊果酸、乙酰熊果酸、熊果酸丙二酸半酯、齊墩果酸丙二酸半酯[5].三萜類化合物具有抗HIV和HCV蛋白酶活性，且熊果酸丙二酸半酯的活性強于熊果酸[6].熊果酸可明顯改善慢性乙醇性大鼠肝臟組織病理學(xué)損傷，改善二甲基亞硝胺所致的大鼠肝纖維化，用于臨床治療甲、乙型急性病毒性肝炎治愈率達89.3%，并且熊果酸可顯著而迅速地降低血清轉(zhuǎn)氨酶的活性，消退黃疸，增進食欲和恢復(fù)肝功能[7].從鎖陽提取得到的富含熊果酸的活性部位對肝臟和腎臟具有保護作用[8].

鎖陽可作為藥食兩用的植物，它的醫(yī)用及保健價值越來越受到人們的重視，其產(chǎn)品的質(zhì)量控制和規(guī)范化生產(chǎn)也逐漸引起重視[9].本研究以含有鎖陽三萜的乙醇提取物為主要原料，選擇適當(dāng)?shù)妮o料，調(diào)整各成分比例，采用濕法制粒的方法，研制出口味酸甜，攜帶方便，具有對化學(xué)性肝損傷有輔助保護作用的鎖陽三萜咀嚼片.

1材料和方法

1.1　材料

鎖陽(Cynomoriumsongaricium)購買于內(nèi)蒙古阿拉善盟左旗；玉米淀粉：內(nèi)蒙古玉王生物科技有限公司；奶粉：內(nèi)蒙古金河套乳業(yè)有限公司；糖粉：云南省鳳慶糖業(yè)集團有限責(zé)任公司；微晶纖維素：安徽山河藥用輔料股份有限公司；滑石粉：廣西桂林市海達滑石制品有限公司；聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)：博愛新開源制藥股份有限公司.

1.2　工藝流程

鎖陽三萜咀嚼片以鎖陽的乙醇提取物為原料，添加甜味劑、黏結(jié)劑、酸味劑、填充劑等輔料，采用楊春梅等人[10]的濕法制粒方法，并在其基礎(chǔ)上進行改進與優(yōu)化，用于研制鎖陽三萜咀嚼片.

鎖陽→預(yù)處理→乙醇提取→減壓濃縮→原料

↓

輔料→混合→制軟材→制粒→干燥→整粒→壓片→分析檢測→包裝→成品

1.2.1原料的制取

預(yù)處理：將鎖陽清理去雜，粉碎成黃豆大小的顆粒.加入4倍量體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液[11]，常溫浸泡24 h，每6 h攪拌1次，連續(xù)提取3次，提取液于減壓濃縮罐中于70 °C減壓濃縮成浸膏.

1.2.2制軟材

1)配方調(diào)試實驗：將幾種主要輔料設(shè)計成幾組不同的比例，制作鎖陽三萜咀嚼片，品嘗后根據(jù)口感、外觀、片質(zhì)量差異、硬度的統(tǒng)計，確定此實驗的最佳工藝配方. 2)軟材的制作方法：輔料混合攪拌10~15 min至完全均勻，緩慢加入一定比例的原料，制作軟材，制成的軟材軟硬度適中，手握成團，輕壓則散，造粒過篩時不粘篩網(wǎng)，成均勻的顆粒狀.

1.2.3造粒與干燥

將軟材投入搖擺式顆粒機中進行造粒，顆粒制成后，立即置于60 ℃烘箱中進行干燥，以免濕顆粒結(jié)成塊.

1.2.4整粒

將干燥好的軟材過孔徑0.85 μm篩，成適合壓片的均勻顆粒，以免一些濕顆粒結(jié)成塊，影響壓片效果.

1.2.5壓片

適當(dāng)調(diào)整壓片機的壓力與物料填充量，避免導(dǎo)致壓力太小、填充量少、成品易碎與壓力過大、填充量多、成品太硬不易咀嚼的結(jié)果.

1.3　檢測分析

通過UPLC-QQQMS，參考馬超美等[11]的色譜條件與質(zhì)譜條件，并在其基礎(chǔ)上進行優(yōu)化，檢測鎖陽三萜咀嚼片中的三萜成分及其含量.

