窩兒七化學(xué)成分研究

李真1，范冬冬1，張東東1，張亞強(qiáng)1，姜祎1，宋小妹1,2*，岳正剛2*

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽(yáng)712046；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心，咸陽(yáng)712046)

摘要：目的研究窩兒七乙酸乙酯部位的化學(xué)成分。方法采用硅膠、葡聚糖凝膠Sephadex LH-20等色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，通過(guò)理化方法和波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果從窩兒七乙酸乙酯部位中分離鑒定了7個(gè)化合物，分別為：棕櫚酸(1)、3-O-甲基-槲皮素(2)、β-谷甾醇(3)、鬼臼毒酮(4)、鬼臼毒素糖苷(5)、山荷葉素糖苷(6)、胡蘿卜苷(7)。結(jié)論其中，化合物1和2為首次從該植物中分離得到。

關(guān)鍵詞：窩兒七；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.06.003

中圖分類號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

基金項(xiàng)目：陜西省中醫(yī)管理局科研項(xiàng)目(編號(hào)：zy09)

作者簡(jiǎn)介：李真，女，碩士研究生

收稿日期：(2015-05-11)

Study on chemical constituents ofDiphylleiasinensisLi.

LI Zhen1，F(xiàn)AN Dongdong1，ZHANG Dongdong1，ZHANG Yaqiang1，JIANG Yi1，SONG Xiaomei1,2*，YUE Zhenggang2*(1.School of Pharmacy，Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine，Xianyang 712046, China；2. Shaanxi Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resource Industrialization，Shaanxi Province Key Laboratory of New Drugs and Chinese Medicine Foundation Research，Shaanxi Rheumatism and Tumor Center of TCM Engineering Technology Research，School of Pharmacy，Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine，Xianyang 712046，China )

Abstract:Objective To study the chemical constituents of the ethylacetate extract from Diphylleia sinensis Li.. Methods Silica gel and Sephadex LH-20 chromatographic techniques were used to study the chemical constituents of Diphylleia sinensis Li. and the chemical structures were elucidated by spectral data. Results 7 compounds were obtained and their structure were identified as hexadecanoic acid (1)，3-O-methyl-quercentin (2)，β-sitosterol (3)，podophyllotoxone (4)，podophyllotoxin-1-O-β-D-glucoside (5)，dephyllin-1-O-β-D-glucoside (6)， and daucosterol (7). Conclusion Compounds 1 and 2 were isolated from the plant for the first time.

Key words:DiphylleiasinensisLi.；chemical constituents；structure identification

*通信作者：宋小妹，女，教授

岳正剛，男，博士，講師

窩兒七又名山荷葉、窩兒參、一碗水，為小檗科植物中華山荷葉DiphylleiasinensisLi.的根及根莖[1]。主要分布于陜西、甘肅、四川等地，民間用于治療毒蛇咬傷、跌打損傷、筋骨疼痛以及氣管炎等癥[2-3]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，窩兒七中的化合物類型主要為木脂素類、黃酮類、甾體類等[4-5]，其中以木脂素類和黃酮類化學(xué)成分研究較多。為了更好地開(kāi)發(fā)利用窩兒七，筆者對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行了分離鑒定。從窩兒七的90%乙醇提取物中共分離鑒定了7個(gè)化合物，分別為：棕櫚酸(1)、3-O-甲基-槲皮素(2)、β-谷甾醇(3)、鬼臼毒酮(4)、鬼臼毒素葡萄糖苷(5)、山荷葉素葡萄糖苷(6)、胡蘿卜苷(7)。其中化合物1和2為首次從該植物中分離得到?；衔?～7結(jié)構(gòu)如圖1。

1儀器與試藥

1.1儀器Bruker-AVANCE400型核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo))；Agilent Technologies 6550 Q-TOF(美國(guó)安捷倫公司)；OB204電子分析天平(瑞士梅特勒公司)；KQ5200超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HH-2恒溫水浴鍋(常州國(guó)華電器有限公司)。

1.2試藥窩兒七藥材購(gòu)于陜西省眉縣，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室王繼濤高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為小檗科植物中華山荷葉DiphylleiasinensisLi.的干燥根及根莖；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(Pharmacia公司)；薄層層析硅膠GF254(青島海洋化工廠)、柱色譜用硅膠(200～300目，青島海洋化工廠)；實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純；水為超純水。

