摘要：目的 研究短期內(nèi)酥油茶對(duì)SD大鼠肝臟的影響。 方法 將96只SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分成8組（空白組、高脂組、茶水組、鹽水組、酥油高組、酥油低組、酥油茶高組、酥油茶低組），每組含雌雄鼠各6只。每日上午同一時(shí)間點(diǎn)每只大鼠給予特定溶液灌胃（3.6ml/200g），10d后取肝臟放入福爾馬林溶液中備檢，采用HE染色觀察其結(jié)構(gòu)變化、免疫組化觀察低密度脂蛋白受體（LDL-R）在肝組織中的表達(dá)并用Image-proplus6.0軟件對(duì)其陽性表達(dá)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果 同空白組相比，酥油茶高、低兩組的肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)未見明顯改變。高脂組及酥油高組肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見脂肪空泡、細(xì)胞體積增大、肝索間隙變窄；肝細(xì)胞LDL-R陽性表達(dá)結(jié)果顯示，酥油茶高、低組及酥油低組的肝細(xì)胞LDL-R陽性表達(dá)數(shù)顯著高于空白組（P<0.01），高脂組的肝細(xì)胞LDL-R陽性表達(dá)數(shù)顯著低于其余7組（P<0.01）。結(jié)論 短期內(nèi)酥油茶中酥油及茶成分的共同作用使SD大鼠肝細(xì)胞LDL-R呈陽性高表達(dá)狀態(tài)，促進(jìn)肝臟對(duì)血漿LDL的清除，進(jìn)而調(diào)節(jié)血脂代謝。

關(guān)鍵詞：酥油茶；SD大鼠；肝臟；脂質(zhì)代謝

Influence of Butter Tea on the Liver of SD Rats and Its Mechanisms

Duo ji zhuo ma1，CUI Chao-ying1，QI Zhen-nan2，Gong ga lan zi1，JIANG Wen-hua3

（1.Department of Plateau Medical Research Center， Medical College of Tibet University， Lhasa 850000，Tibet，China；2.Department of General Practice，Peking University First Hospital ，Beijing 100034，China；3.Department of Histology and Embryology，College of Basic Medical Sciences，Jilin University，Changchun 130000，Jilin，China）

Abstract：Objective This study focuses on the influence of butter tea on SD rat's liver. Methods We carried out the research by choosing 96 healthy SD rats （200g±20g）， half male and half female， and divided them into 8 groups which we called the blank group， high lipid group， tea water group，salt water group， high butter，s concentration group，low butter，s concentration group， high butter tea，s concentration group and low butter tea，s concentration group respectively. There are 12 rats in each group. We gave the SD rats intragastric administration of specific butter tea （3.6ml for each） at the same time every morning and weighed them every 10 days. The structure of liver is observed by means of HE staining. We detected low density lipoprotein receptor （LDL-R） by the immunohistochemical methods，and Observed in the tissue of liver and the positive expression cells count by Image - pro plus6.0 software. The obtained data were represented by average numbers plus standard deviation and processed by SPSS Statistics. One-way analysis of variance was used when comparing the data of several groups. Results The HE staining results indicate that the liver structure of the high butter tea，s concentration group and low butter tea，s concentration group were normal. The light color cytoplasm and hepatic cord gap narrowing in liver of the high butter，s concentration group and the high lipid group..Regarding LDL-R positive expression liver cells number， low butter tea，s concentration group and low butter，s concentration group were remarkably higher than those of the blank group （P﹤0.01）. The LDL-R positive expression liver cells number of the high lipid group was remarkably lower than that of other groups.（P﹤0.01）. Conclusion Intragastric administration of butter tea during a short period of time will promotie hepatic lipid metabolism through the SD rat liver cells positive expression of LDL-R.

Key words：Butter Tea；SD Rat；Blood Lipid；Liver

在藏區(qū)，每家每戶都離不開酥油茶，酥油茶是藏族同胞每日必不可少的飲料，而與藏區(qū)毗鄰的一些民族，亦有飲用酥油茶的習(xí)慣。酥油茶作為一種防病、保健的高原特色營養(yǎng)滋補(bǔ)飲品， 含有極其豐富的礦質(zhì)營養(yǎng)和維生素[1]，是世居高原的藏族同胞獲得人體必需營養(yǎng)素的重要途徑。

