■ 申 杰 趙 娜 魏金濤 潘愛鑾 楊國軍 王海寧 湯 洪

（1湖北省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，湖北武漢 430064；2動物胚胎工程及分子育種湖北重點實驗室，湖北武漢 430064；3湖北綠天地生物科技有限公司，湖北武漢 431600；4襄陽盛鋒農(nóng)牧有限公司，湖北襄陽 441000）

國內(nèi)外大量研究表明，益生菌能有效調(diào)節(jié)畜禽胃腸菌群平衡，改善胃腸的微生態(tài)環(huán)境，使畜禽始終保持健康的體質(zhì)，提高成活率；非病原性和無毒性的活體微生物制成微生態(tài)制劑，不產(chǎn)生抗藥性，對家禽消化道細菌性疾病有顯著的防治作用，益生菌取代飼料中的抗生素是可行的。

在禽類養(yǎng)殖中，添加乳酸菌類飼料添加劑可達到抵御致病菌侵襲的效果，提高苗種的成活率，并促進動物生長。腸球菌屬于乳酸菌，是腸道的正常棲居菌，包括糞鏈球菌（糞腸球菌）、屎腸球菌等。腸球菌是農(nóng)業(yè)部允許使用的飼料級微生物飼料添加劑菌種。腸球菌在生長和代謝過程中產(chǎn)生對養(yǎng)殖動物有益的營養(yǎng)物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)動物腸道微生態(tài)菌群平衡，治療腹瀉、提高免疫力等功效；腸球菌用作飼料添加劑，可增加飼料的風味，提高動物的食欲。

本研究的目的是通過向飲水中添加糞鏈球菌、屎腸球菌復合微生態(tài)制劑，研究其對肉雞生長性能、臟器指數(shù)、腸道微生態(tài)環(huán)境的影響，為復合益生菌在肉雞生產(chǎn)中的科學應用提供參考依據(jù)。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料與場地

復合微生態(tài)制劑（商品名停藥寶），含活菌數(shù)量糞鏈球菌4×1010cfu/g和屎腸球菌4×109cfu/g，由湖北綠天地生物科技有限公司提供。

試驗在襄陽盛鋒農(nóng)牧有限公司肉雞養(yǎng)殖場進行。

1.2 試驗動物與設(shè)計

試驗采用完全隨機的單因子設(shè)計，將健康的1日齡10 000只AV500肉仔雞平均分成2組，每組5個重復，每個重復1 000只雞。試驗組飲水中加入35 mg/kg復合微生態(tài)制劑；對照組飲用普通飲水。飲水質(zhì)量符合NY5027-2008規(guī)定。兩組動物所飼喂飼料均不含抗生素。試驗分為1～21日糧和22～42日齡兩個階段進行。

1.3 飼養(yǎng)管理

雞舍采用紅外燈加溫，第1～2 d室溫34℃，第3～7 d為32℃，第8～14 d為30℃，第14～20 d 27℃，此后調(diào)節(jié)雞舍溫度為22℃；1～7 d相對濕度保持70%，第8～20 d 60%，此后正常濕度55%左右。光照強度30 lux。試驗期間動物自由飲水、自由采食。各試驗組飼喂商品顆粒飼料。按照常規(guī)程序進行消毒、免疫。試驗動物采用網(wǎng)上平養(yǎng)，每天用刮糞板除糞1次。

1.4 樣品采集與制備

試驗進行到第21 d和第42 d，雞只禁食12 h后，每個重復組分別隨機抽取試驗雞20只，頸靜脈放血處死后脫毛處理，稱重，計算屠宰率；剝離脾臟、胸腺、法氏囊、腸道等器官并稱重。將接有頸靜脈血的離心管靜止10 min后3 000 r/min離心，取血清放于4℃冰箱待測生化指標。在無菌狀態(tài)下取盲腸、回腸內(nèi)容物迅速放于滅菌凍存管中，液氮罐中保存用于檢測腸道菌群數(shù)量。

