■高映紅 白華毅 王桂瑛 廖國周 普岳紅 何勁松 王 春 程志斌

（1.昆明云嶺廣大種禽飼料有限公司，云南昆明 650200；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)重點實驗室，云南昆明 650201；3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省畜產(chǎn)品加工工程技術(shù)研究中心，云南昆明 650201；4.昆明三正生物科技集團有限公司，云南昆明 650201）

脂肪酶（lipase,EC 3.1.1.3）學(xué)名甘油三酯水解酶，能將甘油三酯水解成脂肪酸、甘油一酯和甘油二酯（Freeman,1976；劉德海等,2012）。上個世紀初，國外科學(xué)家最先發(fā)現(xiàn)與報道了微生物源脂肪酶，隨后脂肪酶被迅速應(yīng)用于油脂化工、造紙、制革、醫(yī)藥、食品等多行業(yè)（彭立鳳,1999；程瑛等,2012）。畜禽飼料中添加微生物源脂肪酶，以期提高飼料中脂肪與能量的利用率、改善畜禽生產(chǎn)性能的報道最早見于20世紀80年代的文獻報道（Polin等,1980；Krogdahl,1985）。然而，早期很多科學(xué)試驗顯示，因試驗設(shè)計以及飼用脂肪酶產(chǎn)品本身質(zhì)量等諸多因素的干擾，脂肪酶沒有明顯改善畜禽生產(chǎn)性能的正效應(yīng)（Polin等，1980；ALMarzooqi等，1999；Preston等，2001）。近年來，國內(nèi)學(xué)術(shù)界與行業(yè)企業(yè)開始關(guān)注脂肪酶在畜禽飼料中的添加效果（李芳林等,2012；馬卿山等,2013；翁曉輝等,2013；葉慧等，2013；李路勝等,2016；王冠穎，2016；王樂等,2016；鄭榮輝等，2016），但他們的試驗數(shù)據(jù)與結(jié)論出現(xiàn)了明顯的矛盾，這就造成脂肪酶的飼用效果至今仍然不清晰，極大限制了脂肪酶制劑產(chǎn)品在飼料工業(yè)及養(yǎng)殖業(yè)中的推廣。

隨著肉雞日糧中油脂添加比例的日益提高（俞偉輝,2015），尤其是為了滿足快大型肉雞高能營養(yǎng)以及降低料肉比的實際生產(chǎn)需求，深度發(fā)掘與改善油脂在肉雞養(yǎng)殖業(yè)中的營養(yǎng)供能效果，進一步提高生長性能，降低養(yǎng)殖成本，是動物營養(yǎng)學(xué)家及飼料企業(yè)配方師的共識（程瑛等,2012；劉德海等,2012；張金等，2016）。隨著飼料工業(yè)與畜禽、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)禁抗的發(fā)展（張文靜等，2016；張曉云等，2016；張金等，2016），筆者依據(jù)肉雞腸道生理發(fā)育以及對油脂的需求，重新審視與研究脂肪酶在無抗肉雞日糧中的飼用價值，為微生物脂肪酶制劑在產(chǎn)業(yè)新形勢下的推廣提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

本試驗選擇1日齡新出生的艾維茵肉雞900只開展試驗。按照初始體重一致的原則將試驗肉雞分成3個處理組，每個處理組10個重復(fù)，每個重復(fù)30只雞。

1.2 試驗日糧

日糧配方參考《雞飼養(yǎng)標準（NY/T 33-2004）》，配制二階段試驗日糧，見表1。處理組1為對照組肉雞，處理組2在處理組1基礎(chǔ)上添加脂肪酶Ⅰ（細菌源脂肪酶），處理組3在處理組1基礎(chǔ)上添加脂肪酶Ⅱ（真菌源脂肪酶）。脂肪酶Ⅰ和脂肪酶Ⅱ由昆明三正生物科技（集團）有限公司提供，酶活力均為20 000 U/g，添加量均為100 g/t全價日糧。所有處理組試驗飼料采用無抗日糧，均不添加任何飼用抗生素及化學(xué)合成抑菌藥物。

