中藥組方對(duì)狼瘡性腎炎患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的影響

夏嘉1，江麗紅2，蘇曉1*，姚重華1，夏菁1，張曉峰1，楊旭鳴1，陳薇薇1，唐華燕1，徐俊1

(1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院風(fēng)濕病科，上海 200071；2.上海市嘉定區(qū)中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)科，上海 201800)

摘要：目的觀察自擬養(yǎng)陰清熱、活血利水中藥組、環(huán)磷酰胺組、中藥組方聯(lián)合環(huán)磷酰胺對(duì)狼瘡性腎炎患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1表達(dá)的影響。方法收集狼瘡性腎炎病例共95例，隨機(jī)分為中醫(yī)組、西醫(yī)組和中西醫(yī)結(jié)合組，西醫(yī)組31例，中醫(yī)組31例，中西醫(yī)結(jié)合組33例。中醫(yī)組服中藥組方每日1劑，分2次口服；西醫(yī)組靜滴環(huán)磷酰胺1.0 g/月；中西醫(yī)結(jié)合組在中藥組方的基礎(chǔ)上靜滴環(huán)磷酰胺0.6 g/月。分別觀察3組治療前和治療6月后外周血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的表達(dá)。結(jié)果治療前后中醫(yī)組、西醫(yī)組IFN-γ、IL-4、TGF-β1的組內(nèi)比較(P<0.05)，中西醫(yī)組IFN-γ、IL-4、TGF-β1的組內(nèi)比較(P<0.01)。治療后IL-4 3個(gè)組的組間比較結(jié)果示中西醫(yī)組在降低IL-4的水平方面分別優(yōu)于中醫(yī)組和西醫(yī)組(P<0.05)。結(jié)論養(yǎng)陰清熱、活血利水中藥組方可能是通過(guò)改善狼瘡性腎炎患者血清中干擾素-γ、IL-4及TGF-β1的表達(dá),從而發(fā)揮治療效果。

關(guān)鍵詞：狼瘡性腎炎；中藥組方；細(xì)胞因子

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.04.016

中圖分類號(hào)：R593.24文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)04-0367-03

基金項(xiàng)目:上海市教育委員會(huì)科研項(xiàng)目(07cz045)。

作者簡(jiǎn)介:夏嘉(1981-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合治療風(fēng)濕免疫病研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：王丹2014-09-15)

*通信作者:蘇曉，電話-13817608102，電子信箱-tcmfengshi@163.com

Effect of herbal formula for serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 in lupus nephritis

XIA Jia2,JIANG Lihong2,SU Xiao1*,YAO Chonghua1,XIA Qing1,ZHANG Xiaofeng1,

YANG Xuming1,CHEN Weiwei1,TANG Huayan1,XU Jun1

(1.Affiliated Chinese Medicine Hospital to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200071,China;

2.Jiang Lihong for Traditional Chinese Medicine Hospital Medical Shanghai Jiading District,Shanghai 201800,China)

Abstract:ObjectiveTo observe serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 in lupus nephritis patients treated with decoction of nourishing yin and clearing away heat,activating blood and promoting diuresis,cyclophosphamide or cyclophosp hamide plus the above decoction in accordance with syndrome differentiation.MethodsWe collected 95 lupus nephritis cases from rheumatology department and outpatient of shanghai municipal TCM hospital affliated to shanghai TCM University.They were divided into chinese medicine group (31 cases),western medicine group (31 cases) and integrative medicine group (33 cases) by random assignment.Chinese medicine group:traditionnal chinese medicine decoction taken twice a day;Western medicine group:intravenous cyclophosphamide 1.0 g/month;Integrative medicine group:chinese medicine decoction plus intravenous cyclophosphamide 0.6 g/month.All the patients were treated 6 months respectively.Serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 before and after treatment in the three groups was observed.ResultsBoth Chinese and western medicine groups improved IFN-γ,IL-4,TGF-β1 after treatment(P<0.05).Integrated medicine group improved IFN-γ,IL-4,TGF-β1 after treatment more(P<0.01).The analysis of three groups after treatment showed the integrated medicine group decreased IL-4 better than the other two (P<0.05).ConclusionHerbal formula with the function of nourishing yin and clearing away heat,activating blood and promoting diuresis may improve the expression of serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 in LN patients to exert therapeutic effect.

