運脾方藥對幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠瘦素胰島素影響的實驗研究

職冬麗1，王明明2*

(南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，南京 210029 )

摘要：目的觀察蒼術(shù)山楂顆粒對高脂飲食誘導(dǎo)的幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠體質(zhì)量、血清瘦素及胰島素水平的影響。方法采用高脂飲食喂養(yǎng)剛離乳(3周齡)SD大鼠,誘導(dǎo)幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠模型，4周后予蒼術(shù)山楂顆粒灌胃治療,觀察幼齡營養(yǎng)性肥胖模型大鼠體質(zhì)量、瘦素及胰島素的變化。結(jié)果蒼術(shù)山楂顆粒灌胃幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠4周后,治療組大鼠的體質(zhì)量(375.50±13.19) g明顯低于模型組(404.10±2.59) g，2組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01；治療組大鼠的血清瘦素(2.51±0.38) ng/mL較模型組(3.37±0.21) ng/mL有所下降，2組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05;治療組大鼠的血清胰島素(13.27±0.60) mIU/L明顯低于模型組(18.39±0.82) mIU/L,2組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。結(jié)論蒼術(shù)山楂顆粒通過降低幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠體內(nèi)較高的瘦素及胰島素水平來達(dá)到減重的目的。

關(guān)鍵詞：運脾方藥；幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠；瘦素；胰島素

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.04.026

中圖分類號：R725.8文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)04-0396-03

基金項目:南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)兒科學(xué)重點學(xué)科開放課題資助項目(EZK2012017)。

作者簡介:職冬麗(1982-)，女，碩士研究生，主治醫(yī)師，主要從事小兒脾系疾病研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯:趙玉芝2014-09-05)

*通信作者:王明明，電話-13512539114，電子信箱-mingmingwang330@126.com

Yun-pi Prescription for leptin and insulin influence on young nutritional obesity rats

ZHI Dongli1,WANG Mingming2*

(First Clinical Medical College of Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210029,China)

Abstract:ObjectiveObservation of rhizoma atractylodis haw granule on the young nutritional obesity rats induced by high-fat diet weight,blood thin element and the influence of insulin levels.MethodsHigh fat diet just from the milk of age (3 w) SD rats,induced the young in the rat model with nutritional obesity,4 weeks after receiving the payment rhizoma atractylodis hawthorn particles lavage treatment,observation of young alimentary obesity model rats changes in body weight,leptin and insulin.ResultsRhizoma atractylodis hawthorn particles lavage young nutritional obesity rats after 4 weeks,the treatment group rats body quality (375.50±13.19) g significantly lower than the model group (404.10±2.59) g,comparing the two groups,the difference was statistically significant,P<0.01;The treatment group rats blood thin element (2.51±0.38) ng/mL compared with model group (3.37±0.21) ng/mL decreased,the difference was statistically significant,P<0.05;The treatment group rats serum insulin (13.27±0.60) mIU/L significantly lower than the model group (18.39±0.82) mIU/L,comparing the two groups,the difference was statistically significant,P<0.01.ConclusionRhizoma atractylodis hawthorn particles by reducing juvenile nutritional obesity rats’ higher leptin and insulin levels to achieve the goal of weight loss.

Keywords:Yun-pi Prescription;young nutritional obesity rats;leptin;insulin

流行病學(xué)研究表明，肥胖兒童多數(shù)伴有瘦素抵抗和胰島素抵抗。瘦素抵抗是指機體組織對瘦素的調(diào)節(jié)作用減弱或無反應(yīng)，胰島素抵抗是指機體組織對胰島素的反應(yīng)性降低或喪失。且肥胖兒童血清瘦素與胰島素呈正相關(guān)關(guān)系，即肥胖兒童體內(nèi)存在著高瘦素血癥和高胰島素血癥[1]。中醫(yī)認(rèn)為，脾失健運、濕濁瘀阻是兒童單純性肥胖癥的主要病機，因此運脾化濕逐瘀是本病的主要治療原則。前期的動物實驗研究[2]表明，蒼術(shù)山楂顆?？梢愿纳朴g營養(yǎng)性肥胖大鼠異常的糖脂代謝，本研究擬觀察蒼術(shù)山楂顆粒對幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠體質(zhì)量、瘦素及胰島素的影響，以期進一步闡明運脾方藥對幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠體內(nèi)高瘦素及高胰島素水平的調(diào)整作用。

