孫 琦

（撫寧縣人民醫(yī)院 河北撫寧 066300）

結(jié)直腸癌為常見的一類惡性腫瘤疾病，隨著經(jīng)濟的高速發(fā)展，較多的物理或化學(xué)致癌因子產(chǎn)生，外加人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，使結(jié)直腸癌的患病率逐年呈上升趨勢。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計：［1］結(jié)直腸癌的患病增長速度占據(jù)所有癌癥的首位，且發(fā)病時期直接影響著治療效果。對于常規(guī)切除手術(shù)來說，若于患者癌變組織分化嚴(yán)重或出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移的發(fā)病晚期進(jìn)行手術(shù)，則術(shù)后5年內(nèi)的存活率只有50%左右，而于患者發(fā)病早期，癌變組織分化尚未嚴(yán)重及淋巴未發(fā)生轉(zhuǎn)移時進(jìn)行手術(shù)，則術(shù)后5年內(nèi)的存活率可高達(dá)90%左右，因此盡早的對該病進(jìn)行確診并及時采取治療措施，是有效防止其惡化的途徑。所以，眾多研究將結(jié)直腸癌的治療關(guān)鍵放于病情判定指標(biāo)上。有相關(guān)研究報道：Akt、TGF－β1、mTOR參與細(xì)胞增殖及分化的調(diào)控，于是本次研究分析了Akt、TGF－β1、mTOR在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義，先將具體內(nèi)容進(jìn)行若下報道。

1 資料和方法

1．1 一般資料：選取2013年3月至2014年4月于我院手術(shù)后診斷為結(jié)直腸癌的標(biāo)本40例為癌變組，其中男性23例，女性17例，年齡26～67歲，平均年齡（42．1±13．2）歲；依照 AJCC結(jié)直腸癌TNM分期，Ⅰ＋Ⅱ期14例，Ⅲ＋Ⅳ期26例；依照分化程度：高度12例，中度18例，低度10例；依照淋巴轉(zhuǎn)移：淋巴有轉(zhuǎn)移18例，淋巴無轉(zhuǎn)移22例。另選取20例健康者的非結(jié)直腸癌變組織為非癌變組，男性11例，女性9例，年齡25～67歲，平均年齡（41．7±12．8）歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：［2］臨床資料完整，手術(shù)后經(jīng)經(jīng)驗豐富的醫(yī)師鑒定確診為結(jié)腸癌變；術(shù)后癌變組織標(biāo)本完好保存，患者及家屬自愿參與研究，簽署自愿協(xié)議書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：［3］排除結(jié)直腸癌家族史，及使用化療、放療或非甾體抗炎藥物史的患者；排除并發(fā)其它部位惡性腫瘤的患者，排除臨床資料不完整者及未簽署自愿協(xié)議書者。

1．2 研究所用試劑與儀器：購自美國Epitomics公司Akt、TGF－β1、mTOR三者各自的兔抗人多克隆抗體；購自美國cell signaling technology公司的DAB試劑盒、S－P試劑盒、鏈親和素一過氧化物酶；儀器主要為購自美國cell signaling technology公司的切片機、烘干機、電子顯微鏡及國產(chǎn)的37℃恒溫孵育箱等。

1．3 免疫組化染色法操作步驟：石蠟包埋、切片、洗液清洗脫蠟；酒精浸泡、抗原還原、洗液清洗；滴加氧化酶阻斷劑，洗液沖洗；滴加山羊血清工作液；滴加45μl一抗，低溫放置后洗液沖洗；滴加45μl二抗，靜置后洗液沖洗；滴加鏈親和素一過氧化物酶，放置，洗液沖洗；滴加現(xiàn)配顯色劑（DAB）；蘇木素染色，水洗；酒精脫水封片待用；于顯微鏡下觀察Akt、TGF－β1、mTOR三者的表達(dá)陽性率。

1．4 Akt、TGF－β1、mTOR陽性診斷方法：依照文獻(xiàn)診斷方法：Akt、TGF－β1、mTOR三者表達(dá)蛋白染色成功的標(biāo)志均為［4］：細(xì)胞液被染成顆粒狀棕黃色物質(zhì)。于光鏡下取1000個腫瘤細(xì)胞觀察，最終結(jié)果以染色面積與染色程度的乘積得分進(jìn)行綜合評定［5］，其中染色面積得分規(guī)定為若染色成功細(xì)胞率為0%則計分為0分；若＜25% 則計分為1分；25%～40%計分為2分；41%～80%為3分；超過80%為4分。染色程度則按照棕褐色、棕黃色、黃色、無顯色分別為3分、2分、1分、0分。最終染色面積得分與染色程度得分若為0分則為陰性，以“－”表示，若為1～2分則為若陽性，以“＋”表示，若為3分則為陽性，以“＋＋”表示，若≥4分則為強陽性，以“＋＋＋”表示［6］。

