摘要：為探討不同光照強(qiáng)度對(duì)廣藿香[Pogostemon cablin （Blanco） Benth.]中百秋李醇含量變化的影響， 采用氣相色譜法對(duì)廣藿香樣品中的百秋李醇含量進(jìn)行了測(cè)定分析。結(jié)果表明， 遮陰率達(dá)80%時(shí)，廣藿香中百秋李醇的含量為0.057 0%，高于全光照處理樣品的0.032 5%，表明遮陰有利于廣藿香中百秋李醇的積累。通過各個(gè)遮陰處理之間的多重比較，發(fā)現(xiàn)各遮陰處理的百秋李醇含量相互之間差異不顯著（P>0.05）。因此，適當(dāng)?shù)恼陉幪幚韺?duì)獲得高品質(zhì)的廣藿香藥材有一定的促進(jìn)作用。

關(guān)鍵詞：廣藿香[Pogostemon cablin （Blanco） Benth.]；百秋李醇；光照強(qiáng)度；氣相色譜法

中圖分類號(hào)：S567.23+9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）02-0406-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.02.035

廣藿香[Pogostemon cablin（Blanco）Benth.]為廣東省道地藥材，屬“十大廣藥”之一，中醫(yī)臨床上具有芳香化濁、和中止嘔、發(fā)表解暑的功效[1]。原產(chǎn)于菲律賓，于清代傳入廣東省廣州市的石牌、棠下，后被引種至肇慶市、陽江市、湛江市以及海南省等地。其中，廣州市產(chǎn)的稱“石牌藿香”（簡(jiǎn)稱“牌香”），肇慶市產(chǎn)的稱“枝香”或“肇香”，海南省產(chǎn)的稱“瓊香”、湛江市等地產(chǎn)的廣藿香通常與“瓊香”統(tǒng)稱為“南香”。傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，廣藿香以“牌香”品質(zhì)最優(yōu)，是道地藥材，“枝香”品質(zhì)稍遜于“牌香”，而“南香”品質(zhì)較次，一般僅供提取揮發(fā)油用[2]。廣藿香總揮發(fā)油為其主要的有效成分，其中主要含有百秋李醇、廣藿香酮、α-愈創(chuàng)木烯等大分子物質(zhì)，羅集鵬等[3]、郭曉玲等[4]、張英等[5]通過對(duì)廣藿香中揮發(fā)油成分的分析，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地、不同采收期的廣藿香藥材中揮發(fā)油的質(zhì)量存在明顯的差異。汪小根等[6]研究發(fā)現(xiàn)，組織培養(yǎng)出來的廣藿香中百秋李醇和廣藿香酮的含量與扦插的廣藿香相比無顯著差異。但是在自然生長(zhǎng)條件下，環(huán)境因子如光照，溫度、濕度、土壤等都能對(duì)藥用植物中化學(xué)成分的組成及含量產(chǎn)生一定的影響[7-15]。為此，試驗(yàn)對(duì)在不同光照強(qiáng)度下生長(zhǎng)的廣藿香藥材中有效化學(xué)成分百秋李醇進(jìn)行了測(cè)定比較，以期為廣藿香的規(guī)范化種植提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料 從廣東省高要市收集生長(zhǎng)2個(gè)月的廣藿香種苗，種植于廣東藥學(xué)院藥圃，該地年平均氣溫22.5 ℃（根據(jù)1981 — 2010年最新的30年氣候資料統(tǒng)計(jì)）。自然條件下生長(zhǎng)2個(gè)月后選取大小相近、無病蟲害的健康植株移栽于面積為1.0 m×1.0 m的藥畦上，株距約30 cm，行距約30 cm，每畦內(nèi)種3～4行（兩邊各空出20 cm），每行種植3株（兩頭留20 cm），每畦種植10株，共種12畦，計(jì)有120株種苗。

1.1.2 試劑與儀器 百秋李醇對(duì)照品由中國食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)為110772-201202；正十八烷為上海晶純?cè)噭┕咎峁?，批?hào)為23223。氯仿、正己烷、三氯甲烷為廣東藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)室已備，均為分析純。儀器主要有GC-2010型氣相色譜儀（日本島津公司）、KQ-500DE型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司，頻率為40 KHz）、LK-400型手提式高速中藥粉碎機(jī)（浙江溫嶺市創(chuàng)力藥材器械廠）、TM-204 LUX/FC照度計(jì)（美國Tenmars公司）。

