雷公藤內(nèi)酯醇對大鼠腦出血后神經(jīng)功能及腦水腫的影響

陳龍飛李智文陳啟文1劉月娥2林艾羽

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，福建福州350005)

摘要〔〕目的研究雷公藤內(nèi)酯醇對腦出血大鼠神經(jīng)功能及腦水腫的影響。方法60只雄性SD大鼠隨機分為干預(yù)組、對照組和假手術(shù)組。干預(yù)組和對照組采用Ⅳ型膠原酶肝素生理鹽水尾狀核立體定向注射法建立大鼠腦出血模型，假手術(shù)組大鼠注射生理鹽水，干預(yù)組腹膜腔內(nèi)注射雷公藤內(nèi)酯醇(0.2 mg ·kg-1·d-1)，連續(xù)7 d。在術(shù)后每日進(jìn)行1次Longa神經(jīng)功能缺損評分，在術(shù)后第2天和第7天進(jìn)行血常規(guī)、肝腎功能檢測和腦組織含水量測定。結(jié)果干預(yù)組在術(shù)后第2天，第5天和第7天的Longa神經(jīng)功能缺損評分低于對照組；干預(yù)組術(shù)后第2天腦組織含水量較對照組明顯下降；3組大鼠術(shù)后第2天和第7天血常規(guī)、肝腎功能無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，但干預(yù)組第7天個別樣本血ALT明顯升高。結(jié)論雷公藤內(nèi)酯醇(0.2 mg ·kg-1·d-1)可以減輕大鼠腦出血急性期腦水腫，部分改善神經(jīng)功能，但仍需注意毒副作用。

關(guān)鍵詞〔〕雷公藤內(nèi)酯醇；腦出血；腦水腫

中圖分類號〔〕R743.34〔

基金項目：福建省衛(wèi)生廳青年科研課題(2010-2-32)

1福建省武平縣醫(yī)院康復(fù)科2福建醫(yī)科大學(xué)2000級研究生

第一作者：陳龍飛(1975-),男,碩士,主治醫(yī)師,主要從事腦血管病和癡呆研究。

研究表明，腦出血后發(fā)生的炎癥反應(yīng)參與了腦損傷，是腦出血患者病情進(jìn)一步發(fā)展惡化的重要原因〔1，2〕。雷公藤是迄今為止發(fā)現(xiàn)的抗炎作用最強的中藥，雷公藤內(nèi)酯醇是雷公藤多甙中的主要活性成分，并能有效透過血腦屏障發(fā)揮作用。本研究旨在觀察雷公藤內(nèi)酯醇對大鼠腦出血后腦水腫及神經(jīng)功能的影響。

1材料與方法

1.1動物清潔級雄性SD大鼠60只，體重(300±20)g。隨機分為假手術(shù)組、對照組和干預(yù)組，每組各20只大鼠。每組在術(shù)后第2天和第7天各處死10只大鼠。

1.2方法

1.2.1藥品與試劑雷公藤內(nèi)酯醇對照品購于中國食品藥品檢定研究所，Ⅳ型膠原酶購于Sigma公司，肝素鈉注射液為南京新百藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。

1.2.2動物模型的建立參照文獻(xiàn)〔3，4〕，采用Ⅳ型膠原酶肝素生理鹽水尾狀核立體定向注射法建立大鼠腦出血模型。大鼠術(shù)前禁食12 h，禁水4 h，以10%水合氯醛(400 mg/kg)腹腔注射麻醉后，以用鑷子夾大鼠后腿，以其無退縮反應(yīng)為宜。將大鼠固定于立體定位儀上，頭頂部去毛，消毒皮膚，頭頂部正中切口，暴露前囟。參照大鼠腦立體定位圖譜，于前囟后1.0 mm，向右側(cè)旁開3.0 mm處，用牙科鉆鉆一小孔，并用微量注射器從小孔處自腦表面垂直進(jìn)針5.5 mm，緩慢注射2 μl藥物溶液。對照組和干預(yù)組均給予注射Ⅳ型膠原酶肝素生理鹽水溶液(1 μl含Ⅳ型膠原酶0.2 U、肝素2 U)；假手術(shù)組給予注射生理鹽水。注射后留針2 min，緩慢退針，縫合切口。術(shù)中大鼠肛溫保持在36.5℃～37.5℃。

1.2.3藥物干預(yù)干預(yù)組每日給予腹膜腔注射含雷公藤內(nèi)酯醇(0.2 mg·kg-1·d-1)的2%丙二醇生理鹽水溶液，對照組和假手術(shù)組給予每日腹膜腔注射2%丙二醇生理鹽水溶液。

1.2.4功能缺損評分大鼠在喂養(yǎng)觀察期間，每日進(jìn)行1次Longa等5分法進(jìn)行大鼠神經(jīng)功能缺損評分〔5〕：0分，無神經(jīng)損傷癥狀；1分，不能完全伸展對側(cè)前爪或后爪；2分，向手術(shù)對側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分，向手術(shù)對側(cè)傾倒；4分，不能自發(fā)行走，意識喪失。

