摘要:中藥藥效質(zhì)量控制的關(guān)鍵之一就是對(duì)中藥化學(xué)成分的分析。中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性決定了中藥成分的分析時(shí)間較長(zhǎng)、分離難度較大等特點(diǎn)。本文結(jié)合近年來的科學(xué)研究,分析了快速高效液相色譜分離技術(shù)在復(fù)雜中藥體系中的化學(xué)成分分析中的運(yùn)用。
關(guān)鍵詞:快速高效液相色譜;分離技術(shù);中藥分析
中藥是我國(guó)人民在歷史長(zhǎng)河中和無數(shù)疾病作斗爭(zhēng)時(shí)總結(jié)出來的智慧結(jié)晶,是我國(guó)的寶貴財(cái)富。但是,沒有標(biāo)明活性化學(xué)物質(zhì)含量的中草藥制劑,服用劑量太小起不到治療作用,而服用的劑量太大又會(huì)使人體發(fā)生危險(xiǎn)[1]。所以,中藥藥效物質(zhì)的質(zhì)量控制在現(xiàn)代中藥研究中是至關(guān)重要的。其中,快速高效液相色譜主要分為高溫液相色譜、基于整體柱的高效液相色譜、超高壓液相色譜。傳統(tǒng)的高效液相色譜分析中存在著一些不足,為了彌補(bǔ)這些不足,快速高效液相色譜分離技術(shù)得到了充分的運(yùn)用。
1高溫液相色譜在中藥分析中的運(yùn)用
為了確保中藥安全有效,必須對(duì)中草藥的效應(yīng)成分進(jìn)行科學(xué)合理地標(biāo)識(shí),所以對(duì)效應(yīng)成分的辨別和確認(rèn)是非常重要的。隨著高溫液相色譜技術(shù)的不斷發(fā)展,其運(yùn)用的范圍越來越廣,成為中藥分離分析的重要手段。對(duì)于液相色譜分析,不但要求其要有很高的準(zhǔn)確性,同時(shí)也要求要有更高的分析頻率,方便測(cè)試對(duì)象數(shù)目特別龐大時(shí)使用,所以,分析效率也顯得越來越重要。Bino等[2]使用二維液相色譜分離玉米幼苗組織提取物代謝產(chǎn)物,運(yùn)用二維分離時(shí)采用的是高溫液相色譜,和傳統(tǒng)二維色譜分離比較是在110℃高溫下與20s內(nèi)將所有的化合物分離,不但減少了分析時(shí)間,還使得色譜峰容量增大,在短短的25min內(nèi)就獲得了870個(gè)色譜峰,而較大的峰容量是保證有效分離大量化合物的前提,中藥成分很復(fù)雜,含有很多有效成分,這就決定了中藥的分離需要較大的色譜峰容量、較快的分析技術(shù)。具有這些優(yōu)勢(shì)的高溫液相色譜在中藥成分分析中具有特別大的潛力。
2基于整體柱的高效液相色譜在中藥分析中的運(yùn)用
中藥的物質(zhì)體系復(fù)雜,含有化合物的種類多,數(shù)目不確定,各種物質(zhì)含量差異也很大。基于整體柱的高效液相色譜具有較高柱效、較低柱壓降和選擇性較好的優(yōu)點(diǎn),因此可以作為中藥成分分析的有效技術(shù)。和傳統(tǒng)的C18填充柱比較,采用整體柱對(duì)化合物進(jìn)行分離時(shí),在柱壓降仍然保持降低的情況下把流動(dòng)相的流速由原來1mL/min提高到2mL/min,分析時(shí)間大大減少了。由于分析時(shí)間的縮短,色譜峰變得高和尖銳,從而有效提高了分析的靈敏度,而提高一個(gè)數(shù)量級(jí)的檢出限對(duì)含量較低的物質(zhì)的檢測(cè)是具有非常重要的意義的。此外,對(duì)于在填充柱上不能很好分離的化合物在整體柱上則能夠較好的分離。由于整體柱的柱壓降較低,所以在分析時(shí)使用的改性劑選擇范圍更廣,例如添加異丙醇,可以使流動(dòng)相的流速提高1倍,很大程度上提高了色譜峰的容量和分析的速度。另一方面,由于整體柱的柱壓降較低,進(jìn)行色譜分離時(shí)可以采用流速梯度,與溶劑梯度洗脫比較,流速梯度洗脫不必要進(jìn)行第二次同類實(shí)驗(yàn)以初始濃度的流動(dòng)相對(duì)色譜柱進(jìn)行平衡,這就節(jié)約了實(shí)驗(yàn)溶劑和實(shí)驗(yàn)時(shí)間。較低的柱壓降還可以使色譜柱使用壽命增加,降低企業(yè)成本?;谡w柱的高效液相色譜為含有復(fù)雜化學(xué)成分的中藥材鑒定和質(zhì)量控制提供了更快速、更高效的分析方法。
