摘要：采用田間人工接種煙草黑脛?。≒hytophthora parasitica）病菌0號和1號生理小種，對13份白肋煙資源連續(xù)兩年進(jìn)行煙草黑脛病田間抗性鑒定。結(jié)果表明，在參試13份白肋煙品種（系）中，對0號生理小種表現(xiàn)為抗的品種（系）有27018、27011、2619、2937、27123、2902、鄂煙1號等7份材料；對1號生理小種表現(xiàn)為抗的品種（系）有27018、27011、2619、2937、B0833、27015、27123、2902、鄂煙1號等9份材料。

關(guān)鍵詞：白肋煙；煙草黑脛?。≒hytophthora parasitica）；抗性鑒定

中圖分類號：S432.4+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）02-0359-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.02.022

煙草黑脛?。≒hytophthora parasitica）是一種由寄生疫霉菌屬的煙草黑脛病菌引起的煙草常見真菌病害[1]，通常在煙株幼苗期和成長期均可發(fā)病，病癥特點主要是煙葉變黃，根莖基部變黑，髓部裂成碟片狀，嚴(yán)重時導(dǎo)致煙株死亡[2]。黑脛病在世界各地均有發(fā)生；在中國發(fā)病情況日趨嚴(yán)重，每年因該病造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[3，4]。目前對黑脛病的防治主要采取作物輪作、藥劑防治及種植抗病品種等[5-8]。

煙草黑脛病病菌根據(jù)生理分化與交配型的不同分為0號、1號、2號等多個生理小種，中國煙區(qū)存在0號和1號生理小種，湖北煙區(qū)曾以0號生理小種為主，目前1號生理小種呈增長趨勢[9，10]。煙草黑脛病是湖北省白肋煙最主要病害之一。本研究對湖北省不同白肋煙品種（系）連續(xù)兩年進(jìn)行黑脛病病菌0號及1號生理小種人工接種，觀察供試材料的發(fā)病情況，確定其抗性等級，以篩選出對黑脛病抗性較好的白肋煙種質(zhì)資源，為白肋煙黑脛病抗病品種選育提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

白肋煙品種（系）材料13份，其中湖北省自育白肋煙品系11份，包括27015、27018、2619、2937、27039、B0833、1046、2957、27123、27011、2902，抗病對照為鄂煙1號，感病對照為Ky14。2013、2014年連續(xù)兩年同一技術(shù)條件下對該13份白肋煙材料進(jìn)行接種鑒定。

供試黑脛病病菌：黑脛病病菌0號生理小種、1號生理小種。

1.2 方法

1.2.1 黑脛病病菌的分離與純化 將發(fā)病株莖內(nèi)因病菌毒素作用而變褐、變黑、干縮、分離成碟片狀，猶如筍節(jié)，片層間生有白色、疏松絮狀物，潮濕時病莖外表可見白色絮狀物，放于滅菌的燕麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)5～7 d（恒溫28 ℃），取長勢比較均勻的菌落，轉(zhuǎn)入盛有斜面培養(yǎng)基的試管保存。

1.2.2 病菌接種 菌種制備：將分離純化的黑脛病菌0號和1號生理小種轉(zhuǎn)管培養(yǎng)14 d后搗碎，加0.1%KNO3少許濕潤菌絲，繼續(xù)培養(yǎng)24～48 h誘發(fā)產(chǎn)生游動孢子囊，每管加10 mL無菌水冷藏1～2 h促進(jìn)游動孢子釋放，過濾稀釋備用。6月初黑脛病始發(fā)期采用注射法開始接種；在團(tuán)棵期對每株進(jìn)行接種，接種劑量0.1 mL。接種后，灌水保持田間濕度，以利于黑脛病的發(fā)生與流行。

1.2.3 試驗設(shè)計 試驗設(shè)在湖北省煙草科學(xué)研究院晾曬煙試驗基地田間病圃內(nèi)進(jìn)行，位于湖北省恩施市崔家壩鎮(zhèn)斑竹園村，供試面積1 066.7 m2，為常年黑脛病接種病圃，地勢平坦，質(zhì)地疏松，土壤肥力中等，光照較充足，排水良好，前茬種植綠肥。3次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列，每小區(qū)種植20株，兩行區(qū)，行株距為120 cm×45 cm。其中1行接種0號生理小種，1行接種1號生理小種。

1.2.4 調(diào)查內(nèi)容及方法 以株為單位，于晴天中午后調(diào)查。田間調(diào)查主要包括黑脛病發(fā)病率及發(fā)病病級，計算病情指數(shù)；接種前調(diào)查1次，接種后每5 d調(diào)查1次，共調(diào)查5次，調(diào)查全部煙株發(fā)病情況。

1.2.5 病情分級方法及抗性評價標(biāo)準(zhǔn)[11，12] 按照標(biāo)準(zhǔn)將病害嚴(yán)重度進(jìn)行分級：0級，全株無?。?級，莖部病斑不超過莖圍的三分之一，或三分之一以下葉片凋萎；3級，莖部病斑環(huán)繞莖圍的三分之一至二分之一，或三分之一至二分之一葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑；5級，莖部病斑超過莖圍的二分之一，但未全部環(huán)繞莖圍，或二分之一至三分之二葉片凋萎；7級，莖部病斑全部環(huán)繞莖圍，或三分之二以上葉片凋萎；9級，病株基本枯死。