1.5 檢測指標及方法

1.5.1 生長性能及臟器指數(shù)的測定

入試當天及試驗結(jié)束時以重復組為單位稱量仔雞始重、末重（稱重前12 h禁食，自由飲水）。每天記錄喂料量，淘汰及病死雞只情況。計算平均日增重、平均日采食量和料重比。

臟器指數(shù)：由臟器與屠體重相除計算免疫臟器指數(shù)，包括脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)、腸道指數(shù)等。

1.5.2 血清生化指標的測定

血清生化指標的測定采用羅氏MODULP800全自動生化分析儀測定。

1.5.3 腸道微生物數(shù)量的測定

采用實時熒光定量PCR方法檢測腸道內(nèi)容物中的腸球菌和大腸桿菌數(shù)。引物序列設(shè)計及參數(shù)見表1，引物由上海生工生物工程有限公司合成。按照北京天根基因組DNA提取試劑盒說明書提取腸內(nèi)容物DNA，通過將含有目的DNA片段的瓊脂糖凝膠進行回收，純化分別獲得腸球菌和大腸桿菌的標準品，然后將細菌的標準品進行實時熒光定量PCR反應，以不同標準品的拷貝數(shù)的對數(shù)值為橫坐標，以實時熒光定量PCR反應過程中出現(xiàn)熒光信號的初始循環(huán)數(shù)（Ct）為縱坐標繪制標準曲線。同時，將待測樣品進行實時熒光定量PCR反應得到樣品的Ct值，并將其和標準曲線進行比較，獲得各個樣品中細菌數(shù)量。

表1 引物序列及參數(shù)

1.6 數(shù)據(jù)處理

SPSS 16.0軟件對數(shù)據(jù)處理，并進行t檢驗，結(jié)果以“平均數(shù)±標準誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復合微生態(tài)制劑對肉仔雞生產(chǎn)性能的影響

1～21日齡、22～42日齡死淘率比對照組降低53.33%和61.49%(P＜0.05)，兩組間平均日增重、平均日采食量、屠宰率、料重比差異不顯著(P＞0.05)，但是試驗組均有優(yōu)于對照組的趨勢。

2.2 復合微生態(tài)制劑對肉仔雞臟器指數(shù)的影響

表2 肉仔雞生產(chǎn)性能

表3 肉仔雞臟器指數(shù)（%）

由表3可見，21日齡肉仔雞試驗組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)均顯著高于對照組(P＜0.05)，分別提高16.7%、44.4%、28.6%(P＜0.05)；42日齡肉仔雞試驗組脾臟指數(shù)高于對照組33.3%(P＜0.05)，胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)與對照組相比差異不顯著(P＞0.05)。21日齡和42日齡試驗組和對照組腸道指數(shù)差異不顯著(P＞0.05)，腸道指數(shù)這一指標未能反映出腸球菌對腸道發(fā)育的影響。

2.3 復合微生態(tài)制劑對肉仔雞血清生化指標的影響

由表4可見，21日齡試驗組和對照組肉仔雞血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白含量差異不顯著(P＞0.05)，42日齡試驗組總蛋白、白蛋白、球蛋白含量均高于對照組（P＜0.05）；說明腸球菌復合微生態(tài)制劑提高了42日齡肉仔雞的免疫力。

表4 肉仔雞血清生化指標

試驗期間，試驗組和對照組肉仔雞血清中的甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇含量差異不顯著(P＞0.05)，說明腸球菌對肉仔雞的脂肪代謝沒有產(chǎn)生影響。