3超高壓液相色譜在中藥分析中的運(yùn)用
超高壓液相色譜現(xiàn)在已經(jīng)廣泛運(yùn)用在中藥成分分析、中藥復(fù)方制劑的定性和定量分析等方面。與傳統(tǒng)高效液相色譜相比,使用超高壓液相色譜在提高分析速度的同時(shí),分離度也有所提高,可以使較難分離的化合物可以得到較好的分離。采用傳統(tǒng)高效液相色譜分離時(shí)未達(dá)到極限分離的化合物,采用超高壓液相色譜分離更容易實(shí)現(xiàn)基線分離。由于超高壓液相色譜的靈敏度的提高,中藥材中很多化合物的檢出限會(huì)降低,使得更容易檢出。由于流速的降低,有機(jī)溶劑的用量大大減少。超高壓液相色譜還可以與各種不同的檢測(cè)器聯(lián)用,可以用于中藥代謝產(chǎn)物等復(fù)雜的生物樣品分析[3]??傊?,超高壓液相色譜具有高分離度、超快速、高色譜峰容量和高靈敏度等優(yōu)點(diǎn),在中藥分析中得到廣泛運(yùn)用。
4超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在中藥分析中的運(yùn)用
超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是一種新的現(xiàn)代技術(shù)手段,將其運(yùn)用在中藥分析中具有高分離效能、高靈敏度以及專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),其定量分析和定性分析能力都很強(qiáng),在藥物分析中運(yùn)用非常廣泛,尤其是在中藥分析中的應(yīng)用更為廣泛。超高效液相色譜據(jù)有高性能物理分析能力,質(zhì)譜具有獨(dú)特的質(zhì)量分析能力,而超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)很好的將二者的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合在了一起,同時(shí)還具有很高的選擇性和靈敏度。超高效液相色譜在達(dá)到最佳線速度時(shí)的流動(dòng)相流速與質(zhì)譜能夠承受的流速更加匹配,可以增加離子化的效率。中藥具有非常復(fù)雜的特點(diǎn),中藥指紋圖譜就是將中藥材進(jìn)行一定的處理后采用一定的分析手段得到可以標(biāo)示這種中藥材特征共有峰的圖譜,具備個(gè)體絕對(duì)的唯一性,而超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)就是一種可以得到中藥指紋圖譜的技術(shù)。超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)還能根據(jù)指紋的特征反映出由于不同產(chǎn)地對(duì)中藥材造成的差異,差異越小說明這種藥材的穩(wěn)定性越好,不但可以很好的鑒別基礎(chǔ)峰,還可以利用它很高的選擇性和靈敏度對(duì)于中藥材的指紋區(qū)域更好的定性分析[4]。
5結(jié)論
隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,中藥產(chǎn)業(yè)也在不斷發(fā)展,因此,人們對(duì)中藥分析分離技術(shù)的要求越來越高。高溫液相色譜法、基于整體柱的高效液相色譜和超高壓液相色譜都屬于快速高效液相色譜分離技術(shù),是色譜分析的新的發(fā)展領(lǐng)域。它們不但具有液相色譜的高選擇性,而且還具有氣相色譜的高分離效率的優(yōu)點(diǎn),主要是通過改變固定相的粒徑大小、升高系統(tǒng)的整體溫度、使用整體材料進(jìn)行填充來減少分析時(shí)間的,同時(shí)還保持了很好地分析效果??焖俑咝б合嗌V分離技術(shù)在中藥研究中發(fā)揮越來越重要的作用,為我國(guó)中藥分析提供強(qiáng)大的技術(shù)支持。
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編輯/孫杰