肺腺癌中富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯(lián)受體5、上皮型和神經(jīng)型黏附素表達

久太

(青海大學附屬醫(yī)院呼吸科，青海西寧810001)

摘要〔〕目的檢測肺腺癌組織中富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯(lián)受體(LGR)5、上皮型(E-)和神經(jīng)型黏附素(N-cadherin)的表達特征。方法55例肺腺癌患者臨床資料和術(shù)后蠟塊組織作為觀察組，45例距腫物邊緣大于3 cm正常肺組織作為對照組。應(yīng)用免疫組化SP法檢測兩組中LGR5、E-和N-cadherin的表達。結(jié)果兩組中LGR5、E-和N-cadherin的陽性率差別顯著。觀察組中LGR5、E-和N-cadherin的陽性率均與腫瘤最大徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，LGR5的陽性率與伴有壞死有關(guān)，E-和N-cadherin與伴有脈管內(nèi)瘤栓相關(guān)。線性相關(guān)分析顯示觀察組中LGR5和E-cadherin的表達具有負相關(guān)性，而其他指標間未見相關(guān)性。結(jié)論肺腺癌術(shù)后組織中LGR5、E-和N-cadherin均表達異常，三者對腫瘤的形成和腫瘤的進展可能有促進作用。LGR5與E-cadherin可能具有負向協(xié)同作用。

關(guān)鍵詞〔〕肺腺癌；富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯(lián)受體(LGR)5；上皮型黏附素(E-cadherin)；神經(jīng)型黏附素(N-cadherin)；免疫組化

中圖分類號〔〕R734〔文獻標識碼〕A〔

第一作者：久太(1971-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事呼吸系統(tǒng)疾病研究。

肺腺癌的形成因素較多，如吸煙、空氣污染等，在這些致腫瘤性因素長期積累作用下，可以引發(fā)機體相關(guān)腫瘤性蛋白的異常表達，此時可以引發(fā)腫瘤的形成和進展〔1〕。富含亮氨酸重復序列G-蛋白耦聯(lián)受體(LGR)5是WNT信號途徑的靶基因，是一種跨膜糖蛋白激素受體，其不僅可以標記干細胞，還對腫瘤分化形成中不同階段的細胞有一定的標記作用〔2,3〕。上皮型(E-)和神經(jīng)型黏附素(N-cadherin)是黏附素家族中的重要蛋白，對腫瘤轉(zhuǎn)移具有重要調(diào)節(jié)作用。正常情況下二者能維持上皮的正常形態(tài)和功能，二者異常表達可以明顯調(diào)節(jié)腫瘤性進展〔4,5〕。本實驗探討肺腺癌術(shù)后組織中LGR5、E-和N-cadherin的表達特征。

1資料與方法

1.1一般資料2011年1月至2013年12月行肺腺癌手術(shù)及淋巴結(jié)清掃患者的臨床資料作為觀察組，留取腫瘤的蠟塊組織共55例，切片經(jīng)病理醫(yī)生閱片并確診，并符合WHO中肺腫瘤病理學和遺傳學的診斷標準。其中男29例，女26例；年齡50～87歲，平均(63.2±7.9)歲；留取上述患者距腫物邊緣大于3 cm，經(jīng)病理醫(yī)師閱片證實為正常肺組織的45例作為對照組，其中男23例，女22例；年齡52～84歲，平均(65.6±7.0)歲。兩組常規(guī)資料差異無顯著性。

1.2LGR5、E-和N-cadherin的檢測方法LGR5、E-和N-cadherin抗體均應(yīng)用0.1 ml的濃縮液。首先按不同稀釋濃度進行相關(guān)預實驗，選擇染色最清晰的濃度用于正式實驗。應(yīng)用免疫組化SP法，按說明書操作，減少誤差，做好質(zhì)控工作。

1.3LGR5、E-和N-cadherin結(jié)果的判讀標準LGR5陽性部位定位于細胞質(zhì)，多靠近細胞核，E-和N-cadherin的陽性部位定位于細胞膜，均以染成棕黃色為陽性細胞。選擇上皮細胞密集的區(qū)域進行計數(shù)，選擇3個400倍視野，計數(shù)陽性細胞的百分率，取平均值。<10%為陰性，≥10%為陽性。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗和線性相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1兩組LGR5、E-和N-cadherin陽性率的比較兩組LGR5、E-和N-cadherin陽性率差別顯著(P<0.000 1)。見表1。

