孫 浩 譚志軍 孔 營(yíng)

（1．濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院 山東濟(jì)寧 272011；2．天津市第一中心醫(yī)院普外科 天津 300192）

近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素（Adiponectin，ADP）與肥胖相關(guān)性腫瘤的密切相關(guān)。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)脂聯(lián)素與結(jié)腸癌之間的關(guān)系進(jìn)行了研究，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為脂聯(lián)素與結(jié)腸癌有明顯的相關(guān)性。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)人脂聯(lián)素重組體對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT－29生長(zhǎng)的體外細(xì)胞學(xué)研究進(jìn)一步證實(shí)脂聯(lián)素對(duì)結(jié)腸癌的抑制作用。

1 材料與方法

1．1 MTT法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)：選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人結(jié)腸癌HT－29細(xì)胞常規(guī)消化后，調(diào)整細(xì)胞密度1×105／ml，接種于96孔板，每孔細(xì)胞數(shù)為2×104，培養(yǎng)過(guò)夜。加入不同濃度的人脂聯(lián)素重組體，終體積為200μl，繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組（10%PBS）和4個(gè)濃度梯度（2．5、5、10、15μg／ml）脂聯(lián)素重組體實(shí)驗(yàn)組。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔加入20μl濃度為5mg／ml的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h。以2000rpm離心10分鐘，棄上清，每孔加入100μl的DMSO，震蕩10min，酶標(biāo)儀于492nm測(cè)定光密度值（D492）。每次每種條件做3個(gè)平行孔，重復(fù)3次。計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率（細(xì)胞增殖抑制率=（對(duì)照組D492一實(shí)驗(yàn)組D492）／對(duì)照組D492×100%）。

1．2 細(xì)胞劃痕法實(shí)驗(yàn)：將人結(jié)腸癌HT－29細(xì)胞常規(guī)消化后，以106個(gè)細(xì)胞／孔、10%FBS／DMEM種植于六孔板內(nèi)過(guò)夜培養(yǎng)。次日用100μl微量移液頭在六孔板內(nèi)垂直劃痕，培養(yǎng)液沖洗2次后加入含有不同濃度人脂聯(lián)素重組體的無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)48h。設(shè)計(jì)濃度為5、10、15、20μg／ml。倒置相差顯微鏡下網(wǎng)格目鏡觀察，隨機(jī)選擇5個(gè)100倍視野下大網(wǎng)格內(nèi)計(jì)算遷移的細(xì)胞總數(shù)。

2 結(jié) 果

2．1 脂聯(lián)素重組體對(duì)HT－29細(xì)胞增殖的影響，見(jiàn)表1。

表1 各濃度脂聯(lián)素對(duì)HT－29細(xì)胞的抑制率

2．2 脂聯(lián)素重組體對(duì)HT－29細(xì)胞遷移的影響，見(jiàn)表2。

表2 各濃度脂聯(lián)素對(duì)HT－29細(xì)胞遷移的影響（培養(yǎng)24h后）

3 討 論

在結(jié)腸癌的研究中，大多數(shù)病例對(duì)照研究認(rèn)為血清脂聯(lián)素水平與結(jié)腸癌的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)［1－2］。

本研究中我們用MTT法檢測(cè)脂聯(lián)素重組體對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖活性的影響，觀察到隨著脂聯(lián)素濃度的升高D492逐漸下降，即抑制效應(yīng)隨濃度升高而增大；細(xì)胞劃痕法實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到加入脂聯(lián)素的培養(yǎng)基中HT－29細(xì)胞增殖明顯受到抑制，且隨濃度的增大細(xì)胞數(shù)逐漸減少。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了脂聯(lián)素可抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HT－29的體外增殖和侵襲，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

［1］ Gialamas SP，Petridou ET，Tseleni－Balafouta S，et a1．Serum adiponectin levels and tissue expression of adiponectin receptors are associated with risk，stage，and grade of colorectal cancer［J］．Metabolism．2011；60（11）：1530－8．

［2］ Otake S，Takeda H，F(xiàn)ujishima S，et al．Decreased levels of plasma adiponectin associated with increased risk of colorectal cancer．World J Gastroenterol．2010，14；16（10）：1252－1257．