王志江，劉 波，梁麗麗，孫秀梅

（1.山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺 256200；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355）

黃芩醇提乙醇濃度的優(yōu)選

王志江1，劉 波1，梁麗麗1，孫秀梅2

（1.山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺 256200；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355）

黃芩；比例分割法；醇沉

醇提法是20世紀(jì)50年代開始應(yīng)用的中藥提取方法，該方法對中藥的多數(shù)已知有效成分如生物堿類、黃酮類、皂苷類、萜類等的提取率比水提法高，因此也是目前應(yīng)用較普遍的提取方法之一。通過調(diào)節(jié)乙醇濃度，可以選擇性浸提藥材中某些有效成分或有效部位。本實(shí)驗(yàn)以分子量≤1 000 Da提取物、黃芩苷、黃芩素、總黃酮、HPLC峰總面積為綜合評判指標(biāo)，在含醇量30.00%～80.00%之間優(yōu)選黃芩較佳醇提濃度。

1 儀器與藥品

精密pH計（pHS-3C型，上海雷磁儀器廠）；電子分析天平（MA110型，上海第二分析儀器廠）；高效液相色譜儀（1100系列，美國AgiLent公司）；紫外分析儀（UV3010型，日立公司）；醫(yī)用超聲波清洗器（KQ-250E型，昆山市超聲儀器有限公司）；中空纖維超濾膜（DH-系列，上海德宏生物醫(yī)學(xué)科學(xué)科技發(fā)展有限公司）。

中藥經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)張兆旺教授鑒定，黃芩為唇形科植物黃芩干燥根的機(jī)切薄片。

黃芩苷（批號：110715－200815）、黃芩素（批號：111595－ 200604）均購自中國藥品生物制品鑒定所；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品液的制備

取黃芩粗粉（10～20目之間）30 g，分別用不同濃度（30.00%、55.00%和80.00%）的乙醇提取3次（加醇量依次為黃芩重量的10倍、8倍、8倍，浸泡30分鐘），提取時間分別為2小時、1小時、1小時。分別將3煎提取液依次粗濾，離心（3 500 r/min，25分鐘），用一定規(guī)格的中空纖維膜濾過，合并，濃縮，定容至500 mL制得樣品液AE（質(zhì)量濃度為60 g/L）。

2.2 供試液的制備

精密量取2.1項(xiàng)下的樣品液各5 mL，分別置于蒸發(fā)皿中，水浴濃縮蒸至近干，加硅藻土0.8 g，拌勻，干燥，研勻，轉(zhuǎn)移至干燥磨口三角瓶中，加甲醇10 mL，稱重，超聲處理30分鐘，用甲醇補(bǔ)足失重，濾過。濾液置于10 mL容量瓶中，加甲醇至10 mL，搖勻，得供試液A（質(zhì)量濃度為30 g/L），供測定黃芩苷、黃芩素含量及HPLC峰總面積。

精密量取2.1項(xiàng)下的樣品液各0.4 mL，分別水浴蒸干，殘?jiān)?0%乙醇，定容至10 mL，再從這10 mL溶液中取3 mL定容至100 mL，得供試液B（質(zhì)量濃度為0.072 g/L），供測定總黃酮含量。

2.3 比例分割

采用色譜條件：色譜柱：Diamonsil（TM）鉆石C185 μm（250× 4.6 mm）；流動相：甲醇∶磷酸∶水（47∶53∶0.2）；檢測波長：280 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30℃。分別平行進(jìn)樣3次，測得黃芩苷的峰面積[1]。

采用色譜條件：色譜柱：Diamonsil（TM）鉆石C185 μm（250× 4.6 mm）；流動相：甲醇∶0.4%醋酸水（70∶30）；檢測波長：275 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30℃。分別平行進(jìn)樣3次，測定黃芩素含量[2]。

以70%乙醇為參比溶液，278 nm為測定波長，總黃酮含量以黃芩素計算，測定總黃酮含量[3]。

采用色譜條件：色譜柱：Diamonsil（TM）鉆石C185 μm（250×4.6 mm）；流動相：A為0.4%H3PO4，B為乙腈；線性梯度洗脫時間：0～5分鐘（B：23.0%～25.0%）、5～8分鐘（B：25.0%～25.4%）、8～20分鐘（B：25.4%～25.6%）、20～25分鐘（B：25.6%～27.0%）、25～60分鐘（B：27.0%～38.0%）；檢測波長：280 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30℃。分別平行進(jìn)樣3次，測定HPLC峰總面積[4]。