1．5 統(tǒng)計學(xué)方法：研究中Akt、TGF－β1、mTOR陽性率及患者的年齡、性別、癌變組織病理分型等臨床資料均應(yīng)用SPSS21．0軟件處理，其中計數(shù)數(shù)據(jù)Akt、TGF－β1、mTOR陽性率以百分號計數(shù)，組間進(jìn)行卡方檢驗，計量數(shù)據(jù)患者年齡等以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間比較進(jìn)行t檢驗，以p值＜0．05為差異有統(tǒng)計意義的判定標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2．1 兩組研究對象結(jié)直腸組織中Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率比較：癌變組研究對象結(jié)直腸癌變組織中的Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率較非癌變組研究對象的健康結(jié)直腸組織明顯提升，經(jīng)卡方檢驗，p值均＜0．05，由此可見：結(jié)直腸組織癌變時Akt、TGF－β1、mTOR三者的表達(dá)陽性率明顯上升，因此三者表達(dá)陽性率與結(jié)直腸癌變呈正相關(guān)，見表1。

2．2 不同病理分型間Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率差異比較：對于結(jié)直腸組織癌變患者，III＋I(xiàn)V期患者的癌變組織中Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率均明顯高于I＋I(xiàn)I期，經(jīng)卡方檢驗，p值均＜0．05，由此可見癌變組織中 Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率與TNM分期具顯著相關(guān)性；而隨著癌變組織分化程度的升高，Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率均呈現(xiàn)顯著上升趨勢，經(jīng)卡方檢驗，p值均＜0．05，由此可見癌變組織中Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率與癌變組織分化程度呈現(xiàn)顯著正相關(guān)；有淋巴轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率均明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移的患者，經(jīng)卡方檢驗，P＜0．05，由此可見：Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率與結(jié)直腸癌的淋巴轉(zhuǎn)移呈現(xiàn)正相關(guān)，見表2。

表1 兩組研究對象結(jié)直腸組織中Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率比較

表2 不同病理分型間Akt、TGF－β1、mTOR表達(dá)陽性率差異比較

2．3 Akt、TGF－β1、mTOR分別及聯(lián)合用于結(jié)直腸癌診斷的性能比較：Akt、TGF－β1、mTOR三者聯(lián)合診斷結(jié)直腸癌的準(zhǔn)確度為91．7%，敏感性為90%，特異性為95%，顯著高于三者單獨用于診斷的準(zhǔn)確度、敏感性及特異性，P＜0．05差異有統(tǒng)計意義。表明：Akt、TGF－β1、mTOR三者聯(lián)合診斷結(jié)直腸癌具更高的準(zhǔn)確度，值得臨床推廣應(yīng)用，見表3。

表3 Akt、TGF－β1、mTOR分別及聯(lián)合用于結(jié)直腸癌診斷的性能比較

3 討 論

3．1 Akt與結(jié)直腸癌：Akt（也可縮寫為PKB）為絲氨酸與蘇氨酸類的蛋白激酶也叫B類蛋白類激酶［7］，包括480個左右的氨基酸殘基，對機體細(xì)胞的繁殖及凋亡起著重要的調(diào)控作用。Akt主要通過磷酸活化一些細(xì)胞的關(guān)鍵調(diào)控因子（白介素家族、mTOR等因子）間接對細(xì)胞的生理代謝與凋亡起到調(diào)節(jié)作用，而pAkt則為Akt磷酸活化調(diào)控因子后的產(chǎn)物，當(dāng)前眾多研究將Akt及pAkt共同作為癌變組織診斷的評定指標(biāo)［8］，且診斷的特異性、敏感性及準(zhǔn)確度均較高。本次研究也證實了這一觀點，研究中發(fā)現(xiàn)Akt在結(jié)直腸癌組織癌變組的表達(dá)陽性率明顯高于非癌變組，且在各分期、分化程度、是否淋巴轉(zhuǎn)移的病理分型中均表現(xiàn)出顯著差異，由此可以得出結(jié)論：Akt與結(jié)直腸癌及病情發(fā)展有明顯相關(guān)性。