為了重新評估飼料禁抗形勢下微生物脂肪酶在肉雞飼料配方中的應(yīng)用潛力，盡量減少腹瀉等腸道疾病對本試驗結(jié)果的可能影響，本試驗結(jié)合了云南省肉雞養(yǎng)殖實際情況，將試驗日糧粗蛋白水平設(shè)置在較低水平。試驗日糧低溫（65℃）制粒。

表1 試驗基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗于2016年9月2日至2016年10月13日，在昆明云嶺廣大種禽飼料有限公司種雞場（昆明）進行。試驗雞飼養(yǎng)在同棟雞舍，使用三層重疊式雞籠飼養(yǎng)，籠外掛食槽和乳頭式飲水器，養(yǎng)殖試驗條件一致。試驗雞按照常規(guī)免疫程序和生產(chǎn)管理進行。

1.4 測定指標

1.4.1 生長性能測定

試驗分3個階段分別測定體重、飼料消耗量數(shù)據(jù)，并計算平均日增重、平均日采食量、飼料轉(zhuǎn)化效率（飼料/增重比）指標，同時統(tǒng)計死亡雞數(shù)量。

1.4.2 飼料養(yǎng)分表觀代謝率

采用Cr2O3指示劑法，測定3個階段（階段1：8～14日齡；階段2：22～28日齡；階段3：36～42日齡）肉雞對飼料主要營養(yǎng)物質(zhì)（粗蛋白、粗脂肪、代謝能）的表觀代謝率。每個階段，預(yù)飼期4 d，正試期采樣測定3 d，具體采樣與測定方法參考樊月圓等（2012）報道。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)以“平均值±標準差”表示，結(jié)果使用SAS統(tǒng)計軟件對處理組間進行多重比較分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼用脂肪酶對肉雞生長性能的影響（見表2）

表2 飼用脂肪酶對肉雞生長性能的影響

42日齡試驗?zāi)w重，處理組1肉雞與處理組2差異不顯著（P＞0.05），顯著低于（P＜0.05）處理組3肉雞。1～14日齡階段1，平均日增重、平均日采食量、料重比等指標，3個處理組之間無顯著差異（P＞0.05）。15～28日齡階段2，處理組3肉雞平均日增重顯著高于處理組1和2（P＜0.05）；處理組1肉雞料重比與處理組2相比差異不顯著（P＞0.05），但顯著高于處理組3肉雞（P＜0.05）。29～42日齡階段3以及試驗全期，處理組3肉雞料重比顯著低于處理組1（P＜0.05）；處理組1肉雞平均日增重與處理組2相比差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于處理組3肉雞（P＜0.05）。此外，試驗全期處理組3肉雞死亡數(shù)量最少。

2.2 飼用脂肪酶對肉雞飼料養(yǎng)分表觀代謝率的影響（見表3）

表3 飼用脂肪酶對肉雞飼料養(yǎng)分表觀代謝率的影響

階段1：肉雞對飼料粗蛋白、粗脂肪、能量的表觀代謝率指標，3個處理組之間統(tǒng)計差異均不顯著（P＞0.05）。階段2：處理組3肉雞對飼料粗脂肪和能量的表觀代謝率顯著高于（P＜0.05）處理組1，且處理組1和2差異不顯著（P＞0.05）。階段3：肉雞對飼料粗蛋白、粗脂肪、能量的表觀代謝率指標，處理組1與2差異不顯著（P＞0.05），但顯著低于（P＜0.05）處理組3。

3 討論

筆者查找了大量國內(nèi)外文獻，發(fā)現(xiàn)影響脂肪酶在畜禽飼料中使用效果的因素很多，主要包括4方面：其一，脂肪酶的菌株、發(fā)酵生產(chǎn)工藝與產(chǎn)品抗逆性。已有試驗報道顯示：真菌源脂肪酶具有顯著提高脂肪利用率、改善畜禽生產(chǎn)性能的作用，而細菌源脂肪酶沒有改善畜禽生產(chǎn)性能的顯著正效應(yīng)（劉德海等,2012；葉慧等,2013；李路勝等,2016）。這可能與不同微生物菌株生產(chǎn)的脂肪酶結(jié)構(gòu)、活性作用位點、產(chǎn)品的耐熱性、過胃能力及抗消化道酶解能力等因素有關(guān)（劉德海等,2012；葉慧等,2013）。其二，添加的畜禽生長階段。畜禽生長階段不同，消化道內(nèi)源脂肪酶活性有較大差異，必然影響到補充外源脂肪酶的作用效果（于旭華等,2001；張鐵鷹等,2005；馬卿山等,2013）。其三，基礎(chǔ)日糧配方?；A(chǔ)日糧選用的大料原料與營養(yǎng)水平設(shè)定的差異，顯著影響畜禽消化道內(nèi)源脂肪酶活性，因而也會影響外源脂肪酶的添加量與作用效果（于旭華等,2001；馬卿山等,2013）。其四，飼用抗生素。抗生素會改變畜禽消化道生理生化環(huán)境，包括內(nèi)源脂肪酶的分泌，進而影響外源脂肪酶的作用效果（Tan等,2000；李美娣等,2014）。

