摘要：為了考察姜黃浸膏散對CCl4所致的小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用，采用不同劑量姜黃浸膏散（50、100、200 mg/kg）口灌給藥小鼠一周，隨后腹腔注射0.12% CCl4攻毒，觀察小鼠血清中AST、ALT以及肝組織勻漿中SOD、CAT、GSH-Px和MDA的變化情況。結(jié)果顯示，姜黃浸膏散能夠顯著降低CCl4所致肝損傷小鼠血清ALT、AST值（P<0.01或P<0.05），降低肝勻漿中MDA含量，增加SOD、CAT、GSH-Px活性，明顯改善肝組織的病理變化。表明姜黃浸膏散對CCl4所致的小鼠急性肝損傷具有顯著的保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：姜黃浸膏散；CCl4；肝損傷；小鼠

中圖分類號：S948；R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）02-0425-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.02.040

姜黃（Curcuma longa L.）是姜科姜黃屬多年生草本植物，粉末可作藥用。其主要成分為姜黃素，經(jīng)研究表明具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗微生物、清除自由基、抗突變、保肝等多方面藥理作用[1，2]。在肝臟疾病研究方面發(fā)現(xiàn)姜黃素可以通過抗炎、抗氧化、抗纖維化、抗肝癌等作用來發(fā)揮保肝護(hù)肝作用[3]。本試驗(yàn)以小鼠CCl4肝損傷模型為基礎(chǔ)，考察姜黃浸膏散對CCl4引起的小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用，為姜黃浸膏散在水產(chǎn)養(yǎng)殖中制劑化應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

雄性昆明小鼠，體重（20±2）g，購自湖北省疾病預(yù)防控制中心。

聯(lián)苯雙酯購自藥店；姜黃浸膏散為實(shí)驗(yàn)室自制；谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗(yàn)分組及給藥[4]

試驗(yàn)鼠被隨機(jī)分為6組，即正常對照組、損傷組、陽性對照組（聯(lián)苯酸酯，200 mg/kg）、3個給藥組（按姜黃素計(jì)，劑量分別為50、100、200 mg/kg），每組10只小鼠，采取口灌給藥（10 mL/kg），姜黃素、聯(lián)苯雙酯均溶于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液中，正常對照組和損傷組口灌生理鹽水。給藥10 d后除正常對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射0.12% CCl4-橄欖油溶液（10 mL/kg），禁食不禁水。

1.3 樣品制備及指標(biāo)測定觀察

腹腔注射24 h后，小鼠摘除眼球取血，放置析出血清后，4 000 r/min 離心10 min，收集血清置于 -20 ℃保存待測。將小鼠拉頸脫臼處死，取出肝臟，在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗，除去血液并用濾紙拭干，取0.2 g加入9倍預(yù)冷生理鹽水進(jìn)行勻漿，制備10%肝組織勻漿，然后以4 000 r/min 離心10 min，收集上清液，置于-20 ℃保存待測。血清ALT、AST活性、組織中SOD、CAT、GSH-Px活性及MDA含量均采用相應(yīng)的試劑盒檢測。

另取小塊肝臟用10%中性甲醛固定，經(jīng)洗滌、脫水、透明、滲透和包埋后，切成厚度為5 μm的薄片，HE染色，再經(jīng)脫水和透明后用中性樹膠封片，光鏡下觀察組織學(xué)特征。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均采用x±s表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析和LSD多重比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 姜黃浸膏散對急性肝損傷小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

由表1可見，CCl4攻毒后，損傷組小鼠血清中AST、ALT活性較正常對照組均極顯著升高（P<0.01）；陽性對照組及姜黃浸膏散不同劑量組小鼠血清中AST、ALT活性均極顯著低于損傷組（P<0.01），姜黃浸膏散高劑量組（200 mg/kg）同陽性對照組間差異不顯著（P >0.05）。表明姜黃浸膏散能夠降低CCl4引起的小鼠血清中轉(zhuǎn)氨酶活性的升高，并呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系。