1.2.5血常規(guī)和肝腎功能檢測在術(shù)后第2天和第7天，以10%水合氯醛腹膜腔注射麻醉后，剪開胸壁暴露胸腔，迅速從心臟內(nèi)取血。使用邁瑞 BC-3000全自動血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)及血小板(PLT)測定。使用日立-7150全自動生化分析儀進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、尿素(BUN)、肌酐(CREA)測定。

1.2.6腦含水量測定通過檢測腦含水量來反映腦水腫情況〔6〕。在術(shù)后第2天和第7天，以10%水合氯醛腹膜腔注射麻醉后處死大鼠，取出大腦半球，沿腦橋上界水平切斷，然后沿中線切開，分離兩側(cè)大腦半球，用濾紙將腦組織表面的液體吸干后，在電子分析天秤上稱取濕重，然后放入65℃烤箱中烘烤48 h后稱取干重。腦含水量=(濕重-干重)/濕重×100%〔6〕。

2結(jié)果

2.1大鼠神經(jīng)功能缺損評分對照組與干預(yù)組大鼠Longa神經(jīng)功能缺損評分均較假手術(shù)組明顯增高(P<0.01)，并且在術(shù)后第2天達(dá)高峰。與對照組相比，干預(yù)組在術(shù)后第2天，第5天和第7天的Longa神經(jīng)功能缺損評分低于對照組(P<0.05)。見表1。

2.2大鼠血常規(guī)、肝腎功能在術(shù)后第2天和第7天，3組大鼠間血常規(guī)(HGB、RBC、WBC和PLT)、肝功能(ALT)和腎功能(BUN、CREA)測定無明顯差異(表2、表3)，但在術(shù)后第7天，干預(yù)組1只大鼠血ALT達(dá)450.66 U/L,明顯高于其他3組大鼠。

2.3大鼠腦組織含水量比較術(shù)后第2天，干預(yù)組〔(79.87±1.47)%〕和對照組〔(81.33±1.25)%〕腦組織含水量均較假手術(shù)組〔(77.95±1.54)%〕明顯增高(P<0.05，P<0.01)，但干預(yù)組腦組織含水量較對照組明顯下降(P<0.05)；術(shù)后第7天，3組腦組織含水量無明顯差異，假手術(shù)組、對照組、干預(yù)組分別為〔(78.26±2.11)%、(79.43±1.49)%、(78.53±1.62)%〕(P<0.05)。

表1　術(shù)后各組大鼠Longa神經(jīng)功能缺損評分

與假手術(shù)組比較：1)P<0.01；與對照比較：2)P<0.05

表2　術(shù)后第2天各組大鼠血常規(guī)、肝腎功能比較 ± s, n=10)

表3　術(shù)后第7天各組大鼠血常規(guī)、肝腎功能比較 ± s， n=10)

3討論

腦出血的病理生理機制是復(fù)雜的。炎癥反應(yīng)在腦出血后次級損傷中發(fā)揮重要作用，是腦出血患者病情進(jìn)一步發(fā)展惡化的重要原因。這個病理過程涉及中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤，小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，產(chǎn)生和釋放大量的炎癥趨化因子、細(xì)胞因子和反應(yīng)性氧自由基，破壞血腦屏障，加重腦水腫，誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡〔1，2〕。本研究成功模擬了腦出血后神經(jīng)功能損害過程。

如果能有效抑制腦出血后炎癥過程，就有可能減少炎癥所造成的次級損傷，改善腦出血后神經(jīng)功能。國內(nèi)外學(xué)者曾選用米諾環(huán)素、姜黃素、環(huán)磷酰胺等藥物，可以減輕動物模型腦出血后的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)，減輕血腦屏障破壞、腦水腫和神經(jīng)功能缺損，改善預(yù)后〔6，7〕。雷公藤是衛(wèi)矛科植物，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的抗炎作用最強的中藥，其化學(xué)成分主要是二萜、三萜、倍半萜、生物堿等。雷公藤內(nèi)酯醇是雷公藤中最主要的活性成分，并且能夠透過血腦屏障〔8〕，進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮其抗炎作用。已有報道，雷公藤內(nèi)酯醇可以抑制大鼠腦缺血再灌注模型和阿爾茨海默病模型等中樞神經(jīng)系統(tǒng)急慢性病理條件下炎癥細(xì)胞的活化和炎癥因子的表達(dá)，減輕神經(jīng)功能損害〔9，10〕。本研究說明雷公藤內(nèi)酯醇(0.2 mg·kg-1·d-1)可以減輕大鼠腦出血后急性期腦水腫，部分改善神經(jīng)功能，這可能與雷公藤內(nèi)酯醇的抗炎癥作用有關(guān)。

本實驗提示雷公藤內(nèi)酯醇(0.2 mg·kg-1·d-1)對肝功能潛在的影響，這與丁虹等〔11〕研究發(fā)現(xiàn)肝損害是大劑量雷公藤內(nèi)酯醇主要急性毒性反應(yīng)相一致。

本研究證實，雷公藤內(nèi)酯醇可以減輕大鼠腦出血急性期腦水腫，部分改善神經(jīng)功能，但仍需注意可能的毒副作用。如何在保持雷公藤內(nèi)酯醇有效生物活性的同時減輕其毒性，是今后研究者仍需要解決的問題。

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〔2013-08-23修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)