1.3.1樣品處理

隨機取制得的三萜咀嚼片成品，稱重(0.619 96 g)粉碎后用甲醇按藥粉：溶劑(1 g: 20 mL)的比例混合，超聲提取10 min，搖晃，連續(xù)提取3次，提取液在3000 r/min的離心力下，離心10 min，上清液用甲醇稀釋20倍后用0.22 μm微濾膜過濾，濾液由UPLC-QQQMS檢測.

1.3.2色譜條件

色譜柱為Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×50 mm; particle size: 1.8 μm)，流動相分別為體積分?jǐn)?shù)0.1%的甲酸溶液(A)、甲醇溶液(B)，柱溫為30 ℃，梯度洗脫程序如表1所示.

表1　梯度洗脫條件

1.3.3質(zhì)譜條件

電噴霧電離源(ESI)，源霧化電壓為4 000 V，溫度為350 ℃，掃描模式為負(fù)離子.掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(MRM).

2結(jié)果與分析

2.1　乙醇提取條件的確定

乙醇提取鎖陽顆粒，將鎖陽中脂溶性成分三萜提取出來[12].

2.1.1乙醇提取時間及溫度的確定

研究表明，高溫會降低鎖陽中熊果酸(1)、乙酰熊果酸(2)、熊果酸丙二酸半酯(3)(圖1)的含量，且時間越長含量越低.本研究組在研究溫度對鎖陽三萜成分的影響中曾發(fā)現(xiàn)鎖陽中抑制丙肝病毒蛋白酶活性最強的熊果酸丙二酸半酯對高溫最敏感[6].因此，本研究采用常溫提取鎖陽，為了將三萜成分提取完全提取時間定為24h，提取次數(shù)定為3次.

1.熊果酸；2.乙酰熊果酸；3.熊果酸丙二酸半酯.

2.1.2乙醇濃度的確定

三萜類成分能溶于乙醇.在室溫下，用乙醇溶液提取鎖陽三萜，不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇提取的鎖陽三萜中熊果酸(1)、乙酰熊果酸(2)、熊果酸丙二酸半酯(3)的含量，見表2.

表2　乙醇體積分?jǐn)?shù)對三萜中熊果酸、乙酰熊果酸、熊果酸丙二酸半酯含量的影響

由表2可知，室溫下，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高，提取物中的熊果酸、乙酰熊果酸、熊果酸丙二酸半酯的含量升高，體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇溶液所提取的化合物1、2、3顯著高于體積分?jǐn)?shù)40%乙醇，因此，體積分?jǐn)?shù)95%乙醇適于提取鎖陽中的三萜成分.

2.2　乙醇提取物的檢測

將提取后的乙醇溶液減壓濃縮成浸膏，于超高效液相-四極桿質(zhì)譜(UPLC-QQQMS)分析，與標(biāo)準(zhǔn)品對照檢測浸膏所含有的熊果酸(1)、乙酰熊果酸(2)、熊果酸丙二酸半酯(3)(圖2).

a.標(biāo)準(zhǔn)品;b.鎖陽乙醇提取物.

由圖2可知，乙醇提取物中含有熊果酸 (1)、乙酰熊果酸(2)和熊果酸丙二酸半酯(3)，熊果酸丙二酸半酯與熊果酸的保留時間相近，分別為2.1,2.4 min，乙酰熊果酸與之相比保留時間較長為4.5 min.

2.3　輔料的確定

鎖陽三萜咀嚼片是由乙醇提取的浸膏與輔料混合組成，輔料的選擇直接影響咀嚼片的制粒效果、粘牙程度、壓片效果等.

2.3.1黏合劑的選擇

30%的乙醇浸膏加主要輔料——黏合劑，采用不同的黏合劑制粒，觀察制粒效果及壓片后片劑硬度、粘牙程度，不同黏合劑制出粒的效果見表3.

表3　不同黏合劑對鎖陽三萜的制粒效果

由表3可知，質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%微晶纖維素+質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%玉米淀粉與其他組比較起來整體效果較優(yōu)，整粒過程中無大塊出現(xiàn)，壓出的片劑較硬，不疏松，不粘牙，因此，當(dāng)玉米淀粉的量高于微晶纖維素時，所制得的粒硬度較好.