3．2 TGF－β1與結(jié)直腸癌：TGF－β1為一種對癌細(xì)胞生長增殖分化周期等具有調(diào)控作用的多肽鏈，其主要通過與受體結(jié)合后發(fā)揮作用。研究證實：TGF－β1與相應(yīng)受體結(jié)合后主要通過介導(dǎo)smads的信號通路以間接對細(xì)胞起到調(diào)控作用［9］，但研究尚未得出其明確的作用機制。研究報道：TGF－β1對癌變細(xì)胞具有雙重調(diào)控作用，一方面在惡性腫瘤早期，：TGF－β1會對腫瘤細(xì)胞的分裂、擴散、生長等起的抑制作用，另一方面當(dāng)腫瘤細(xì)胞累積到一定的范圍與數(shù)量時，TGF－β1對腫瘤細(xì)胞失去調(diào)控能力，腫瘤細(xì)胞開始無限制的生長及分裂，與此同時，TGF－β1能夠刺激腫瘤血管的生長，為腫瘤細(xì)胞的繁殖提供足夠的養(yǎng)料和血液，由此我們可以推測，TGF－β1可能與癌變組織的病情發(fā)展程度相關(guān)。大量研究證實：TGF－β1蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌變、前列腺癌變、膀胱癌變、乳腺癌變、宮頸癌變等多種惡性腫瘤疾病有關(guān)，癌變組織中TGF－β1的蛋白表達(dá)陽性率明顯高于非癌變相應(yīng)組織。本次研究證實：結(jié)直腸癌變組的TGF－β1蛋白表達(dá)陽性率明顯高于對照組，且隨著分期不同，分化程度不同，以及是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，TGF－β1的表達(dá)陽性率均呈現(xiàn)顯著差異，由此可見：TGF－β1與結(jié)直腸癌及病情發(fā)展有明顯相關(guān)性。

3．3 mTOR與結(jié)直腸癌：mTOR為一類蛋白質(zhì)物質(zhì)，對人體蛋白質(zhì)的合成及細(xì)胞的生長分裂起著重要的調(diào)節(jié)作用。研究證實：mTOR通過介導(dǎo)細(xì)胞生長分裂時所需的養(yǎng)料及氧氣對其發(fā)揮調(diào)控作用，除此，mTOR信號通路在mTOR調(diào)控細(xì)胞中也起著關(guān)鍵性的作用，mTOR信號通路通過控制mTOR的表達(dá)量間接調(diào)控細(xì)胞，這便與TGF－β1（可通過介導(dǎo)smads的信號通路以間接對細(xì)胞起到調(diào)控作用）調(diào)控癌變細(xì)胞生長分裂作用有了交集。另外mTOR對癌變細(xì)胞的凋亡起著顯著的調(diào)控作用：mTOR能夠明顯降低細(xì)胞抗凋亡因子的活性，并促進(jìn)促凋亡因子的表達(dá)，從而促進(jìn)癌變細(xì)胞的死亡。相關(guān)研究證實：mTOR的表達(dá)與多種組織癌變具有正相關(guān)性作用，而在本次研究中證實了此結(jié)論的正確性，研究中顯示：癌變組織中mTOR的蛋白表達(dá)陽性率明顯高于非癌變相應(yīng)組織。本次研究證實：結(jié)直腸癌變組的mTOR蛋白表達(dá)陽性率明顯高于對照組，且隨著分期不同，分化程度不同，以及是否發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，mTOR的表達(dá)陽性率均呈現(xiàn)顯著差異，由此可見：mTOR與結(jié)直腸癌及病情發(fā)展有明顯相關(guān)性。

本次研究還對Akt、TGF－β1、mTOR三者聯(lián)合及單獨用于結(jié)直腸癌診斷的準(zhǔn)確度、敏感性、特異性進(jìn)行了比較，證實三者聯(lián)合診斷的準(zhǔn)確度、敏感性、特異性明顯高于單獨檢測。由此，綜上所有分析：Akt、TGF－β1、mTOR三者的表達(dá)與結(jié)直腸癌發(fā)病具顯著相關(guān)性，且隨著TNM分期、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移情況不同而表現(xiàn)顯著差異，且三者聯(lián)合用于結(jié)直腸癌病情程度的診斷具有較高的敏感性、特異性及準(zhǔn)確度，因此Akt、TGF－β1、mTOR三者表達(dá)的聯(lián)合檢測可能對結(jié)直腸癌變的病理程度及治療有一定的指導(dǎo)意義。

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