Keywords:lupus nephritis;herbal formula;cytokine

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種多系統(tǒng)損害的、病程反復(fù)的自身免疫性疾病，可嚴(yán)重危害患者健康，影響生活質(zhì)量。狼瘡性腎炎(Lupus nephritis,LN)是其主要的預(yù)后不良因素，為我國(guó)常見(jiàn)的繼發(fā)性腎臟病之一。LN的病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚，多種細(xì)胞因子參與其中[1]。本研究擬檢測(cè)中藥組、西藥組及中西醫(yī)結(jié)合組治療前后的LN患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平，探討LN的免疫機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料全部觀察病例均來(lái)自上海市中醫(yī)醫(yī)院風(fēng)濕科門(mén)診及病房的病人，共95例。西醫(yī)組31例，中醫(yī)組31例，中西醫(yī)結(jié)合組33例,3組性別、年齡、病程經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①18～65歲患者；②符合《美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)1997年系統(tǒng)性紅斑狼瘡分類標(biāo)準(zhǔn)》四項(xiàng)或以上，并具備尿常規(guī)蛋白尿++以上或24 h尿蛋白1 g以上的患者;③經(jīng)SLEDAI評(píng)分：記分統(tǒng)計(jì)≥5分；④中醫(yī)辨證為陰虛內(nèi)熱、水瘀互結(jié)之證(參照2002年《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn))；⑤自愿作為受試對(duì)象,簽署知情同意書(shū)。2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①不符合上述入選標(biāo)準(zhǔn)；②年齡在18歲以下或65歲以上者；③有嚴(yán)重的心腦血管疾病或并發(fā)癥或腫瘤、艾滋病、精神病患者；④出現(xiàn)狼瘡性腦病、腎功能不全衰竭期或尿毒癥期等嚴(yán)重內(nèi)臟損害的SLE患者。

1.3治療方法3組激素的基線用量：根據(jù)SLEDAI積分，中重度患者為1 mg/(kg·d)，輕度活動(dòng)≤0.5 mg/(kg·d)。1)西醫(yī)組：環(huán)磷酰胺1.0 g/月，靜滴。2)中醫(yī)組：生地黃、丹參、接骨木、貓爪草、積雪草，每日1劑，分2次口服。3)中西醫(yī)結(jié)合組：中藥組方+環(huán)磷酰胺0.6 g/月，靜滴。

1.4標(biāo)本的檢測(cè)

1.4.1標(biāo)本收集用真空采血管收集患者清晨空腹靜脈血5 mL，待血液凝固后，800轉(zhuǎn)離心3 min，分離血清約1 mL,置于-40 ℃低溫冰箱中保存待用。

1.4.2細(xì)胞因子測(cè)定采用流式熒光免疫微球術(shù)(flow fluorenscence immunmicrobeads assay,FFIA)檢測(cè)人外周血清 IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平，所用試劑盒購(gòu)自?shī)W地利的Bender Medsystems公司。操作步驟如下：1)抗原吸附及檢測(cè)：樣本、標(biāo)準(zhǔn)品(根據(jù)說(shuō)明書(shū)配置、用于做標(biāo)準(zhǔn)基線)、空白品各12.5 μL，分別加入包被了IFN-γ、IL-4、TGF-β1的微球共12.5 μL和生物素化抗體25 μL，每管共計(jì)50 μL，混勻，溫室避光孵育2 h。2)加入Assay Buffer 1 mL洗滌2次，進(jìn)行200 g 5 min離心(第一次加Assay Buffer 1 mL,移去上清液975 μL；第2次加Assay Buffer 1 mL，移去上清液1 mL)。3)標(biāo)記熒光。每管分別加入25 μL Streptavidin-PE工作液(88 μL PE液+2 662 μL Assay Buffer)，混勻，溫室避光孵育1 h。4)加入Assay Buffer 1 mL洗滌2次，200 g 5 min離心，每次移去上清液1 mL。5)每管加Assay Buffer 500 μL，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞因子的熒光值(set微球用于調(diào)微球位置和基準(zhǔn)電壓)。