本試驗從以上4大類因素出發(fā)，前瞻性地著眼于飼料工業(yè)與畜禽養(yǎng)殖業(yè)禁抗的必然趨勢，重新審視微生物源脂肪酶在無抗肉雞日糧中的飼用價值。因此，本試驗的設(shè)計盡量考慮排除可能的干擾因素，包括：①針對微生物脂肪酶發(fā)酵菌種的差異，總體對比研究細菌源脂肪酶Ⅰ（處理組2）與真菌源脂肪酶Ⅱ（處理組3）在肉雞日糧中的使用效果；②在無抗生素添加試驗肉雞日糧的前提下，盡量減少肉雞對日糧高營養(yǎng)消化不良的風(fēng)險，將試驗飼料的粗蛋白水平設(shè)置在較低水平，但能量水平按標準設(shè)定；③采用“玉米-豆粕-油脂”型簡單日糧配方技術(shù)，盡量減少大料原料品種與質(zhì)量對本次試驗結(jié)果的影響。據(jù)此，兩個階段試驗配方中大豆油實際添加量（1～21日齡30.4 kg/t；22～42日齡45.0 kg/t）相對現(xiàn)有文獻報道偏高（翁曉輝等,2013；龔俊勇等,2015），但與實際飼料企業(yè)配方相近。

兩類微生物源脂肪酶對肉雞生產(chǎn)性能的影響見表2，總體而言：脂肪酶Ⅱ組（真菌源脂肪酶）肉雞試驗?zāi)w重（42日齡）高于處理組1（對照組）（P＜0.05）和脂肪酶Ⅰ組（細菌源脂肪酶）肉雞，由于3個生長階段的3個處理組之間肉雞采食量總體差異均不顯著，因此添加真菌源脂肪酶的肉雞料重比指標，顯著小于對照組和脂肪酶Ⅰ組；且以上這些統(tǒng)計差異的趨勢均是從肉雞14日齡開始。這些數(shù)據(jù)表明：其一，日糧添加真菌源脂肪酶顯示了改善肉雞生產(chǎn)性能的正效果，相反細菌源脂肪酶沒有顯著的正效應(yīng)。本次試驗結(jié)果與葉慧等（2013）和李路勝等（2016）的報道一致。細菌源脂肪酶最適pH值主要集中在中性、堿性范圍，真菌源脂肪酶最適pH值為4～10，范圍較廣，且最適酶反應(yīng)溫度較低（彭立鳳,1999；劉德海等,2012）。參考雛雞胃腸道pH值及溫度等理化特性（Nir等,1993；于旭華等,2001；張鐵鷹等,2005），顯然與細菌源脂肪酶相比，真菌源脂肪酶更能滿足雛雞胃腸道消化需要。其二，本試驗條件下，肉雞全價配合飼料中添加100 g真菌源脂肪酶（20 000 U/g），顯著改善了快大型艾維茵肉雞中后期飼養(yǎng)階段（15～42日齡）的平均日增重與飼料轉(zhuǎn)化效率。我們的試驗結(jié)果與Tan等（2000）、李芳林等（2012）以及翁曉輝等（2013）的報道基本相符。然而，馬卿山等（2013）試驗研究顯示：除了飼料轉(zhuǎn)化效率指標外，在正常日糧水平下，沒有發(fā)現(xiàn)飼用脂肪酶對肉雞生產(chǎn)性能的顯著改善效應(yīng)。我們對比了本次試驗與馬卿山等（2013）的報道，推測這可能與兩個試驗基礎(chǔ)日糧的大料原料選用、日糧營養(yǎng)水平設(shè)置、油脂添加比例的明顯差異有關(guān)。本次試驗從日糧設(shè)計方面盡可能的排除了雜粕雜糧型日糧、粗蛋白水平設(shè)置過高以及抗生素添加等因素的干擾。