精密吸取2.1項(xiàng)下樣品液各10 mL，分別置于干燥的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105℃烘至恒重，計算得率。

上述測定結(jié)果見表1～5。所得數(shù)據(jù)按公式x'i·j=（xi·j-xj）/Sj進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化（式中x'i·j是標(biāo)準(zhǔn)化后得值，xi·j為樣品液i中成分j的含量，xj為樣品液i中成分j的平均值，Sj為成分j的標(biāo)準(zhǔn)偏差），然后加權(quán)求和，綜合評判值Y順序?yàn)椋篩80.00%＞Y55.00%＞Y30.00%，見表6。保留55.00%～80.00%段。

然后取3份方藥粗粉，分別用61.25%、67.50%、73.75%濃度的乙醇提取，其余操作同上。含量結(jié)果見表1～5，標(biāo)準(zhǔn)化處理結(jié)果見表6。Y值順序?yàn)椋篩80.00%＞Y55.00%＞Y73.75%＞Y61.25%＞Y67.50%＞ Y30.00%。

表1 不同黃芩醇提液的黃芩苷含量（±s，mg/g）

表1 不同黃芩醇提液的黃芩苷含量（±s，mg/g）

醇沉濃度（%）3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0測得值（m g / g）第一次 第二次 第三次2 2 . 9 0 2 2 3 . 5 4 5 2 2 . 2 3 9 2 9 . 3 4 4 3 0 . 5 1 1 2 9 . 8 1 4 2 4 . 6 2 7 2 3 . 6 9 2 2 4 . 1 6 3 2 1 . 3 1 3 2 1 . 8 8 5 2 2 . 3 4 6 2 4 . 6 7 6 2 5 . 7 2 7 2 5 . 1 9 7 3 2 . 7 7 6 3 1 . 7 4 4 3 2 . 1 9 8平均含量2 2 . 8 9 5 ± 0 . 6 5 3 0 2 9 . 8 9 0 ± 0 . 5 8 7 2 2 4 . 1 6 1 ± 0 . 4 6 7 5 2 1 . 8 4 8 ± 0 . 5 1 7 5 2 5 . 2 0 0 ± 0 . 5 2 5 5 3 2 . 2 3 9 ± 0 . 5 1 7 2 R S D（%）2 . 8 5 1 . 9 6 1 . 9 4 2 . 3 7 2 . 0 9 1 . 6 0

表2 不同黃芩醇提液的黃芩素含量（±s，mg/g）

表2 不同黃芩醇提液的黃芩素含量（±s，mg/g）

醇沉濃度（%）平均含量第一次 第二次 第三次測得值（m g / g）3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0 1 . 3 5 9 1 . 3 5 3 1 . 3 5 7 2 . 4 5 6 2 . 4 8 4 2 . 4 6 1 1 . 3 0 9 1 . 3 2 0 1 . 3 3 2 1 . 4 8 3 1 . 4 9 0 1 . 4 8 8 1 . 3 3 4 1 . 4 0 3 1 . 3 7 0 2 . 9 0 3 2 . 9 9 0 2 . 9 4 5 1 . 3 5 6 ± 0 . 0 0 2 9 2 . 4 6 7 ± 0 . 0 1 5 0 1 . 3 2 0 ± 0 . 0 1 1 5 1 . 4 8 7 ± 0 . 0 0 3 8 1 . 3 6 9 ± 0 . 0 3 4 5 2 . 9 4 6 ± 0 . 0 4 3 6 R S D（%）0 . 2 2 0 . 6 1 0 . 8 7 0 . 2 5 2 . 5 2 1 . 4 8

