天冰調督膠囊對激怒應激模型大鼠食欲口味、情感行為的影響

丁梅裴林1李胡廣1馬學偉1馬宗敏1苗文麗1

(唐山市第九醫(yī)院，河北唐山063000)

摘要〔〕目的觀察天冰調督膠囊對激怒應激模型大鼠食欲口味、情感行為的影響。方法60只Wistar雄性大鼠隨機分6組，除正常組外，其余5組采用長海綿鉗夾尾、捆綁及捆綁后合籠的綜合方法制造大鼠肝胃不和證模型，連續(xù)造模14 d。自造模第7天起藥物干預治療，并測量大鼠食量，兩瓶法測攝入液體總量。治療第7天開始礦場實驗和拒俘行為觀察，抬高迷宮試實驗和Y迷宮測試。結果與模型組相比，各治療組食量上升、飲水量增多；各治療組曠場活動性積分下降，拒俘反應積分明顯改善；開放臂中逃避時間減少；Y迷宮實驗各治療組選擇錯誤數(shù)明顯減少。結論天冰調督膠囊能改善大鼠焦慮抑郁狀態(tài)。

關鍵詞〔〕天冰調督膠囊；激怒應激；肝胃不和；情感行為

中圖分類號〔〕R285.5〔

基金項目：國家中醫(yī)藥管理局科研

通訊作者：裴林(1961-)，男，主任醫(yī)師，碩士生導師，主要從事神經精神疾病研究。

1河北省中醫(yī)藥研究院

第一作者：丁梅(1963-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事臨床藥學研究。

隨著社會的發(fā)展，人們生活節(jié)奏的加快，壓力加大，精神情緒應激引起的疾病逐年增多，天冰調督膠囊對精神情緒應激引起的疾病具有很好的療效，本研究探討其可能的作用機制。

1材料與方法

1.1實驗動物清潔級雄性Wistar大鼠60只，購于河北醫(yī)科大學動物中心(合格證編號：2006140)，起始體重(200±20) g，適應性喂養(yǎng)1 w，分為6籠，每籠10只。實驗前自由飲食進水，溫度控制在22℃～25 ℃，12 h光照/黑暗條件。

1.2藥物天冰調督膠囊組成為柴胡、桂枝、天麻、全蝎、黃連、絞股藍等。批準文號為冀藥制字Z20050746，按照國家標準〔1〕配制。柴胡疏肝散各藥飲片由河北省中醫(yī)藥研究院飲片廠提供。黛力新：丹麥靈北醫(yī)藥公司(國藥準字H20020474)，規(guī)格：糖衣片，含0.5 mg氟哌噻噸以及10 mg美利曲辛。各藥臨用時用10%阿拉伯膠配成懸濁液，灌胃時溫服。

1.3實驗儀器交替電刺激Y迷宮(北京碩林苑科技有限公司)。礦場行為觀察箱：按文獻方法〔2，3〕自制，為無頂木盒規(guī)格為60 cm×60 cm×60 cm，箱底用墨線分成36個等份小方格。抬高迷宮〔4〕：由兩個開放臂和兩個環(huán)繞臂相互垂直組成，環(huán)繞臂由15 cm高涂黑的臂環(huán)繞，每臂寬15 cm，長50 cm，黑色橡膠覆蓋在儀器底部，此迷宮抬高距離地面70 cm。

1.4實驗方法

1.4.1造模方法60只Wistar雄性大鼠隨機分6組，即正常組、模型組、黛力新組、天冰調督低量組、天冰調督高量組。除正常組外，其他各組大鼠參考并綜合有關激怒刺激法〔5〕：①長海綿鉗夾大鼠尾遠端1/3處，令其暴怒，每次30 s刺激，隔3 h刺激1次，2次/d。為避免炎癥，控制感染，用0.5%強力碘涂擦受傷部位。②捆綁：將鼠兩前肢及后肢分別捆綁放置，每鼠每次30 min，1次/d；③捆綁松解后合籠，大鼠尋機與其他大鼠廝打，以激怒其他大鼠，30 min后取出，單籠飼養(yǎng)觀察，連續(xù)造模14 d。

1.4.2給藥方法于造模第7天開始， 正常組和模型組給予蒸餾水灌胃(10 ml/kg)，柴胡疏肝組給以(0.6 g/kg)濃縮液，黛力新組用(5 mg/ml)混懸液,天冰調督低量組、高劑量組用0.4、0.8 g/kg混懸液。1次/d，持續(xù)至第14天。常規(guī)喂養(yǎng)，自由進食飲水。

