■潘康成 張新華 張鈞利 張立平 周 堯

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，四川成都 611130；2.山東寶益澤生物工程有限公司，山東濟(jì)南 251400）

當(dāng)今全國范圍內(nèi)的氣候多變使得飼料在生產(chǎn)及存儲(chǔ)過程中極易出現(xiàn)霉變現(xiàn)象，所產(chǎn)生霉菌毒素不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成了相當(dāng)嚴(yán)重的損失，也間接地威脅到人類健康。各種霉菌毒素中黃曲霉毒素毒性最強(qiáng)，尤以黃曲霉毒素B1（AFB1）更甚。黃曲霉毒素是最強(qiáng)的免疫抑制劑之一，當(dāng)飼料受到較高濃度的黃曲霉毒素污染時(shí)，最先受到干擾的就是機(jī)體免疫系統(tǒng)。主要表現(xiàn)為抗體滴度低，藥物不能正常發(fā)揮作用，對(duì)疾病易感性高。且一旦發(fā)病，基本很難有治療效果。黃曲霉毒素同時(shí)還具有較強(qiáng)的凝血因子抑制功能，使動(dòng)物在受傷或者打針后出現(xiàn)流血不止或者淤血癥狀。黃曲霉毒素是一種強(qiáng)烈的肝毒素，當(dāng)大量攝入時(shí)，可發(fā)生急性中毒，出現(xiàn)急性肝炎、出血性壞死、肝細(xì)胞脂肪變性和膽管增生。當(dāng)微量持續(xù)攝入，可造成慢性中毒，生長障礙，引起纖維病變，致使纖維組織增生。霉菌毒素分解酶通過破壞黃曲霉毒素B1結(jié)構(gòu)中的二氫呋喃環(huán)，使黃曲霉毒素B1失去毒性作用。本試驗(yàn)旨在通過在育肥豬日糧中添加霉菌毒素分解酶，研究其對(duì)AFB1中毒育肥豬的生產(chǎn)性能及肝功能的影響，為霉菌毒素分解酶在育肥豬養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

霉菌毒素分解酶（山東寶益澤生物工程有限公司提供，商品名益利安）。AFB1標(biāo)準(zhǔn)品（購自江蘇美正生物科技有限公司，商品名益利安）。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組

選取胎次相同、體重相近（30～35 kg）、發(fā)育正常的育肥豬81頭，隨機(jī)分為3個(gè)組，分別為對(duì)照組、AFB1組、霉菌毒素分解酶組（后稱益利安組），每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)9頭豬，3個(gè)組之間試驗(yàn)動(dòng)物的初始體重差異不顯著（P＞0.05），預(yù)試驗(yàn)為期5 d，正式試驗(yàn)時(shí)間為28 d。預(yù)試驗(yàn)期間所有試驗(yàn)動(dòng)物均飼喂基礎(chǔ)日糧。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選在獨(dú)立豬舍進(jìn)行，自由采食和飲水，每日打掃豬舍，消毒免疫按常規(guī)方法進(jìn)行。

1.4 試驗(yàn)日糧

對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，AFB1組在基礎(chǔ)日糧中添加20 μg/kg的AFB1標(biāo)準(zhǔn)品，益利安組在基礎(chǔ)日糧中添加20 μg/kg的AFB1標(biāo)準(zhǔn)品和100 mg/kg的霉菌毒素分解酶制劑?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.5 樣品采集及保存

正式試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)豬自由飲水禁食24 h，稱重并計(jì)算日采食量、日增重及料重比。每組隨機(jī)取9頭豬按照常規(guī)方法屠宰，取出肝臟組織，-20℃冷凍保存。

1.6 測定指標(biāo)及方法

1.6.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)

生產(chǎn)性能指標(biāo)包括日均采食量、日均增重及料重比。

日均采食量：每天準(zhǔn)確稱量日糧的投喂量和剩余量，計(jì)算每頭豬每天日糧采食量(ADFI)。

日均增重：以預(yù)試期結(jié)束體重為初始體重，正式試驗(yàn)結(jié)束時(shí)為最終重量，計(jì)算每頭豬平均日增重（ADG）。

料重比：即日均采食量與平均日增重之比（F/G）。1.6.2 肝臟生化指標(biāo)及肝臟中AFB1的殘留

肝臟生化指標(biāo)包括谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、腺苷脫氨酶和膽堿酯酶，使用試劑盒采用分光光度法測定，測定儀器為752型分光光度計(jì)，試劑盒購于南京建成生物工程研究所。肝臟中的AFB1使用ELISA試劑盒檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 霉菌毒素分解酶對(duì)育肥豬生長性能的影響

表2 霉菌毒素分解酶對(duì)AFB1中毒育肥豬生長性能的影響

從表2可以看出，在日均增重對(duì)照組與霉菌毒素分解酶組沒有顯著差異（P＞0.05），對(duì)照組與霉菌毒素分解酶組的日均增重均高于AFB1組，其中霉菌毒素分解酶組的日均增重比AFB1組高出3.3%，差異顯著（P＜0.05）。在日均采食量對(duì)比中，對(duì)照組比AFB1組高出0.8%，差異不顯著（P＞0.05），霉菌毒素分解酶組分別比對(duì)照組和AFB1組高出1.13%和1.93%，差異顯著（P＜0.05）。在料重比對(duì)比中，對(duì)照組和霉菌毒素分解酶組均低于AFB1組，且差異顯著（P＜0.05）。

