摘要：為了研究益生菌對南美白對蝦生長和免疫力的影響，采用含不同嗜酸乳酸桿菌濃度的餌料對南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）同時(shí)飼養(yǎng)進(jìn)行試驗(yàn)，分成4組（對照組，濃度為0.5%、1.0%、1.5%的試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組）。結(jié)果表明，隨著餌料中嗜酸乳酸桿菌濃度增加，增重率和特定生長率也增加，試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組均顯著高于對照組和試驗(yàn)1組（P<0.05），試驗(yàn)組的餌料系數(shù)顯著降低（P<0.05），而成活率顯著升高（P<0.05）。免疫指標(biāo)也呈現(xiàn)類似變化，試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組的AKP、ACP、PO活性都顯著高于試驗(yàn)1組和對照組（P<0.05），POD活性各試驗(yàn)組間則差異不顯著（P>0.05），但都顯著高于對照組（P<0.05）。因此，添加一定濃度嗜酸乳酸桿菌能有效提高南美白對蝦的生長指標(biāo)和免疫指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）；嗜酸乳酸桿菌；生長性能；免疫

中圖分類號：S968.22 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號：0439-8114（2016）02-0437-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.02.044

南美白對蝦（Litopenaeus vannamei）又名凡納濱對蝦、萬氏對蝦、白對蝦，原產(chǎn)于太平洋西海岸至墨西哥灣中部，具有生長快、抗應(yīng)激能力強(qiáng)、肉味鮮美，易進(jìn)行集約化養(yǎng)殖等優(yōu)點(diǎn)[1]。隨著規(guī)?；B(yǎng)殖，一方面養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)的大量應(yīng)激因素（如營養(yǎng)、擁擠、環(huán)境變化等），導(dǎo)致蝦體代謝紊亂、抗病力下降[2，3]；另一方面病害流行日趨嚴(yán)重，例如細(xì)菌[4，5]、病毒[6，7]和寄生蟲[8]等，給對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。因此，由于健康養(yǎng)殖的需要，人們加大了綠色、環(huán)保藥物和添加劑的研發(fā)力度，添加劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用日趨廣泛[9]。益生菌是一類可以促進(jìn)健康的活體微生物制劑。作為抗生素替代品，近年來得到快速發(fā)展，益生菌的主要作用是防治消化道疾病、促進(jìn)吸收和刺激免疫系統(tǒng)等方面[10-12]。魚類消化道定植乳酸菌后，可抵抗革蘭氏陰性致病菌，增強(qiáng)機(jī)體抗感染力，還能促進(jìn)腸黏膜的免疫調(diào)節(jié)活性，促進(jìn)生長，提高抗病力[13]。石軍等[14]指出乳酸菌能夠分泌細(xì)菌素、H2O2、有機(jī)酸等物質(zhì)，降低消化道pH，從而抑制腸道有害微生物生長及繁殖，這與Ring等[15]和Lewus等[16]得出的結(jié)論相似。華雪銘等[17]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在暗紋東方鲀幼魚飼料中添加殼聚糖和益生菌，能使腸道淀粉酶活性顯著增強(qiáng)，促進(jìn)暗紋東方鲀生長；高進(jìn)[18]在15日齡大黃魚稚魚基礎(chǔ)飼料中分別添加不同梯度的益生菌和益生元（酵母細(xì)胞壁多糖），進(jìn)行為期30 d的攝食生長試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)顯著提高了大黃魚稚魚的存活能力和抗脅迫能力；溫俊[19]選用健康牙鲆為試驗(yàn)對象，探討了飼料中添加不同水平微生態(tài)制劑對牙鲆生長、免疫和抗病力的影響，促進(jìn)牙鲆生長、提高非特異性免疫力和抗病力。而蝦類基礎(chǔ)餌料中添加益生菌研究較少，本研究通過添加不同濃度益生菌制劑的餌料喂養(yǎng)南美白對蝦，對南美白對蝦生長、免疫力及抗病性的影響，為生產(chǎn)實(shí)際中合理使用益生菌喂養(yǎng)南美白對蝦提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