2.3.2咀嚼片配方

選取不同的配方(表4)對咀嚼片的片性、口感進行研究，由20人進行品嘗分別對色澤、外觀、口感、質(zhì)地進行評價，分?jǐn)?shù)均為1~5分，確定出最佳配方，結(jié)果見表5.

感官指標(biāo)為外觀：外形完整、光滑、厚薄均勻、邊緣整齊； 色澤：呈淡棕色且均勻； 口感：酸甜適中、可口；質(zhì)地：內(nèi)質(zhì)結(jié)構(gòu)細(xì)密均勻，硬度適中.

表4　咀嚼片配方

準(zhǔn)確稱取上述配方混勻、制粒、干燥后添加潤滑劑，選用硬脂酸鎂+滑石粉作為本處方的潤滑劑，二者合用可將助流、潤滑和抗黏3種特性表現(xiàn)最佳[13].稱取質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%滑石粉、質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%硬脂酸鎂.

表5　鎖陽三萜咀嚼片感官評價

由表4,5得，甘草酸、檸檬酸含量高口感最差，甘草酸太甜，甜度幾乎是蔗糖的200倍，甜味在口腔殘留長久.因此，配方1太酸太甜，且甜味久久不退；配方2有些酸且偏甜，一部分人不能接受；配方4略偏甜，且藥味較濃；4種配方中配方3是大多數(shù)試食者喜愛的口味，且其色澤均勻，外觀光滑整齊，硬度適中，酸甜可口.

2.3.3聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)的確定

PVP具有良好的食物安全性，在制作片劑時添加適量PVP對片劑的硬度會有一定的影響，上述配方確定后，取一部分制粒干燥后加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%PVP混勻，再加潤滑劑壓片，與不加PVP的片子做硬度比較實驗.取10片制劑進行實驗，結(jié)果見表6.

表6　PVP對片劑硬度的影響

由表6知，不添加PVP所制得的片劑疏松、易裂，添加少量PVP后的片劑較為結(jié)實，可推測成品后在搬輸過程中不易掉渣，不易裂.

2.4　UPLC-QQQMS檢測鎖陽三萜咀嚼片中的三萜成分及其含量

2.4.1UPLC-QQQMS檢測

優(yōu)化化合物熊果酸(1)、乙酰熊果酸(2)、熊果酸丙二酸半酯(3)的質(zhì)譜條件，見表7.將三萜咀嚼片的提取液于UPLC-QQQMS檢測，色譜結(jié)果見圖3.

圖3　咀嚼片中熊果酸、乙酰熊果酸、熊果酸丙二酸半酯LC-MS MRM檢測

化合物相對分子質(zhì)量母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞電壓/V熊果酸(1)456455455135乙酰熊果酸(2)498497497135熊果酸丙二酸半酯(3)542541497135

由表7與圖3可知熊果酸丙二酸半酯碎裂后有負(fù)離子為497的子離子，而熊果酸與乙酰熊果酸不易碎裂.

2.4.2定量分析

采用外標(biāo)法確定每片中化合物1、2、3的含量，將3種化合物的標(biāo)準(zhǔn)品混合由DMSO配成10 μg/mL的初始溶液，之后依次4倍稀釋，共稀釋8個梯度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量結(jié)果見表8.

表8　化合物1,2,3的定量結(jié)果

由圖3與表8知，制得的鎖陽三萜咀嚼片中含有化合物1、2、3，且熊果酸丙二酸半酯的含量最高為0.145 71%，乙酰熊果酸次之為0.057 65%.

3討論

本實驗研究的鎖陽三萜咀嚼片，工藝簡單、可行、穩(wěn)定、可靠.以鎖陽中三萜成分為原料，搭配適當(dāng)?shù)妮o料研制而成.其最佳工藝配方為(質(zhì)量分?jǐn)?shù))：浸膏30%、奶粉15%、微晶纖維素10%、玉米淀粉27%、糖粉17%、甘草酸0.22%、檸檬酸0.78%.制成的咀嚼片顏色均勻，口味酸甜，方便攜帶、服用.在咀嚼片中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為：0.029 51%，0.057 65%，0.145 71%.因此本研究建立的鎖陽三萜成分定量方法，可用于鎖陽及其制劑的質(zhì)量控制.

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(責(zé)任編輯：梁俊紅)