1.2 處理

待廣藿香植株生長(zhǎng)穩(wěn)定時(shí)（約在定植1個(gè)月后）進(jìn)行4種光照處理，以全光照為對(duì)照，分別有1層黑色遮陽網(wǎng)、2層黑色遮陽網(wǎng)、3層黑色遮陽網(wǎng)3個(gè)遮陰處理。4個(gè)處理都重復(fù)3次（種3畦），采用TM-204照度計(jì)于測(cè)定日下午12：00 — 13：00在覆蓋遮陽網(wǎng)后立即測(cè)定各處理的相對(duì)透光率，測(cè)定結(jié)果經(jīng)計(jì)算，平均值分別為對(duì)照（自然光）透光率100%、1層遮陽網(wǎng)透光率70%、2層遮陽網(wǎng)透光率45%、3層遮陽網(wǎng)透光率20%，后3種處理分別相當(dāng)于30%、55%、80%遮陰率。在廣藿香生長(zhǎng)8個(gè)月后采收地上部全株，用對(duì)角線方法取樣，即選取每個(gè)處理2條對(duì)角線上的5株廣藿香作為樣品，陰干，粉碎過40目篩，備用。

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 色譜條件 毛細(xì)管柱為AT-SE54（15 m×0.25 mm×0.25 μm），載氣量 0.77 mL/min，進(jìn)樣口溫度280 ℃，F(xiàn)ID檢測(cè)器280 ℃，分流比是20∶1；程序升溫方面，初始溫度170 ℃，保持8 min，然后以20 ℃/min升溫到260 ℃，保持5 min。進(jìn)樣量1 μL。

1.3.2 溶液的制備 ①對(duì)照品溶液的制備，精準(zhǔn)稱取百秋李醇對(duì)照品20.04 mg，用正己烷定容至10 mL，制備成質(zhì)量濃度為2.004 mg/mL的對(duì)照品溶液。②內(nèi)標(biāo)溶液的制備，精準(zhǔn)稱取正十八烷0.150 6 g，用正己烷定容至50 mL，制備成質(zhì)量濃度為3.01mg/L的內(nèi)標(biāo)物溶液。③供試品溶液的制備，精準(zhǔn)稱取1.0 g樣品置于具塞錐形瓶中，加三氯甲烷50 mL，超聲提取3次，每次20 min，過濾，合并濾液，水浴回收溶劑至干，殘?jiān)诱淹槭怪芙猓D(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，精準(zhǔn)加入內(nèi)標(biāo)溶液0.5 mL，用正已烷定容至刻度，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 分別精準(zhǔn)吸取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0 mL，再分別置于5 mL容量瓶中，各精準(zhǔn)加入內(nèi)標(biāo)溶液0.5 mL，正己烷定容至刻度，搖勻。按試驗(yàn)的色譜條件，分別測(cè)定5次，計(jì)算百秋李醇峰面積和正十八烷峰面積的比值，并求平均值。以百秋李醇濃度（mg/mL）x為橫坐標(biāo)，峰面積比值y為縱坐標(biāo)，求出標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出回歸方程。

1.4 方法學(xué)考察

1.4.1 精密度試驗(yàn) 精準(zhǔn)吸取同一百秋李醇對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)試驗(yàn)的精密度水平。

1.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精準(zhǔn)吸取同一供試品溶液，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)定，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，考察色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值的一致性，檢測(cè)試驗(yàn)的穩(wěn)定性水平。

1.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次、同一樣品5份，用試驗(yàn)制備方法提取，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)定，考察色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值的一致性，檢測(cè)試驗(yàn)的重復(fù)性水平。

1.4.4 加樣回收率試驗(yàn) 精準(zhǔn)稱取已知含量的30%遮陰率處理的樣品6份，分別精確加入百秋李醇對(duì)照品3.26 mg，制備供試品溶液，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算回收率，檢測(cè)加樣回收率是否符合試驗(yàn)要求。

1.5 田間分布差異評(píng)價(jià)

為克服田間分布各重復(fù)（畦）因小環(huán)境的影響對(duì)試驗(yàn)結(jié)果可能產(chǎn)生的干擾，對(duì)每個(gè)處理3次重復(fù)（種3畦）的樣品百秋李醇含量進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)3個(gè)遮陰處理各重復(fù)因田間分布不一而可能帶來的差異程度。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用Microsoft Office Excel 2003軟件處理，應(yīng)用DPS系統(tǒng)進(jìn)行方差分析，采用鄧肯氏新復(fù)極差檢驗(yàn)法（Duncan′s new multiple range test，DMRT）進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按照試驗(yàn)設(shè)定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到的百秋李醇色譜圖見圖1，內(nèi)標(biāo)物正十八烷色譜圖見圖2，以百秋李醇濃度（mg/mL）x為橫坐標(biāo)，峰面積比值y為縱坐標(biāo)，求出的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出回歸方程y=1.495 2x-0.057 3，其R2=0.999 9，說明百秋李醇質(zhì)量濃度在0.040 08～1.603 20 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 精密度試驗(yàn) 將同一百秋李醇對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行色譜分析。結(jié)果表明，百秋李醇與內(nèi)標(biāo)物正十八烷相對(duì)峰面積的RSD為1.33%，由此可知，試驗(yàn)儀器的精密度符合試驗(yàn)要求。