將大小、體重均勻的南美白對蝦饑餓處理1 d后分別等量隨機(jī)放養(yǎng)到編號為對照組、試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組，每組3個(gè)重復(fù)，分別投喂0.5%、1.0%、1.5%的3個(gè)不同濃度的嗜酸乳酸桿菌（活菌數(shù)達(dá)到1010 CFU/g上）餌料，飼養(yǎng)20 d。每2 d換水1次，以水渾濁程度適當(dāng)調(diào)整換水頻率。池水為已曝氣的自來水，添加適量的海鹽。每天分別在9：30和17：30投喂飼料，投放量為蝦體重的10%～15%，根據(jù)攝食量適當(dāng)調(diào)節(jié)，觀察并測定對蝦的生長及免疫指標(biāo)。

1.2 試驗(yàn)方法

在養(yǎng)殖結(jié)束后，在各組剩余蝦中隨機(jī)取3只，稱重計(jì)算生長指標(biāo)；存活率則從養(yǎng)殖開始到結(jié)束期間計(jì)算；每隔5 d測定1次免疫指標(biāo)，每次測定均隨機(jī)取樣。樣本采集具體操作為：取一尾蝦，去頭去皮，用剪刀先初步剪碎后研磨成勻漿狀態(tài)，將勻漿倒入刻度離心管中，加生理鹽水到3 mL，2 000 r/min離心10 min后迅速將離心管置于低溫環(huán)境中以保持酶活性，取上清液保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 指標(biāo)測定

試驗(yàn)前的體重定義為初體重，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)定義為末體重，養(yǎng)殖20 d后，測定南美白對蝦生長性能指標(biāo)。酚氧化酶（PO）活性的測定參照Ashida等[20]方法進(jìn)行；酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）活性的測定采用磷酸苯二鈉法[21]；過氧化物酶（POD）活性的測定采用愈創(chuàng)木酚法測定[22]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，采用單因子方差分析，如果差異顯著（P<0.05），再以Duncan法進(jìn)行多重比較。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦生長指標(biāo)的影響

不同嗜酸乳酸桿菌濃度對南美白對蝦生長的影響參見表1。由表1可知，與對照組相比，試驗(yàn)組的餌料系數(shù)顯著降低（P<0.05），但各試驗(yàn)組間沒有顯著性差異（P>0.05），成活率則剛好相反，試驗(yàn)組均顯著高于對照組（P<0.05）。增重率和特定生長率變化情況類似，隨著餌料中嗜酸乳酸桿菌濃度增加而增加，試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組均顯著高于對照組（P<0.05），而試驗(yàn)1組和對照組差異不顯著（P>0.05）。這說明在基礎(chǔ)餌料中添加嗜酸乳酸桿菌，能夠顯著提高南美白對蝦生長指標(biāo)。

2.2 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦AKP活性的影響

由圖1可以看出，從養(yǎng)殖第5天開始，添加嗜酸乳酸桿菌的試驗(yàn)組中的AKP活性已經(jīng)和對照組對存在顯著性差異（P<0.05），且隨著嗜酸乳酸桿菌含量增加，AKP活性升高明顯，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組活性顯著高于試驗(yàn)1組（P<0.05）；隨后從第10天到第20天，對照組AKP活性增長緩慢，而添加嗜酸乳酸桿菌的試驗(yàn)組活性升高明顯，試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組從試驗(yàn)開始到結(jié)束期間均與試驗(yàn)1組有顯著差異（P<0.05）。

2.3 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦ACP活性的影響

嗜酸乳酸桿菌影響南美白對蝦ACP活性的影響見圖2。由圖2可以看出，養(yǎng)殖第5天開始，添加嗜酸乳酸桿菌的試驗(yàn)組ACP活性已經(jīng)顯著高于對照組（P<0.05），試驗(yàn)3組活性最高，顯著高于其他試驗(yàn)組（P<0.05）。第15天時(shí)，試驗(yàn)2組ACP活性增加明顯，達(dá)到最大。

2.4 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦PO活性的影響

如圖3所示，嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦PO活力影響顯著，從第5天開始，試驗(yàn)組PO活性就顯著高于對照組（P<0.05），但試驗(yàn)組之間無顯著差異（P>0.05）。隨著喂養(yǎng)飼料的天數(shù)增加，投喂高含量嗜酸乳酸桿菌餌料的試驗(yàn)組PO活性增加明顯，其中試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組顯著高于試驗(yàn)1組（P<0.05），且試驗(yàn)組均顯著高于對照組（P<0.05）。