表1　兩組LGR5、E-和N-cadherin

2.2觀察組中LGR5、E-和N-cadherin在不同臨床特征中的比較觀察組中LGR5、E-和N-cadherin的陽性率均與腫瘤最大徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，LGR5的陽性率與壞死有關(guān)，E-和N-cadherin與脈管內(nèi)瘤栓相關(guān)。見表2。

表2　觀察組中LGR5、E-和N-cadherin

2.3觀察組中LGR5、E-和N-cadherin的相關(guān)性LGR5和E-cadherin的表達負相關(guān)(r=-0.45,P=0.043 5)，而其他指標間不相關(guān)(P>0.05)。

3討論

肺腺癌在許多國家已超過鱗狀上皮細胞癌成為肺癌中最常見的類型。肺腺癌是指具有腺樣分化或有黏液產(chǎn)生，表現(xiàn)為腺泡樣、乳頭樣、細支氣管肺泡樣，并具有黏液形成的實性巢或以這些形式混合生長的惡性上皮源性腫瘤。肺腺癌很少位于中央，常表現(xiàn)周圍型的結(jié)節(jié)〔6〕。病變進展中出現(xiàn)相關(guān)蛋白表達失調(diào)。LGR5又名GPR49、HG38，是7次跨膜蛋白，其胞外區(qū)含有與糖蛋白配體作用的17個富含亮氨酸重復序列〔7,8〕，近來有研究顯示LGR5的配體為R脊椎蛋白，兩者的結(jié)合可以增強WNT信號通路的傳導，可以對干細胞的生長起重要調(diào)節(jié)作用〔9,10〕。也有觀點認為LGR5可以被WNT信號靶基因激活，引發(fā)轉(zhuǎn)錄作用〔11,12〕。柴寧莉等〔13〕認為LGR5在大腸癌中高表達，其與臨床病理特征相關(guān)，LGR5尤其是在病變發(fā)生過程中起重要作用。費夢等〔14〕認為LGR5甲基化與上皮性卵巢癌的分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，LGR5可以作為上皮性卵巢癌生存率的判斷指標。鈣黏附素與腫瘤的關(guān)系密切，尤其是腫瘤轉(zhuǎn)移的形成過程。鈣黏附素至少包括9個成員，主要參與介導鈣離子依賴的同型細胞間的黏附，在維持正常組織結(jié)構(gòu)方面起著重要作用〔15〕。E-cadherin是介導同型細胞相互黏附的跨膜糖蛋白〔16〕。在正常組織中E-cadherin表達高且穩(wěn)定，不僅有調(diào)節(jié)原始胚胎組織發(fā)育的作用，還對保持細胞、組織的完整性有重要價值。當E-cadherin的表達丟失時，可以使同質(zhì)類型細胞間的黏附作用下降，使細胞易于遷移〔17〕。N-cadherin最初發(fā)現(xiàn)存在于神經(jīng)組織和成纖維細胞，介導細胞與細胞間的動態(tài)黏附作用〔18〕。N-cadherin的功能可能具有多樣化的特點，如介導細胞間信號的傳遞、啟動子的激活、增殖的調(diào)控和細胞的遷移等〔19〕。

本實驗結(jié)果提示LGR5和N-cadherin高表達、E-cadherin低表達可以促進腫瘤的形成過程。LGR5的此種過程可能與促進腫瘤的異型增生和失控性增殖有關(guān)，也與其調(diào)節(jié)的干細胞活化、分化程度及WNT信號傳導通路有關(guān)〔20〕。E-和N-cadherin對腫瘤的調(diào)節(jié)過程可能不完全相同，主要表現(xiàn)為E-cadherin是介導腫瘤細胞內(nèi)黏附的調(diào)節(jié)，而N-cadherin主要介導間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，或者是在腫瘤細胞與異源性的間質(zhì)相結(jié)合中發(fā)揮作用。本文結(jié)果提示LGR5、E-和N-cadherin異常表達可以參與腫瘤的生長和淋巴道播散，此過程與三種蛋白的直接作用有明顯關(guān)聯(lián)。LGR5高表達可以促進腫瘤性的壞死過程，也使腫瘤細胞的惡性表像和惡性生物學行為增加。E-cadherin低表達、N-cadherin高表達是腫瘤細胞侵入脈管的一個高的危險因素。肺腺癌中LGR5和E-cadherin的表達具有明顯的協(xié)同負向作用。當LGR5高表達引起E-cadherin表達下降后，使細胞間的連接緊密程度下降，細胞間更為松散〔21〕，對腫瘤細胞的遷移形成重要促進條件。

4參考文獻

1陳群慧,張杰,葉曉丹,等.磨玻璃密度肺小腺癌病理亞型的〔J〕.中國醫(yī)學計算機成像雜志,2011;17(4):307-12.