1材料與方法

1.1動物與飼料配制剛離乳(3周齡)SD大鼠102只，雄性，普通級，45～55 g，購于上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，許可證號:SCXK(滬)2008-0016。高脂飼料組成[3]：基礎(chǔ)飼料60%，豬油15%，雀巢全脂奶粉15%，雞蛋10%，魚肝油適量。高脂飼料和普通飼料均由江蘇省南京市青龍山動物繁殖場提供。

1.2藥物、試劑及儀器蒼術(shù)山楂顆粒由蒼術(shù)、山楂(1∶1配方顆粒)組成，以上中藥配方顆粒加入蒸餾水，用恒溫磁力攪拌器充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，?20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。麩炒蒼術(shù)配方顆粒(江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號1304031)；焦山楂配方顆粒(江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號1303170)；SHIMADZU電子分析天平(日本島津公司，型號：AUY120)；恒溫磁力攪拌器(上海藍(lán)豹實驗儀器有限公司,IT系列)；瘦素(LeP)ELISA試劑盒(上海韻涵生物科技有限公司，批號20130901)；胰島素(INS)ELISA試劑盒(上海韻涵生物科技有限公司，批號20130902)；PerkinEimer酶標(biāo)儀(美國GE公司)。

1.3模型制備實驗大鼠統(tǒng)一在南京中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心飼養(yǎng)。飼養(yǎng)期間大鼠一籠5只，室溫22～25 ℃，相對濕度40%～60%，通風(fēng)良好。將102只幼齡SD大鼠，按體質(zhì)量隨機分為普食組(10只)和造模組(92只)，2組大鼠初始體質(zhì)量無差異(P>0.05)。普食組投喂普通飼料；造模組采用混合喂養(yǎng)法,投喂高脂飼料和普通飼料。喂養(yǎng)期間所有大鼠自由飲水。4周后以超出普通飼料組體質(zhì)量的20%作為肥胖標(biāo)準(zhǔn)，篩選出肥胖大鼠16只。

1.4分組及給藥方法從普食組中隨機選取8只大鼠為正常對照組;將16只肥胖模型大鼠隨機分為模型對照組和中藥治療組，每組各8只。除正常對照組投喂普通飼料外，其余2組繼續(xù)投喂高脂飼料和普通飼料。中藥治療組大鼠給予蒼術(shù)山楂顆粒灌胃，灌胃藥液濃度為0.13 g/mL，給藥體積為10 mL/kg；正常對照組和模型對照組大鼠給予等體積的蒸餾水灌胃。每組大鼠連續(xù)灌胃4周。

1.5觀察指標(biāo)及檢測方法1)體質(zhì)量:每周對各組大鼠稱重1次，并記錄數(shù)值。2)血清瘦素及胰島素檢測：灌胃治療4周后，大鼠禁食1夜，次日上午實驗，10%水合氯醛(0.3 mL/100 g)腹腔注射麻醉，頸動脈插管取血約10 mL，把血樣置于離心管中以3 500 r/min離心15 min，取上清液，置-20 ℃冰箱冷凍待用。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測瘦素和胰島素，具體檢驗方法參照ELISA試劑盒。

2結(jié)果

2.1各組大鼠治療前后體質(zhì)量的比較治療前，模型對照組及中藥治療組大鼠體質(zhì)量與正常對照組大鼠相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，提示幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠造模成功。治療后，中藥治療組大鼠的體質(zhì)量明顯低于模型對照組(P<0.01)，提示中藥治療干預(yù)可以顯著降低肥胖大鼠的體質(zhì)量。結(jié)果詳見表1。

表1　各組大鼠治療前后體質(zhì)量的變化 ± s, n=8)

注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01

2.2各組大鼠瘦素及胰島素的比較模型對照組大鼠的血清瘦素及胰島素與正常對照組相比均明顯升高(P<0.01)，提示肥胖大鼠體內(nèi)存在高瘦素血癥及高胰島素血癥；中藥治療干預(yù)后，中藥治療組大鼠的血清瘦素與模型對照組相比有所下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05，而中藥治療組大鼠的血清胰島素與模型對照組相比顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。結(jié)果見表2。