2提取與分離

干燥的窩兒七藥材5.0 kg，用體積分?jǐn)?shù)90%乙醇回流提取3次，每次2 h，減壓回收乙醇，得浸膏600 g，分散于水中，分別用石油醚、乙酸乙酯和水飽和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取部位500 g，經(jīng)硅膠柱色譜(200～300目)，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脫依次得到餾份1～8段。第3段(15 g)以石油醚-乙酸乙酯洗脫，得到化合物1(18 mg)；第4段(9.5 g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜以及Sephadex LH-20柱色譜得到化合物2(22 mg)和化合物3(7 mg)；第5段(5 g)經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮梯度洗脫，再經(jīng)反復(fù)Sephadex LH-20柱色譜得到化合物4(12 mg)；第6段(25 g)經(jīng)硅膠柱色譜，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脫，再經(jīng)反復(fù)Sephadex LH-20柱色譜得到化合物5(42 mg)，化合物6(38 mg)和化合物7(10 mg)。

3結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色粉末，分子式C16H32O2。ESI-MSm/z：255 [M-H]-。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：2.37(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，1.64(2H，m，H-3)，1.20-1.28(24H，m，H-4～H-15)， 0.90 (3H，t，J=6.5 Hz，H-16)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：179.7(C-1)，34.2(C-2)，24.7(C-3)，29.2-29.9(C-4～C-13)，31.9(C-14)，22.7(C-15)，14.4(C-16)。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道一致，故該化合物鑒定為棕櫚酸。

化合物2黃色粉末，分子式C16H12O7。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ:12.73(s，1H，5-OH)，7.58(d，1H，J=2.1 Hz，H-2′)，7.47(dd，1H，J=2.1，8.0 Hz，H-6′)，6.94(d，1H，J=9.0 Hz，H-5′)，6.41(d，1H，J=2.1 Hz，H-8)，6.22(d，1H，J=1.0 Hz，H-6)，3.81(s，3H，3-OMe)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：155.7(C-2)，137.7(C-3)， 177.8(C-4)，161.2(C-5)，93.6(C-6)，163.9(C-7)，98.6(C-8)，156.3(C-9)，104.2(C-10)，120.7(C-1′)，115.7(C-2′)，145.3(C-3′)，148.5(C-4′)，115.5(C-5′)，120.4(C-6′)，59.7(3-OMe)。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致，故該化合物鑒定為3-甲氧基槲皮素。

圖1化合物1～7的化學(xué)結(jié)構(gòu)

Fig.1The chemical structures of compounds 1-7

化合物3白色粉末，分子式C29H50O。其1H-NMR(C5D5N，400 MHz)和13C-NMR(C5D5N，100 MHz)譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本一致；將化合物1與β-谷甾醇對(duì)照品共TLC，經(jīng)3種不同溶劑系統(tǒng)展開(kāi)，其Rf值一致，故該化合物鑒定為β-谷甾醇。

化合物4白色粉末，分子式C22H20O8。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：7.53(s，1H，H-8)，6.71(s，1H，H-5)，6.40(s，2H，H-2′，6′)，6.08(d，2H，J=8.4 Hz，O-CH2-O)，4.86(d，1H，J=4.0 Hz，H-4)，4.59(m，1H，H-11β)，4.38(m，1H，H-11α)，3.81(s，3H，4′-OMe)，3.76(s，6H，3′，5′-OMe)，3.51(m，1H，H-2)，3.32(m，1H，H-3)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：192.6(C-1)，43.7(C-2)，44.9(C-3)，46.8(C-4)，109.9(C-5)，148.0(C-6，7)，106.3(C-8)，128.3(C-9)，141，7(C-10)，68.1(C-11)，173.0(C-12)，132.3(C-1′)，107.6(C-2′，6′)，153.4(C-3′)，137.7(C-4′)，153.3(C-5′)，56.5(3′，5′-OMe)，60.9O(4′-Me)，102，6(O-CH2-O)。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道一致，故該化合物鑒定為鬼臼毒酮。