為了驗證生產(chǎn)性能數(shù)據(jù)，本試驗進一步分析測定了肉雞對飼料主要營養(yǎng)的表觀代謝率（表3），結(jié)果顯示：1～14日齡階段（階段1）3個處理組肉雞對飼料粗蛋白、粗脂肪、能量的表觀代謝率差異均不顯著。這與表2生長性能的結(jié)果完全相符。隨后15～42日齡，添加真菌源脂肪酶的肉雞對飼料粗脂肪和能量的表觀代謝率顯著大于對照組和細菌源脂肪酶組。這一結(jié)果結(jié)合表2數(shù)據(jù)充分證明：在無抗日糧條件下，真菌源脂肪酶改善快大型肉雞生產(chǎn)性能，是因為提高了肉雞中后期飼養(yǎng)階段（15～42日齡階段）對飼料粗脂肪及能量的利用率。國內(nèi)外大量試驗研究表明（Krogdahl，1985；Nir等，1993；Tan等，2000；于旭華等，2001；張鐵鷹等，2005）：小雞出生腸道就具備較高的脂肪酶活性，并在1～14日齡飼養(yǎng)前期階段持續(xù)升高，至14日齡達到峰值；隨后，15～42日齡飼養(yǎng)中后期階段，腸道食糜中的脂肪酶活性呈現(xiàn)急劇下降的趨勢，甚至低于出生時候的脂肪酶活性。據(jù)此我們推測：對于腸道脂肪酶活性較高、且處于上升趨勢的飼養(yǎng)前期肉雞，日糧外源添加脂肪酶無法發(fā)揮水解飼料油脂、進一步改善肉雞生產(chǎn)性能的統(tǒng)計學(xué)優(yōu)勢；相反，由于肉雞飼養(yǎng)中后期階段的腸道脂肪酶急劇下降，且這一階段日糧配方含有高比例的油脂，則通過添加適量的真菌源脂肪酶，能夠補充腸道內(nèi)源脂肪酶的相對不足，提高肉雞對飼料脂肪與能量的利用效率，從而改善中后期乃至整個飼養(yǎng)周期肉雞的生產(chǎn)性能。尤其在飼喂無抗生素添加的肉雞日糧條件下，補充真菌源脂肪酶的正效應(yīng)更顯著。

此外，本次試驗設(shè)計的肉雞基礎(chǔ)日糧大豆油添加量1～21日齡階段約3.0%、22～42日齡為4.5%，對比現(xiàn)有文獻報道（翁曉輝等,2013；龔俊勇等,2015）的試驗日糧基礎(chǔ)配方，我們設(shè)計的油脂添加量水平偏高。在沒有添加任何抗生素和化學(xué)合成抑菌藥物的條件下，與對照組和細菌源脂肪酶組相比，真菌源脂肪酶組肉雞的死亡數(shù)量最少，且死亡率在合理、可控的范圍內(nèi)（表2）。這一結(jié)果表明：在肉雞日糧油脂添加比例較高（＞3%）的情況下，真菌源脂肪酶有效提高了日糧脂肪利用率，從而減少脂肪營養(yǎng)消化不良對腸道的潛在危害，進而改善肉雞生產(chǎn)性能（李美娣等,2014）。

4 結(jié)論

總結(jié)以上試驗數(shù)據(jù)與分析表明，在無抗、簡單、高油脂添加的日糧配方類型條件下，選擇添加真菌源脂肪酶能夠改善快大型肉雞的生產(chǎn)性能，尤其是在14日齡之后效果更顯著。相反，細菌源脂肪酶沒有獲得明顯的生產(chǎn)性能改善效應(yīng)。試驗結(jié)果提示：在禁抗呼聲日益高漲的今天，針對肉雞腸道生理發(fā)育特點與飼料配方類型，真菌源脂肪酶是肉雞無抗飼料配方的可選飼料添加劑之一。