2結(jié)果

3組治療前的IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平分別經(jīng)方差分析P>0.05，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,具有可比性。IFN-γ、TGF-β1治療后組內(nèi)比較，中醫(yī)組和西醫(yī)組治療前后經(jīng)t檢驗(yàn)P<0.05,提示中醫(yī)組和西醫(yī)組能改善IFN-γ、TGF-β1；中西醫(yī)組治療前后IFN-γ、TGF-β1比較，t檢驗(yàn)P<0.01，差異有顯著性，提示中西醫(yī)組改善IFN-γ、TGF-β1的水平較明顯。但3組治療后組間比較經(jīng)方差分析P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-4治療前后的組內(nèi)比較，中醫(yī)組和西醫(yī)組治療前后組內(nèi)經(jīng)t檢驗(yàn)P<0.05,提示中醫(yī)組和西醫(yī)組均能降低IL-4；中西醫(yī)組治療前后組內(nèi)比較，t檢驗(yàn)P<0.01,差異有顯著性，提示中西醫(yī)組能明顯降低IL-4的水平。3組治療后組間比較經(jīng)方差分析P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LSD-t檢驗(yàn)兩兩比較結(jié)果顯示中西醫(yī)組分別和中醫(yī)組、西醫(yī)組比較P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示中西醫(yī)組在降低IL-4的水平方面分別優(yōu)于中醫(yī)組和西醫(yī)組(見(jiàn)表1)。

表1　3組外周血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1(pg/mL)的比較

注：與治療前比較，△P<0.05，△△P<0.01；與中醫(yī)組治療后比較，*P<0.05；與西醫(yī)組治療后比較，#P<0.05

3討論

流式熒光免疫微球分析術(shù)是建立在免疫熒光、免疫微球和流式細(xì)胞分析等實(shí)驗(yàn)技術(shù)基礎(chǔ)上的一種血清學(xué)檢測(cè)方法。人們將不同單克隆抗體偶聯(lián)在微球表面用于自身抗原、腫瘤標(biāo)志物以及病原微生物的檢測(cè)[2]，也可以將抗原結(jié)合在微球表面用于血清梅毒螺旋體抗體[3]和紅細(xì)胞血型抗體[4]以及血小板特異性抗體[5]的檢測(cè)。有報(bào)道表明[6-7]其測(cè)定的重復(fù)性、線性范圍和靈敏度均優(yōu)于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，而且所需的樣本量少、特異性高。LN是SLE死亡的常見(jiàn)病因,中晚期的病理改變主要是彌漫性細(xì)胞增生和纖維化[8]。有資料顯示[9-10]，Th1細(xì)胞因子尤其是IFN-γ參與了LN的產(chǎn)生及病理過(guò)程。IL-4則屬于Th2細(xì)胞因子之一，它在BXSB狼瘡小鼠體內(nèi)過(guò)度表達(dá)而加重病情[11]。因此，IFN-γ、IL-4等細(xì)胞因子不同程度的升高促進(jìn)了炎癥的發(fā)生及組織損傷從而導(dǎo)致了LN的發(fā)病[12]。近年來(lái)的研究[13-14]發(fā)現(xiàn)TGF-β1與LN也密切相關(guān)。TGF-β1可直接或間接地促使Ⅰ型、Ⅳ型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)的合成與積聚，誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞的積聚和血管生成[15]。本研究提示養(yǎng)陰清熱、活血利水中藥組方可能是通過(guò)改善LN患者血清中上述因子的表達(dá)，從而發(fā)揮治療效果。

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