2.2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將廣藿香同一供試品溶液分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，進(jìn)行色譜分析。結(jié)果得出百秋李醇與內(nèi)標(biāo)物正十八烷相對(duì)峰面積比值的RSD為1.96%，顯示出廣藿香的供試液在24 h內(nèi)保持了百秋李醇含量的穩(wěn)定水平。

2.2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 將同批次、同一樣品5份提取制備后進(jìn)行色譜分析，測(cè)定百秋李醇含量，考察色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值的一致程度，結(jié)果百秋李醇含量的RSD為0.37%，表明試驗(yàn)方法的重復(fù)性良好。

2.2.4 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的30%遮陰率處理的樣品（百秋李醇含量為0.326%）6份，分別精確加入百秋李醇對(duì)照品3.26 mg，按照試驗(yàn)要求制備供試品溶液，進(jìn)行色譜分析，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。從表1可見，樣品的百秋李醇平均回收率為100.35%，RSD為1.20%，表明加樣回收率符合試驗(yàn)要求。

2.3 廣藿香的百秋李醇含量測(cè)定

將不同光照強(qiáng)度處理下的廣藿香樣品按照試驗(yàn)的制備方法制成供試品溶液，按照色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果見圖4。將圖4測(cè)定結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算百秋李醇的含量，發(fā)現(xiàn)各處理的廣藿香中百秋李醇的含量存在明顯差異，其中以全光照處理的最低，平均含量為0.325%，80%遮陰率處理的樣品平均含量最高，為0.570%，55%遮陰率處理的樣品平均含量為0.511%，30%遮陰率處理的樣品平均含量為0.491%；上述結(jié)果表明，光線透過率越低，廣藿香中百秋李醇的含量越高，各處理的百秋李醇含量高低依次為80%遮陰率、55%遮陰率、30%遮陰率、全光照。方差分析結(jié)果（表2）顯示，不同遮陰處理下試驗(yàn)樣品與對(duì)照處理（全光照）樣品中的百秋李醇含量之間存在顯著差異（P<0.05），而各個(gè)遮陰處理的百秋李醇含量之間差異不顯著（P>0.05）；同時(shí)，可見光強(qiáng)對(duì)百秋李醇含量的影響并不一定是隨著遮陰強(qiáng)度的減弱而增加的。

1.5 田間分布差異評(píng)價(jià)

由于室外田間試驗(yàn)各畦試驗(yàn)樣品中的百秋李醇含量有可能出現(xiàn)差異，所以對(duì)每一畦樣品的含量進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，結(jié)果見圖5。從圖5可見，30%、55%遮陰率處理的樣品中百秋李醇含量各重復(fù)幾乎無變化，80%遮陰率處理樣品中僅1畦的樣品含量較高，其他與前2種處理的樣品含量水平相近，說明試驗(yàn)條件下各重復(fù)的百秋李醇含量水平是可信的，并且輕度遮陰即能達(dá)到提高廣藿香中百秋李醇含量的目的。因此，在廣藿香藥材種植時(shí)，適當(dāng)?shù)恼陉幪幚韺?duì)獲得高品質(zhì)的藥材有積極作用。

3 小結(jié)與討論

1）通過對(duì)不同遮陰處理下生長(zhǎng)的廣藿香樣品中百秋李醇的積累情況進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)遮陰對(duì)廣藿香中百秋李醇的含量有明顯的影響，光線透過率越低其含量越高，各處理廣藿香中百秋李醇的含量高低依次為80%遮陰率、55%遮陰率、30%遮陰率、全光照處理。

2）通過對(duì)不同遮陰處理下廣藿香樣品中百秋李醇的含量進(jìn)行方差分析，發(fā)現(xiàn)遮陰處理的含量與全光照條件下的百秋李醇含量存在顯著差異，而各個(gè)遮陰處理之間差異不顯著。可見光照強(qiáng)度對(duì)百秋李醇含量的影響并不一定是隨著強(qiáng)度的減弱而增加的。

3）輕度遮陰即能達(dá)到提高廣藿香中百秋李醇含量的目的，因此，廣藿香藥材種植時(shí)，適當(dāng)?shù)恼陉幪幚韺?duì)獲得高品質(zhì)的藥材有積極作用。

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