2.5 嗜酸乳酸桿菌對南美白對蝦POD活性的影響

如圖4所示，嗜酸乳酸桿菌能在一定程度上影響南美白對蝦POD活性，投喂嗜酸乳酸桿菌餌料初期，南美白對蝦POD活性增加不明顯，試驗(yàn)組和對照組間無顯著差異（P<0.05）。隨著時(shí)間的延長，試驗(yàn)組POD活性增加速度高于對照組，到第10天時(shí)，高嗜酸乳酸桿菌含量試驗(yàn)組顯著高于對照組（P<0.05），到第15天后，所有試驗(yàn)組POD活性都顯著高于對照組（P<0.05）。

3 小結(jié)與討論

從Kozasa[23]首次將益生菌應(yīng)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖中，此后這種綠色的添加劑迅速發(fā)展。研究報(bào)道和生產(chǎn)實(shí)踐證明，益生菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖中傳統(tǒng)化學(xué)藥物的良好替代選擇。目前益生菌應(yīng)用已經(jīng)十分普遍，能有效提高養(yǎng)殖對象的生長性能，能直接影響動(dòng)物腸道代謝作用。益生菌的作用機(jī)制之一就是通過與腸道內(nèi)的病原菌爭奪附著位點(diǎn)和營養(yǎng)成分，在腸道內(nèi)達(dá)到一定數(shù)量成為優(yōu)勢菌，通過影響腸道微生態(tài)而起作用。芽孢桿菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的使用可以增加養(yǎng)殖水體和養(yǎng)殖動(dòng)物腸道中芽孢桿菌的比例，通過營養(yǎng)和空間的競爭或者抗生素的產(chǎn)生抑制其他細(xì)菌尤其是有害菌的生長，從而提高養(yǎng)殖動(dòng)物的成活率[24]。本研究中與對照組相比，試驗(yàn)組中的南美白對蝦其相對增重率、特定生長率和成活率均有明顯改善（P<0.05），說明嗜酸乳酸桿菌能夠促進(jìn)對蝦養(yǎng)分的吸收，穩(wěn)定內(nèi)環(huán)境，能夠拮抗魚類致病菌。通過分泌有機(jī)酸、過氧化氫、二氧化碳、丁二酮等抑制有害菌的入侵，糾正腸道菌群失調(diào)，塑造健康的生態(tài)環(huán)境[25]。因此，喂食含有嗜酸乳酸桿菌的飼料試驗(yàn)組比喂食不含嗜酸乳酸桿菌的對照組，其生長指標(biāo)得到大大提升。益生菌可以通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能來提高抗病能力，增強(qiáng)抗病毒能力[26]。蝦體內(nèi)水解酶具有破壞和消除侵入體內(nèi)異物的功能[27]，對機(jī)體免疫起重要作用，其中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶是比較重要的水解酶，是反映對蝦免疫能力的重要指標(biāo)，在對蝦防御反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。而對蝦類的酚氧化酶系統(tǒng)與高等動(dòng)物的補(bǔ)體系統(tǒng)存在很大的相似性，是一種酶級聯(lián)系統(tǒng)[28]，主要是由絲氨酸蛋白酶和其他因子組成，在蝦類非特異性免疫當(dāng)中起關(guān)鍵作用。在試驗(yàn)周期內(nèi)，試驗(yàn)組的酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、酚氧化酶等均顯著高于對照組，說明嗜酸乳酸桿菌在養(yǎng)殖過程的應(yīng)用，能夠在一定程度上改善養(yǎng)殖魚的水環(huán)境或腸道內(nèi)微生物平衡，通過激發(fā)機(jī)體的體液免疫來增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能，其作用機(jī)理可能是通過細(xì)菌本身或細(xì)胞壁成分刺激非特異性免疫系統(tǒng)使其發(fā)揮作用，從而可以作為良好的免疫增強(qiáng)劑提高動(dòng)物免疫力[29]。

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