2Morgan RG,Molnar E,Jones RF,etal.Nutrient stress alters the glycosylation status of LGR5 resulting in reduced protein stability and membrane localization in colorectal tumour cells:implications for targeting cancer stem cells〔J〕.Brit J Cancer,2015;112(4):714-9.

3Nakata S,Campos B,Bageritz J,etal.LGR5 is a marker of poor prognosis in glioblastoma and is required for survival of brain cancer stem-like cells〔J〕.Brain Pathol,2013;23(1):60-72.

4谷化平,尚培中,倪燦榮.CD44v6 和 E-cadherin 表達與結(jié)直腸癌浸潤轉(zhuǎn)移關(guān)系〔J〕.臨床與實驗病理學雜志,2004;19(3):270-2.

5包俊杰,吳誠義.E-cadherin,N-cadherin 與 CD44+/CD24-/low 表型在乳腺癌中表達的相關(guān)性及其意義〔J〕.中國癌癥雜志,2010;20(8):596-601.

6馮瑞娥.最新國際肺腺癌多學科分類中的病理分類及其臨床意義〔J〕.中華結(jié)核和呼吸雜志,2012;35(2):95-6.

7Williams CM,Harper JL,Huang H,etal.In vivo and in vitro stem cell models suggest a role for LGR5 in regulating intestinal epithelial lineage specification〔J〕.Cancer Res,2013;73(8):2644-5.

8張曉峰,張連峰,程鵬.胃腺癌組織中 Lgr5 和 Wnt1 蛋白的表達〔J〕.鄭州大學學報(醫(yī)學版),2014;5(5):27-8.

9Kobayashi S,Yamada-Okabe H,Suzuki M,etal.LGR5-positive colon cancer stem cells interconvert with drug-resistant LGR5-negative cells and are capable of tumor reconstitution〔J〕.Stem Cells,2012;30(12):2631-44.

10Takahashi T,Ohnishi H,Sugiura Y,etal.Non-neuronal acetylcholine as an endogenous regulator of proliferation and differentiation of Lgr5-positive stem cells in mice〔J〕.FEBS J,2014;281(20):4672-90.

11付焱,劉志蘇,江從慶,等.腸道干細胞標記基因 Lgr5 在結(jié)直腸癌中的表達及其意義〔J〕.中華實驗外科雜志,2011;28(7):1142-4.

12Schepers AG,Vries R,van den Born M,etal.Lgr5 intestinal stem cells have high telomerase activity and randomly segregate their chromosomes〔J〕.EMBO J,2011;30(6):1104-9.

13柴寧莉,張文成,王艷敏,等.LGR5和CD44在腸息肉和結(jié)直腸癌中的表達及意義〔J〕.南方醫(yī)科大學學報,2013;33(7):972-6.

14費夢,張傳宏.LGR5啟動子甲基化在上皮性卵巢癌中的表達及臨床意義〔J〕.長江大學學報(自然科學版),2012;9(10):6-9.

15馮延平,黃濤,高軍,等.EphA2 與 E-cadherin 在胰腺癌中的表達及其意義〔J〕.中國普通外科雜志,2006,14(12):914-7.

16吳卉娟,劉少揚,江大瓊,等.宮頸癌中 COX-2 與 p53,E-cadherin 蛋白表達的關(guān)系〔J〕.臨床與實驗病理學雜志,2005;20(5):568-71.

17洪士開,陸云飛,陳俊強,等.Twist,E-cadherin 和 N-cadherin 在胃癌的表達及其意義〔J〕.廣東醫(yī)學,2010;31(3):344-6.

18楊猛,劉霞,趙恭華,等.N-cadherin,MMP-9 在直腸癌中表達的臨床意義〔J〕.腫瘤防治研究,2005;32(2):105-7.

19占大錢,黃志勇,紀桂寶,等.N-cadherin,β-連環(huán)素在肝癌組織中的表達及與 Wnt 信號途徑的關(guān)系〔J〕.中華實驗外科雜志,2011;28(9):1473-4.

20Haegebarth A,Clevers H.Wnt signaling,lgr5 and stem cells in the intestine and skin〔J〕.Am J Pathol,2009;174(3):715-21.

21馬怡暉,王凱,李磊,等.Twist 轉(zhuǎn)錄因子,E-鈣黏蛋白和 N-鈣黏蛋白在乳腺癌中的表達及意義〔J〕.中華病理學雜志,2010;15(1):5-9.

〔2014-03-19修回〕

(編輯苑云杰)