化合物5白色粉末，分子式C28H32O13。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：4.51(d，1H，J=4.0 Hz，H-1)，3.35(m，1H，H-2)，2.86(m，1H，H-3)，5.09(d，1H，J= 9.0 Hz，H-4)，7.30(s，1H，H-8)，6.44(s，1H，H-5)，4.68(dd，1H，J= 6.5，8.5 Hz，H-11β)，4.22(dd，1H，J= 6.5，8.5 Hz，H-11α)，6.60(s，2H，H-2′，6′)，5.94(s，2H，O-CH2-O)，3.69(s，9H，3′，4′，5′-OMe)，4.47(d，1H，J=7.3 Hz，Glc-1)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：77.4(C-1)，31.9(C-2)，44.2(C-3)，43.8(C-4)，107.6(C-5)，146.8(C-6)，146.4(C-7)，107.9(C-8)，132.0(C-9)，131.8(C-10)，70.3(C-11)，178.3(C-12)，138.7(C-1′)，108.4(C-2′，6′)，153.3(C-3′，5′)，136.5(C-4′)，101.1(O-CH2-O)，56.3(C-3′，5′-OMe)，61.8(C-4′-OMe)，104.7(Glc-1)，74.4(Glc-2)，77.5(Glc-3)，70.3(Glc-4)，77.5(Glc-5)，60.5(Glc-6)。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故該化合物鑒定為鬼臼毒素葡萄糖苷。

化合物6白色粉末，分子式C27H26O12。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：8.18(s，1H，H-5)，7.01(s，1H，H-8)，5.61，(s，2H，H-11)，6.95(d，1H，J= 8.2 Hz，H-2′)，7.06(d，1H，J=1.5 Hz，H-5′)，6.81(dd，1H，J= 1.5，8.2 Hz，H-6′)，6.13(s，2H，O-CH2-O)，3.69(s，3H，6-OMe)，3.96(s，3H，7-OMe)，4.74(d，1H，J= 7.2 Hz，Glc-1)；13C-NMR(DMSO-d6，100 MHz)δ：118.9(C-1)，123.7(C-2)，129.6(C-3)，126.7(C-4)，101.4(C-5)，150.2(C-6)，151.4(C-7)，111.9(C-8)，129.9(C-9)，134.8(C-10)，67.5(C-11)，169.3(C-12)，144.9(C-1′)，105.6(C-2′)，146.7(C-3′)，146.8(C-4′)，108.1(C-5′)，123.8(C-6′)，101.8(O-CH2-O)，55.2(C-6-OMe)，55.9(C-7-OMe)，101.3(Glc-1)，73.8(Glc-2)，76.3(Glc-3)，70.1(Glc-4)，77.1(Glc-5)，61.3(Glc-6)。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故該化合物鑒定為山荷葉素葡萄糖苷。

化合物7白色粉末，C35H60O6。其1H-NMR(C5D5N，400 MHz)和13C-NMR(C5D5N，100 MHz)譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11-12]基本一致，將化合物7與胡蘿卜苷對(duì)照品TLC經(jīng)3種不同溶劑系統(tǒng)展開(kāi)，其Rf值一致，故化合物7鑒定為胡蘿卜苷。

參考文獻(xiàn)：

[1]宋小妹，劉海靜.太白七藥研究與應(yīng)用[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2011:296-300.

[2]馬辰，楊峻山，羅淑榮.山荷葉中木質(zhì)素成分的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1993，28(9):690-694.

[3]楊秀芳，馬養(yǎng)民，鄭敬海，等.窩兒七中化學(xué)成分的活性研究[J].陜西科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，31(1):86-89.

[4]馬養(yǎng)民，鄭敬海，劉建軍，等.太白七藥窩兒七化學(xué)成分的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(32):19781-19782.

[5]孫彥君，李占林，陳虹，等.鬼臼類植物化學(xué)成分和生物活性研究進(jìn)展[J].中草藥，2012，43(8):1626-1632.

[6]馮衛(wèi)生，王彥志，鄭曉珂.中藥化學(xué)成分解析[M].北京:科學(xué)出版社，2008.

[7]白虹，王英華，詹小平.栽培甘草地上部分化學(xué)成分研究[J].西北藥學(xué)雜志，2005，20(2):59-61.

[8]傅芃，李廷釗，柳潤(rùn)輝，等.田基黃黃酮類化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)天然藥物，2004， 2(5):964-966.

[9]趙奎軍，劉鎖蘭，楊雋，等.多歧沙參化學(xué)成分的研究[J].中草藥，2001，32(11):283-284.

[10]姜飛，田海嬌，張建龍，等.八角蓮的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2011，42(4):634-639.

[11]侯群鵝，郭志勇，鄒坤，等.吉祥草乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究[J].中藥材， 2009,32(9):1402-1404.

[12]楊濤，程雪梅，于福生，等.刺山柑果實(shí)的化學(xué)成分研究[J].西北藥學(xué)雜志，2010， 25(4):260-263.