表2　各組大鼠瘦素及胰島素的變化 ± s, n=8)

注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

3討論

中醫(yī)認(rèn)為兒童單純性肥胖癥的發(fā)生與脾胃的關(guān)系最為密切[4]。脾胃功能正常，則脾升胃降，水谷精微得以正常輸布；脾胃功能失調(diào)，則水液運化失常，聚于體內(nèi)成為痰濕脂濁，日久阻礙氣血運行，氣滯血瘀，導(dǎo)致肥胖發(fā)生。因此健運脾胃，化濕逐瘀成為本病的主要治則。著名兒科專家江育仁教授提出了“脾健貴在運而不在補”的學(xué)術(shù)思想，在運脾治療中首重蒼術(shù)。蒼術(shù)有健脾除濕之功效，脾健則水濕得以運化，杜絕了生痰之源；而山楂有健脾消積、行氣散瘀之功效，痰瘀之邪祛，則脾氣得以升清，水谷津液運化正常。蒼術(shù)配合山楂，兩藥相輔相成，共奏運脾化濕逐瘀之功。因此本實驗用蒼術(shù)山楂顆粒灌胃幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠來研究運脾方藥對肥胖相關(guān)指標(biāo)瘦素及胰島素的影響。

瘦素是由脂肪組織分泌的一種蛋白類激素，具有抑制食欲、增加能量消耗及調(diào)控體質(zhì)量的作用[5]。正常情況下，瘦素由脂肪組織分泌之后進入血液循環(huán)，通過與下丘腦中的特異性瘦素受體相結(jié)合而發(fā)揮作用，最終達(dá)到控制體質(zhì)量的目的。大量研究表明，肥胖個體血清瘦素水平不但沒有下降，反而升高，存在著瘦素抵抗，且瘦素水平隨體質(zhì)量及肥胖程度的增加而升高。本研究結(jié)果顯示，模型對照組血清瘦素水平明顯高于正常對照組(P<0.01)，說明肥胖大鼠體內(nèi)的高瘦素水平不能發(fā)揮其應(yīng)有的消脂作用，使體質(zhì)量處于增長狀態(tài)。中藥治療干預(yù)之后，模型對照組大鼠血清瘦素水平與正常對照組大鼠相比有所下降(P<0.05)，說明運脾方藥通過調(diào)節(jié)幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠的瘦素抵抗而達(dá)到減重目的。

胰島素由胰島β細(xì)胞分泌，是參與體內(nèi)三大物質(zhì)能量代謝過程中的一種重要的內(nèi)分泌激素，有促進脂肪合成，抑制脂肪分解的作用。瘦素可以直接或間接地抑制胰島β細(xì)胞合成和分泌胰島素，而胰島素又可以刺激機體脂肪組織分泌瘦素，在瘦素與胰島素之間形成了一個雙向激素調(diào)節(jié)反饋通路，即“脂肪-胰島素”軸[6]。高脂飲食不僅可以誘發(fā)機體肥胖，致使體內(nèi)脂肪堆積，引起血清瘦素分泌增多，產(chǎn)生瘦素抵抗,而且可以導(dǎo)致“脂肪-胰島素”軸功能紊亂，使體內(nèi)血清胰島素升高，產(chǎn)生胰島素抵抗[7]。本研究結(jié)果顯示，模型對照組大鼠血清胰島素水平明顯高于正常對照組(P<0.01)，說明肥胖大鼠體內(nèi)存在瘦素抵抗的同時，亦存在著胰島素抵抗,與以往多數(shù)學(xué)者的觀點相一致[8-10]。中藥治療干預(yù)之后，中藥治療組大鼠血清胰島素與模型對照組相比顯著下降(P<0.01),說明運脾方藥在減重的同時，可以顯著改善胰島素抵抗。而胰島素抵抗是2型糖尿病發(fā)生和進展的驅(qū)動因素[11],本研究結(jié)果也為今后運脾方藥治療肥胖伴2型糖尿病兒童提供了一定的實驗依據(jù)。綜合前期研究及本次實驗研究結(jié)果，我們推斷運脾方藥對幼齡營養(yǎng)性肥胖大鼠的減重作用是通過降低血清瘦素及胰島素水平來實現(xiàn)的。

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