1.4.3大鼠進食量的測定每日上午9:00各組發(fā)放一定量鼠食，次日同時稱量剩余鼠食，計算平均值。

1.4.4礦場實驗觀察和抬高迷宮實驗礦場實驗：將各組大鼠置于觀察箱中央小方格內，記錄30 s內各組大鼠的行為活動情況，并按文獻方法〔6〕記分，以此來了解其情感行為改變。抬高迷宮實驗：大鼠放于開放臂末端，面朝環(huán)繞臂方向，利用大鼠怕高而開闊地特性，會主動向環(huán)繞臂移動。觀察并記錄各組大鼠5 min內大鼠四足離開開放臂的時間及進入的次數(shù)，作為大鼠情感行為變化指標。

1.4.5交替電刺激Y迷宮試驗以Ⅰ臂為目標臂，Ⅱ臂為錯誤臂，Ⅲ臂為起始臂，按此交替順序進行30次嘗試，每次間隔均為30 s。第1天為學習訓練階段，第2天為記憶保持階段，記憶保持階段操作與第1天相同，試驗規(guī)定大鼠受電擊后從起始臂直接逃至安全臂(紅燈亮)為“正確反應”，先進入通電臂則為“錯誤反應”，并記錄為1次錯誤，以動物選擇錯誤次數(shù)作為評價大鼠學習與記憶能力指標，通過左右交替電刺激檢測大鼠學習記憶能力。

1.5統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0進行單因素方差分析。

2結果

2.1大鼠進食量和液體攝入量造模期間正常組進食量和液體攝入量比較穩(wěn)定，各模型組進食量和液體攝入量均明顯下降；經治療后第7天，各治療組進食量和液體攝入量均明顯改善與模型組相比差異顯著(P<0.05)。見表1。

2.2曠場試驗和拒俘反應治療7 d后各實驗組與正常組相比，在礦場活動性和拒俘反應性均有顯著差異(P<0.01)；各治療組與模型組相比，曠場活動性積分明顯改善(P<0.05或P<0.01)，且以黛力新組和天冰調督高量組改善尤為明顯(P<0.01)；拒俘反應性積分柴胡疏肝散組和天冰調督高量組與模型組相比明顯改善(P<0.05)。見表2。

2.3抬高迷宮實驗治療7 d后各實驗組與正常組相比，均有顯著差異(P<0.01)；各治療組與模型組相比，開放臂中逃避時間和進入開放臂次數(shù)均明顯改善，且以天冰調督高劑量組改善尤為明顯(P<0.05或P<0.01)。見表3。

2.4Y迷宮實驗治療結束后進行Y迷宮實驗，正常組與模型組相比，在第1天和第2天選擇錯誤數(shù)均有顯著差異(P<0.01)；各治療組選擇錯誤數(shù)比模型組有所減少，且以天冰調督高劑量組改善尤為明顯(P<0.05)。見表4。

表1　各組大鼠進食量和液體攝入量比較 ± s, n=10)

與模型組比較：1)P<0.05

表2　各組大鼠曠場活動性和拒俘反應性比較 ± s, n=10)

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

表3　各組大鼠抬高迷宮實驗比較

表4　各組大鼠Y迷宮實驗比較

3討論

應激致肝胃不和證的造模方法有夾尾激怒法、捆綁激怒法、頸部帶枷單籠飼養(yǎng)法和藥物注射法等〔5，7〕。采用綜合激怒刺激法制造肝胃不和證的理論基礎源于中醫(yī)“怒則傷肝”的理論，郁怒傷肝，肝木橫逆克脾犯胃，導致肝胃不和證。實驗證明〔8，9〕，這種造模方法較好的人類肝胃不和證狀態(tài)。

交替電刺激Y迷宮通過用不同程度的電擊刺激大鼠足底，建立逃避性條件反射，使大鼠學會左右交替的工作記憶模式，從而測定其學習記憶并對完成空間記憶敏感。通過礦場活動性、拒俘反應性指標比較大鼠面對新環(huán)境的刺激，其活動水平、探索能力及焦慮狀況。抬高迷宮也是利用開場和增高的區(qū)域刺激大鼠恐懼和焦慮，使動物出現(xiàn)防護性情感反應。礦場試驗與抬高迷宮試驗在量化與分析動物恐懼、焦慮等方面已得到專家認同〔10〕，并且在以往多的實驗中得到了驗證〔3，11，12〕。

本結果表明，夾尾刺激模型大鼠具有典型焦慮、恐懼防護性情感反應，應用不同劑量調督化濁方藥干預可改善大鼠的焦慮、恐懼狀態(tài)，改善活動能力與警覺水平，結合中醫(yī)理論中有肝主疏泄，調暢情志，肝失疏泄，則出現(xiàn)焦慮、抑郁等情志異常，表明該方藥可能在一定程度上改善應激模型大鼠的情感行為異常，對治療情感行為障礙具有積極作用。

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〔2012-12-10修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)