根據(jù)個(gè)人習(xí)慣與愛好的不同，酥油茶中酥油、磚茶水、鹽含量的變化幅度較大，但每日飲用的酥油茶中加入的成份不外乎就酥油、磚茶水、鹽，極個(gè)別地區(qū)藏族同胞還加入少量奶。肝臟作為脂肪代謝的重要場(chǎng)所，在脂類的吸收、運(yùn)輸、合成、儲(chǔ)存、分解等過程中起著樞紐作用[2]。在我們前期進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中[3]，已經(jīng)了解到酥油茶在短期內(nèi)對(duì)SD大鼠血脂及肝指數(shù)并未產(chǎn)生明顯影響，為進(jìn)一步了解酥油茶對(duì)SD大鼠肝臟形態(tài)學(xué)方面的影響。本實(shí)驗(yàn)以SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象，觀察特定溶液灌胃10d后SD大鼠肝臟形態(tài)學(xué)的變化，探討酥油茶對(duì)SD大鼠肝臟的影響，為進(jìn)一步深入研究提供依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 96只無特定病原體（SPF）級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體重（200±20）g。購于四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)，合格證號(hào)：scxk [川] 2008-14。在屏障環(huán)境中進(jìn)行試驗(yàn)，每籠飼養(yǎng)6只同性大鼠，自然光照，更換2次/w墊料，飼養(yǎng)溫度（19±2）℃，相對(duì)濕度（50±20）%， 每日更換飼料及滅菌水。

1.2 灌胃溶液中各成分含量 通過計(jì)算及預(yù)實(shí)驗(yàn)，空白組和高脂組不需灌胃，其余各組給予每日每只大鼠特定溶液灌胃量為3.6ml/200g[4]，各組特定灌胃溶液成分見表 1。

1.3 主要藥品與試劑 SD 大鼠飼料（四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)）、酥油（西藏昌都芒康縣牧民家）康磚茶（雅龍牌） 、豬油（ 西藏拉薩肉食品公司）、膽固醇（成都聯(lián)合化工醫(yī)藥公司：批號(hào)：20120409） 、碘鹽（西藏拉薩食鹽加碘廠）、利多卡因（山東華魯制藥有限公司）、超敏試劑盒（鼠/兔）（邁新生物技術(shù)開發(fā)公司：批號(hào)：1303019710） 、兔抗大鼠LDLR 抗體（邁新生物技術(shù)開發(fā)公司）蘇木精、伊紅等。

1.4 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和儀器 血脂檢測(cè)儀（日立7020）、電子秤（HOCKY AD05）、離心機(jī)（Hettich D-78532）、包埋機(jī)（Leica）、轉(zhuǎn)輪切片機(jī)（Leica ）、顯微鏡 （OLYMPUS）。

1.5方法

1.5.1實(shí)驗(yàn)方法 溫度（19+2）℃，在室內(nèi)自然光照下動(dòng)物自由攝食及飲水。經(jīng)1w適應(yīng)性飼養(yǎng)后，將SD大鼠隨機(jī)分為空白組（陰性對(duì)照組）、高脂組（陽性對(duì)照組）、茶水組、鹽水組、酥油高組（酥油濃度高）、酥油低組（酥油濃度低）、酥油茶高組（酥油濃度高）和酥油茶低組（酥油濃度低），各組SD大鼠的初始體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），連續(xù)灌胃10d后，各組大鼠禁食12h，稱重后用利多卡因腹腔麻醉后，取出肝臟、稱重、固定[3]。

1.5.2檢測(cè)方法

1.5.2.1檢測(cè)項(xiàng)目 HE染色、LDL-R表達(dá)的免疫組化、LDL-R表達(dá)的陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)

1.5.2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料以x±s表示，檢驗(yàn)是否符合正態(tài)分布，同時(shí)經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 HE染色結(jié)果--肝臟結(jié)構(gòu)變化 酥油茶高、低組的肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)未見異常，高脂組及酥油高組肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見脂肪空泡、細(xì)胞體積增大、肝索間隙變窄，見圖1。

圖1 SD大鼠肝臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)（HE×200）

注：A：空白組 B：高脂組 C：茶水組 D：鹽水組 E：酥油高組 F：酥油低組 G：酥油茶高組 H：酥油茶低組

2.2免疫組化染色結(jié)果--LDL-R在肝臟的表達(dá) 肝細(xì)胞LDL-R陽性表達(dá)結(jié)果顯示，酥油茶高、低組及酥油低組的肝細(xì)胞LDL-R陽性表達(dá)數(shù)顯著高于空白組（P<0.01），高脂組的肝細(xì)胞LDL-R陽性表達(dá)數(shù)顯著低于其它組（P<0.01），見表2、圖2。

注：與空白組比較，▲P<0.01；與高脂組比較，■P<0.01。

圖2 LDL-R在SD大鼠肝細(xì)胞的表達(dá)（免疫組化×100）

注：A：空白組 B：高脂組 C：茶水組 D：鹽水組 E：酥油高組 F：酥油低組G：酥油茶高組 H：酥油茶低組

3討論

肝臟是體內(nèi)碳水化合物、蛋白質(zhì)、紙質(zhì)、維生素合成代謝的重要器官，通過多種復(fù)雜的酶促反應(yīng)而運(yùn)轉(zhuǎn)完成其功能。肝臟作為脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵場(chǎng)所，多種原因所致脂質(zhì)代謝的合成、降解、和分泌失衡，都會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)在肝細(xì)胞內(nèi)的異常沉積。飲食是機(jī)體獲得外源性膽固醇的唯一來源，對(duì)食物脂質(zhì)的攝取、消化和吸收直接影響血脂和脂蛋白的濃度。高脂飲食與脂肪肝及高脂血癥之間存在密切關(guān)系[5]。