表3 不同黃芩醇提液的總黃酮含量（±s，mg/g）

表3 不同黃芩醇提液的總黃酮含量（±s，mg/g）

醇沉濃度（%）3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0平均含量第一次 第二次 第三次測得值（m g / g）7 6 . 0 3 3 1 0 1 . 8 4 1 7 4 . 0 6 4 9 7 . 6 2 2 1 0 1 . 7 3 8 1 0 5 . 1 3 4 7 7 . 2 2 8 1 0 1 . 6 3 5 7 4 . 7 6 7 9 7 . 5 1 9 1 0 1 . 1 2 0 1 0 1 . 7 3 8 7 6 . 8 3 3 1 0 5 . 6 4 9 7 4 . 7 7 5 9 8 . 1 3 6 1 0 1 . 9 4 4 1 0 2 . 5 6 1 7 6 . 6 9 8 ± 0 . 6 0 8 9 1 0 3 . 0 4 2 ± 2 . 2 6 0 1 7 4 . 5 3 5 ± 0 . 4 0 8 3 9 7 . 7 5 9 ± 0 . 3 3 0 8 1 0 1 . 6 0 1 ± 0 . 4 2 8 5 1 0 3 . 1 4 4 ± 1 . 7 7 1 5 R S D（%）0 . 7 9 2 . 1 9 0 . 5 5 0 . 3 3 0 . 4 2 1 . 7 2

表4 不同黃芩醇提液的HPLC峰總面積（±s）

表4 不同黃芩醇提液的HPLC峰總面積（±s）

醇沉濃度（%）平均峰總面積第一次 第二次 第三次測得值3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0 1 1 7 2 9 7 . 3 1 5 3 4 4 4 . 2 1 2 4 6 9 5 . 8 1 1 8 8 9 2 . 4 1 2 6 3 3 2 . 9 1 3 3 5 5 5 . 2 1 1 5 6 7 6 . 4 1 5 1 6 1 3 . 5 1 1 9 4 8 7 . 7 1 1 4 9 7 5 . 7 1 2 9 6 5 7 . 5 1 3 8 5 2 0 . 4 1 1 3 9 5 3 . 6 1 5 5 8 7 2 . 4 1 2 1 9 4 2 . 3 1 1 6 9 1 4 . 1 1 2 7 0 1 3 . 7 1 3 0 5 7 5 . 9 1 1 5 6 4 2 . 4 ± 1 6 7 2 . 1 1 5 3 6 4 3 . 4 ± 2 1 3 6 . 4 1 2 2 0 4 1 . 9 ± 2 6 0 5 . 5 1 1 6 9 2 7 . 4 ± 1 9 5 8 . 4 1 2 7 6 6 8 . 0 ± 1 7 5 6 . 2 1 3 4 2 1 7 . 2 ± 4 0 1 3 . 4 R S D（%）1 . 4 5 1 . 3 9 2 . 1 3 1 . 6 7 1 . 3 8 2 . 9 9

表5 不同黃芩醇提液≤1 000 Da提取物含量（±s，mg/g）

表5 不同黃芩醇提液≤1 000 Da提取物含量（±s，mg/g）

測得值（m g / g）醇沉濃度（%）平均含量第一次 第二次 第三次3 0 . 0 0 5 5 . 0 0 6 1 . 2 5 6 7 . 5 0 7 3 . 7 5 8 0 . 0 0 4 2 7 . 2 4 2 3 . 3 4 1 8 . 5 4 8 6 . 0 4 9 9 . 5 4 8 0 . 5 4 6 9 . 8 4 6 5 . 7 4 6 0 . 7 4 6 5 . 3 4 8 7 . 5 4 7 6 . 2 4 5 2 . 5 4 7 3 . 3 4 6 1 . 5 4 5 7 . 5 4 7 9 . 3 4 6 5 . 5 4 2 3 . 0 ± 4 . 3 4 3 4 8 8 . 7 ± 9 . 7 7 7 4 6 5 . 4 ± 4 . 5 9 0 4 7 6 . 3 ± 1 1 . 0 8 4 4 6 2 . 4 ± 1 0 . 4 4 9 4 6 7 . 4 ± 1 1 . 0 4 6 R S D（%）1 . 0 3 2 . 0 0 0 . 9 9 2 . 3 3 2 . 2 6 2 . 3 7

表6 各指標(biāo)成分的含量及標(biāo)準(zhǔn)化處理結(jié)果

3 結(jié)語

本實(shí)驗(yàn)以分子量≤1 000 Da提取物、黃芩苷、黃芩素、總黃酮、HPLC峰總面積為綜合評判指標(biāo)，進(jìn)行黃芩醇提濃度的優(yōu)選。綜合評價，80.00%的醇濃度提取綜合評判值最大，故醇提方法選擇乙醇的濃度為80.00%。

[1]國家藥典委員會.中國藥典（2010版）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

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G424.31

B

1671-1246（2015）06-0084-02