2.2 姜黃浸膏散對急性肝損傷小鼠肝組織中SOD、CAT、GSH-Px活性、MDA含量的影響

由表2可見，CCl4攻毒后，損傷組小鼠肝組織中SOD、CAT及GSH-Px活性較正常對照組均極顯著降低（P<0.01），MDA含量極顯著升高（P<0.01）；陽性對照組及姜黃浸膏散不同劑量組小鼠肝組織中SOD、CAT及GSH-Px活性均顯著高于損傷組（P<0.05或P<0.01），MDA含量顯著低于損傷組（P<0.05或P<0.01），姜黃浸膏散高劑量組（200 mg/kg）同陽性對照組間差異不顯著（P >0.05）。表明姜黃浸膏散能夠有效緩解CCl4所致的小鼠肝組織SOD、CAT、GSH-Px活性降低及MDA含量升高。

2.3 姜黃浸膏散對急性肝損傷小鼠肝組織病理學(xué)影響

正常對照組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，染色均勻，無細(xì)胞腫大及脂肪變性（圖1A）。損傷組小鼠部分肝細(xì)胞出現(xiàn)水腫，細(xì)胞體積增大，胞質(zhì)水分含量增多，呈現(xiàn)透明、淡染的現(xiàn)象；部分肝細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性（圖1B）。陽性對照組和姜黃浸膏散不同劑量組小鼠僅少數(shù)肝細(xì)胞出現(xiàn)水腫及脂肪變性（圖1C-F）。

3 討論

小鼠CCl4急性肝損傷模型在形態(tài)學(xué)及病理學(xué)方面均與人類肝損傷極為相似，是經(jīng)典的篩選和研究肝炎治療藥物的病理模型[5]。CCl4在肝內(nèi)經(jīng)微粒體細(xì)胞色素P450代謝激活，生成三氯甲基過氧自由基及氯自由基，氧化體系過度活化，導(dǎo)致氧化生物膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，改變細(xì)胞膜的流動性及通透性，破壞肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能，導(dǎo)致肝損傷發(fā)生[6]。

血清轉(zhuǎn)氨酶（AST、ALT等）是肝細(xì)胞受到損傷的敏感指標(biāo)，轉(zhuǎn)氨酶的升高在一定程度上反映了肝細(xì)胞受到損傷的程度[7]。本試驗(yàn)中經(jīng)過預(yù)試驗(yàn)，選擇0.12% CCl4腹腔注射小鼠造模，損傷組小鼠血清中AST、ALT活性極顯著升高（P<0.01），說明CCl4引起了小鼠肝細(xì)胞受損，內(nèi)源性轉(zhuǎn)氨酶大量釋放到胞外，模型建立成功[8]；用藥組給予姜黃浸膏散提前干預(yù)后，血清中AST及ALT活性極顯著低于損傷組（P<0.01），且肝細(xì)胞病理變化減輕，說明姜黃浸膏散減輕了CCl4引起的小鼠肝細(xì)胞損傷。SOD、CAT和GSH-Px是體內(nèi)重要的抗氧化酶，而MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，其含量變化間接反映了機(jī)體脂質(zhì)過氧化水平及肝細(xì)胞損傷程度[6]，損傷組小鼠肝組織勻漿中SOD、CAT和GSH-Px活性明顯降低，MDA含量顯著升高（P<0.01），提示損傷組小鼠體內(nèi)有過氧化反應(yīng)的發(fā)生。姜黃浸膏散不同劑量組小鼠SOD、CAT和GSH-Px活性升高，MDA含量降低，說明姜黃浸膏散對CCl4引起的小鼠過氧化反應(yīng)起到了抑制作用，高劑量組效果尤為顯著。姜黃浸膏散表現(xiàn)出與陽性對照組藥物同樣的作用趨勢，進(jìn)一步說明姜黃浸膏散能夠緩解CCl4所致的小鼠急性肝損傷，具有開發(fā)保肝護(hù)肝制劑的前景。

姜黃浸膏散中主要成分為姜黃素，而姜黃素具有較強(qiáng)的抗氧化作用[9]，在緩解CCl4所致的急性肝損傷中發(fā)揮重要作用。有研究表明，姜黃素分子結(jié)構(gòu)中的酚羥基在姜黃素的抗氧化活性中起決定性的作用[10]。推測姜黃浸膏散保肝作用與清除自由基相關(guān)。

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