有實(shí)驗(yàn)研究表明，飼料中添加10%的酥油能顯著提高小鼠血液三酰甘油、總膽固醇和脂蛋白脂酶水平，降低高密度脂蛋白膽固醇濃度，但變化幅度在總體上低于添加10%的豬油[6]。同時(shí)，有大量研究表明[7-10]，茶多酚作為一種從茶葉中分離提取出的一類多酚類化合物復(fù)合體，具有明顯的調(diào)脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。在吳正平[8]等的研究中，SD大鼠肝臟冰凍切片的脂肪染色顯示，茶多酚可以明顯減少肝臟中脂肪含量。

在我們前期的研究中，已經(jīng)知道，在對(duì)SD大鼠進(jìn)行短期灌胃后，酥油茶高、低組的血清TG、TC、LDL-C、HDL-C和肝指數(shù)與空白組間無顯著差異（P>0.05）。在形態(tài)學(xué)檢查中，通過HE染色觀察發(fā)現(xiàn)酥油茶高、低組與空白組一致，其肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，而高脂組及酥油高組肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見脂肪空泡、細(xì)胞體積增大、肝索間隙變窄，我們考慮是由于攝入脂類過多，使其體內(nèi)磷脂合成障礙或載脂蛋白合成障礙而影響甘油三酯在肝臟內(nèi)聚集而引起的肝細(xì)胞形態(tài)變化[3]。由于肝是降解LDL的主要器官，且LDL是轉(zhuǎn)運(yùn)肝合成的內(nèi)源性膽固醇的主要形式，而LDL-R廣泛分布于以肝臟為主的全身各組織的細(xì)胞膜表面，能特異識(shí)別和結(jié)合含apoE或apoB100的脂蛋白， 與血漿中的LDL結(jié)合后通過LDL-R代謝途徑進(jìn)行代謝 [11]，此次實(shí)驗(yàn)通過免疫組化檢測(cè)來LDL-R在各組肝細(xì)胞中的表達(dá)顯示，其中酥油茶高、低組及酥油低組顯著高于空白組，究其原因是因?yàn)閿z入飽和脂肪酸引起的TC的增高主要導(dǎo)致LDL-C水平的增高，而LDL-C的增加常伴隨apoB-100增加[12-13]。外源性高脂肪、高飽和脂肪酸的過量攝入會(huì)促使LDL降解率下降致血清LDL增高[14]，而高飽和脂肪酸還可降低LDL-R活性從而阻礙了肝臟對(duì)血漿LDL的清除[15]。因酥油中含有豐富的CLA，而適量CLA 對(duì)動(dòng)物發(fā)育和脂質(zhì)代謝具有促進(jìn)和調(diào)節(jié)作用， 能夠降低脂肪沉積和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[16]，故灌胃低濃度酥油SD大鼠肝細(xì)胞LDL-R的陽性表達(dá)上調(diào)，說明酥油低組中所含的CLA量適宜，可通過上調(diào)肝細(xì)胞LDL-R的陽性表達(dá)，促進(jìn)了肝臟對(duì)血漿LDL的清除。灌胃高、低濃度酥油茶SD大鼠肝細(xì)胞LDL-R的陽性表達(dá)上調(diào)，雖統(tǒng)計(jì)分析后與酥油低組無顯著差異，但從數(shù)值上可看出酥油茶高、低組的SD大鼠肝細(xì)胞LDL-R的陽性表達(dá)上調(diào)趨勢(shì)強(qiáng)于酥油低組，表明酥油茶中的酥油及具有明顯調(diào)脂作用的茶葉共同促進(jìn)肝臟對(duì)血漿LDL的清除作用[17]。

綜上所述，酥油茶作為藏族同胞喜愛的飲品之一，在其生活中扮演者不可或缺的地位，而且藏族同胞飲用酥油茶是一個(gè)長期而連續(xù)的過程。本實(shí)驗(yàn)階段性結(jié)果，證實(shí)了酥油茶可通過上調(diào)SD大鼠LDL-R的陽性表達(dá)，促進(jìn)了肝臟對(duì)血漿LDL的清除，從而起到調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用。可為今后開展高原地區(qū)研究酥油茶對(duì)人體肝臟的影響研究提供參考依據(jù)。

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編輯/康潔