2.4 復合微生態(tài)制劑對肉仔雞腸道菌群的影響

表5 肉仔雞腸道細菌數(shù)量（lgcfu/g）

由表5可見，21日齡和42日齡試驗組肉仔雞盲腸、回腸腸道內(nèi)腸球菌的數(shù)量均顯著高于對照組(P＜0.05)，這說明腸球菌在雞盲腸和回腸定植效果較好。21日齡和42日齡試驗組和對照組肉仔雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量差異不顯著(P＞0.05)，試驗組回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量均低于對照組(P＜0.05)；比較試驗組盲腸和回腸內(nèi)細菌數(shù)量發(fā)現(xiàn)腸球菌已經(jīng)成為優(yōu)勢菌群。

3 討論

國內(nèi)外均報道日糧添加益生菌可以提高肉雞生產(chǎn)性能和飼料轉(zhuǎn)化率。腸球菌為動物胃腸道內(nèi)常駐菌，可提高幼雛的日增重，改善飼料報酬減少腹瀉及死亡率，王紅利報道日糧添加糞腸球菌顯著地提高了ADG，并顯著改善了FCR。也有報道飲水中添加屎腸球菌對肉雞飲水量和采食量沒有負面影響。但本研究結(jié)果顯示飲水中添加腸球菌對肉仔雞平均日增重、平均日采食量、屠宰率、料重比影響不大，但是大大降低了死淘率。

有益菌在腸道內(nèi)大量繁殖，并不斷合成有益物質(zhì)，可作為抗原物質(zhì)促進免疫器官的發(fā)育。胸腺、法氏囊和脾臟是禽類最重要的免疫器官，參與全身的細胞免疫和體液免疫。胸腺、法氏囊、脾臟的重量可用于評價雞的免疫狀況，免疫器官的相對重量增加，說明機體的免疫機能增強。糞鏈球菌能夠促進肉雞胸腺、脾臟和法氏囊的發(fā)育。微生態(tài)制劑組肉雞的法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)均高于對照組，表明其中樞及外周免疫器官比較發(fā)達，參與免疫應答的作用強。本試驗中21日齡肉仔雞試驗組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)均顯著高于對照組，42日齡肉仔雞試驗組脾臟指數(shù)高于對照組。本試驗中42日齡試驗組總蛋白、白蛋白、球蛋白含量均高于對照組；再結(jié)合死淘率情況來看，飲水中添加腸球菌增強了雞只的抗病力。

Capcarova等研究表明，日糧中添加屎腸球菌對肉雞血清甘油三酯和總膽固醇無影響。這與本試驗結(jié)果一致，說明腸球菌對肉仔雞的脂肪代謝沒有產(chǎn)生影響。

健康動物機體胃腸道是微生態(tài)平衡環(huán)境，其中的有益菌為屎腸球菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌、糞腸球菌等。動物腸道內(nèi)的正常菌群具有防止致病性抗原入侵，維持腸道屏障的功能。腸球菌在既可以改善畜禽生產(chǎn)性能，還促進胃腸道菌群平衡和腸道發(fā)育，增強免疫機能。研究表明，日糧中添加屎腸球菌顯著降低肉雞回腸和盲腸中大腸桿菌數(shù)量。大腸桿菌感染是畜禽產(chǎn)生疾病的主要原因。消化道有益菌群通過競爭排斥作用而減少大腸桿菌在腸道中的數(shù)量。屎腸球菌在腸道內(nèi)代謝可以產(chǎn)生有機酸、過氧化氫、細菌素等物質(zhì)，抑制大腸桿菌等病原菌，減少動物病害的發(fā)生。

本試驗發(fā)現(xiàn)，21日齡和42日齡試驗組肉仔雞盲腸、回腸腸道內(nèi)腸球菌的數(shù)量均顯著高于對照組，試驗組回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量均低于對照組，腸球菌已經(jīng)成為盲腸和回腸內(nèi)的優(yōu)勢菌群。這與多篇文獻報道相一致，說明飲水中添加腸球菌也可以達到較好的效果。

4 結(jié)論

飲水中添加腸球菌復合微生態(tài)制劑可以促進肉仔雞的生長發(fā)育，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，提高機體免疫力，降低死淘率。