根據(jù)病情指數(shù)，評定抗性等級。高抗或免疫（I），病情指數(shù)為0；抗病（R），病情指數(shù)為0.1～20.0；中抗（MR），病情指數(shù)為20.1～40.0；中感（MS），病情指數(shù)為40.1～60.0；感病（S），病情指數(shù)為60.1～80.0；高感（HS），病情指數(shù)為80.1～100.0。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 調(diào)查所得的數(shù)據(jù)，按以下公式計算病情指數(shù)及發(fā)病率：

2 結(jié)果與分析

2.1 2013年不同白肋煙品種（系）煙草黑脛病抗性

2013年采取了0號生理小種和1號生理小種兩種致病力強(qiáng)的黑脛病菌對13份白肋煙資源進(jìn)行了田間接種抗性鑒定，結(jié)果見表1。由表1可知，對黑脛病0號生理小種表現(xiàn)出抗性的材料有2619、2937、27018、27015、27123、27011、2902、鄂煙1號；表現(xiàn)出中抗的材料有27039、1046、2957；表現(xiàn)出中感的材料有B0833；表現(xiàn)出感病的材料有Ky14。對黑脛病1號生理小種表現(xiàn)出抗性的材料有2619、2937、B0833、27018、27015、27123、27011、2902、鄂煙1號；表現(xiàn)出中抗的材料有27039、1046、2957；表現(xiàn)出感病的材料有Ky14。除B0833對0號生理小種和1號生理小種表現(xiàn)出抗性不一致外，其他白肋煙品種（系）對這兩種生理小種表現(xiàn)出的抗性一致，其中有2619、2937、27018、27015、27123、27011、2902、鄂煙1號等8份材料對這兩種生理小種均表現(xiàn)為抗病，27039、1046、2957等3份均表現(xiàn)中抗，Ky14均表現(xiàn)為感病。

2.2 2014年不同白肋煙品種（系）煙草黑脛病抗性

2014年采取了0號生理小種和1號生理小種兩種致病力強(qiáng)的黑脛病菌對13份白肋煙資源進(jìn)行了田間接種抗性鑒定，結(jié)果見表2。由表2可知，對黑脛病0號生理小種表現(xiàn)出免疫的材料有27018、27011，表現(xiàn)出抗性的材料有2619、2937、27039、B0833、1046、2957、27123、2902、鄂煙1號，表現(xiàn)出中抗的材料有27015，表現(xiàn)出感病的材料有Ky14；對黑脛病1號生理小種表現(xiàn)出免疫的材料有27018、27011，表現(xiàn)出抗性的材料有27015、2619、2937、27039、B0833、1046、2957、27123、2902、鄂煙1號，表現(xiàn)出感病的材料有Ky14。除27015對0號生理小種和1號生理小種表現(xiàn)出抗性不一致外，其他白肋煙品種（系）對這兩種生理小種表現(xiàn)出的抗性一致，其中27018、27011對這兩種生理小種均表現(xiàn)為免疫，2619、2937、27039、B0833、1046、2957、27123、2902、鄂煙1號等9份材料均表現(xiàn)為抗病，Ky14均表現(xiàn)為感病。

3 小結(jié)與討論

煙草黑脛病嚴(yán)重威脅著湖北白肋煙煙葉生產(chǎn)，每年因黑脛病造成的煙葉產(chǎn)量及質(zhì)量下降所帶來的損失巨大，在現(xiàn)有防治煙草黑脛病技術(shù)條件下，培育優(yōu)質(zhì)抗黑脛病白肋煙品種是解決目前煙草黑脛病威脅的重要途徑[13]。白肋煙品種抗性的提高，對白肋煙煙葉生產(chǎn)安全性、減少農(nóng)藥使用、增加經(jīng)濟(jì)效益有著極其重要的作用。中國黑脛病病菌有0號和1號兩種生理小種，由于自然誘發(fā)抗性鑒定存在諸多問題。本試驗通過人工定量注射接種黑脛病病原鑒定不同白肋煙品種（系）的黑脛病抗性，在經(jīng)過連續(xù)兩年相對一致的技術(shù)條件下，能夠較準(zhǔn)確鑒定出品種（系）對黑脛病的抗性。

本試驗表明，相同的品種，同一栽培措施及試驗地塊，2014年黑脛病的總體發(fā)病情況比2013年輕。2014年暴雨暴晴天氣少，不易在田間形成高溫高濕的田間小氣候，不利于黑脛病的發(fā)生流行；而2013年氣候相對高溫，黑脛病的發(fā)生較為嚴(yán)重，但各品種在這兩年對黑脛病抗性水平表現(xiàn)基本一致。

綜合兩年抗性鑒定結(jié)果表明，在參試13份白肋煙品種（系）中，連續(xù)兩年對0號生理小種表現(xiàn)為抗的品種（系）有2619、2937、27018、27123、27011、2902、鄂煙1號等7份材料，對1號生理小種表現(xiàn)為抗的品種（系）有2619、2937、B0833、27018、27015、27123、27011、2902、鄂煙1號等9份材料。在參試13份白肋煙品種（系）中，對0號和1號生理小種表現(xiàn)為抗或免疫黑脛病的品種（系）有27018、2619、2937、27123、27011、2902、鄂煙1號等7份材料，中抗或抗黑脛病的品種（系）有27039、1046、2957、27015等4份材料，表現(xiàn)為感黑脛病的品種有Ky14。另外B0833在2013年對黑脛病病菌0號生理小種表現(xiàn)為感病，對1號生理小種表現(xiàn)為抗，2014年對兩種生理小種均表現(xiàn)為抗。

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