2.2 霉菌毒素分解酶對(duì)育肥豬肝臟生化指標(biāo)及肝臟內(nèi)AFB1檢出量的影響

表3 霉菌毒素分解酶對(duì)肝臟生化指標(biāo)及肝臟內(nèi)AFB1檢出量的影響

從表3中的數(shù)據(jù)可以看出，在谷胱甘肽還原酶指標(biāo)對(duì)比中，對(duì)照組和霉菌毒素分解酶組分別比AFB1組高出9.5%和15.38%，均差異顯著（P＜0.05），對(duì)照組與霉菌毒素分解酶組的谷胱甘肽還原酶無顯著差異（P＞0.05）。在谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶指標(biāo)對(duì)比中，對(duì)照組和霉菌毒素分解酶組分別比AFB1組高出15.6%和21.8%，均差異顯著（P＜0.05），對(duì)照組與霉菌毒素分解酶組的谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶無顯著差異。在腺苷脫氨酶指標(biāo)對(duì)比中，對(duì)照組和霉菌毒素分解酶組分別比AFB1組高出11.4%和21.33%，均差異顯著（P＜0.05），對(duì)照組與霉菌毒素分解酶組的腺苷脫氨酶無顯著差異。在肝臟AFB1檢出量對(duì)比中，對(duì)照組育肥豬肝臟中的AFB1含量為0.03 μg/kg，可忽略不計(jì)。霉菌毒素分解酶組的AFB1檢出量比AFB1組減少76.84%，差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

3.1 霉菌毒素分解酶對(duì)育肥豬生產(chǎn)性能的影響

黃曲霉毒素B1是一種強(qiáng)力致畸、致癌的霉菌毒素，對(duì)動(dòng)物正常生長發(fā)育有嚴(yán)重影響[1]。畜禽對(duì)霉菌毒素的臨床反應(yīng)可以表現(xiàn)為急性、亞急性或慢性，并具有劑量和時(shí)間依賴關(guān)系。往往表現(xiàn)為生殖周期紊亂，采食量下降，生長緩慢且飼料利用率降低[2]。史瑩華等的研究表明，黃曲霉毒素顯著影響試驗(yàn)豬的生長性能，日增重降低12.9%（P＜0.01），料重比提高7.54%（P＜0.01），同時(shí)顯著降低了試驗(yàn)豬的免疫功能和抗氧化能力[3]。尹遜慧等研究表明，在黃羽肉雞日糧中添加20 μg/kg或50 μg/kg的黃曲霉毒素B1，肉雞的平均出欄重、日均采食量顯著下降，料重比升高[4]。在本試驗(yàn)中，添加AFB1試驗(yàn)組的育肥豬在日均增重和日均采食量上均低于飼喂正常日糧的對(duì)照組育肥豬，料重比顯著高于對(duì)照組育肥豬。而添加了霉菌毒素分解酶的試驗(yàn)組育肥豬的日均增重和日均采食量遠(yuǎn)高于AFB1試驗(yàn)組育肥豬，且料重比顯著下降。說明霉菌毒素分解酶能夠有效解除黃曲霉毒素B1對(duì)育肥豬生長發(fā)育造成的毒害作用。

3.2 霉菌毒素分解酶對(duì)育肥豬肝臟功能的影響

黃曲霉毒素B1在動(dòng)物體內(nèi)作用的主要靶器官是肝臟[5-6]。肝臟作為動(dòng)物機(jī)體解毒的主要器官，受到的損害作用也就最大。谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽還原酶以及肝臟腺苷脫氨酶是保護(hù)動(dòng)物機(jī)體、起解毒作用的酶類[7]。史瑩華等研究表明，長期飼喂受霉毒素污染的日糧，容易引發(fā)霉菌毒素慢性中毒，黃曲霉毒素B1能使試驗(yàn)豬肝功能嚴(yán)重?fù)p傷，胞內(nèi)酶大量釋放到血液中，從而使肝臟酶活指標(biāo)顯著降低，影響肝臟功能[8]。于會(huì)民等研究表明，用含有黃曲霉毒素B1飼料飼喂斷奶仔豬，仔豬肝臟中的谷胱甘肽還原酶、過氧化氫酶、琥珀酸脫氫酶的活性顯著下降（P＜0.05），肝臟生理功能受損[9]。在本試驗(yàn)中，添加了霉菌毒素分解酶的育肥豬谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶和腺苷脫氨酶比AFB1試驗(yàn)組育肥豬相同指標(biāo)顯著降低（P＜0.05）。在肝臟中黃曲霉毒素B1檢出量指標(biāo)中，飼喂正常日糧的對(duì)照組育肥豬肝臟中黃曲霉毒素B1 的檢出量為 0.03 μg/kg，日糧中添加了100 μg/kg黃曲霉毒素B1的AFB1試驗(yàn)組育肥豬肝臟的黃曲霉毒素B1的檢出量為2.85 μg/kg，遠(yuǎn)高于對(duì)照組，說明黃曲霉毒素B1被動(dòng)物攝入體內(nèi)后會(huì)在肝臟內(nèi)蓄積。同時(shí)添加了霉菌毒素分解酶和黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品的試驗(yàn)組育肥豬肝臟中的黃曲霉毒素B1檢出量為0.66 μg/kg，比AFB1組減少了76.84%，說明霉菌毒素分解酶高效地分解了育肥豬肝臟中的黃曲霉毒素B1。

4 結(jié)論

在育肥豬日糧中添加黃曲霉毒素B1會(huì)造成育肥豬生產(chǎn)性能下降，肝功能減弱，在含有黃曲霉毒素B1的日糧中添加100 mg/kg的霉菌毒素分解酶，顯著提高了育肥豬的生長性能，料重比也顯著降低，尤其顯著降低了黃曲霉毒B1在肝臟中的檢出量。