肺腺癌中肌肉細(xì)胞特異性泛素蛋白連接酶29、組織蛋白酶D和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的關(guān)系

王麗紅

(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北石家莊050030)

摘要〔〕目的檢測(cè)肺腺癌術(shù)后組織中肌肉細(xì)胞特異性泛素蛋白連接酶(TRIM)29蛋白(TRIM29)、組織蛋白酶(Cath)-D和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)特征。方法132例肺腺癌術(shù)后留取的蠟塊及臨床資料作為觀察組，以距腫物邊緣>5 cm，并經(jīng)病理醫(yī)師證實(shí)為正常的肺組織78例作為對(duì)照組。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)兩組中TRIM29、Cath-D和VEGF的表達(dá)。結(jié)果觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF的陽(yáng)性率與腫瘤的最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)和KI67的表達(dá)密切相關(guān)。觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF的表達(dá)均正相關(guān)。觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF高表達(dá)患者生存時(shí)間短。結(jié)論肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF高表達(dá)且具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。術(shù)后檢測(cè)TRIM29、Cath-D和VEGF高表達(dá)提示肺腺癌患者預(yù)后不良。

關(guān)鍵詞〔〕肺腺癌；TRIM29；組織蛋白酶(Cath)-D；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)；免疫組化

中圖分類號(hào)〔〕R73〔

第一作者：王麗紅(1979-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事肺循環(huán)研究。

肺腺癌常為周?chē)头伟?。病變發(fā)展中多種基因和蛋白出現(xiàn)變化，近年來(lái)學(xué)者關(guān)注肺腺癌的血管生成作用，并發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)高表達(dá)可以促進(jìn)肺腺癌間質(zhì)血管的新生〔1〕，此時(shí)腫瘤細(xì)胞中VEGF的表達(dá)升高，間質(zhì)中CD31、CD34和CD105陽(yáng)性的血管明顯增多〔2〕。學(xué)者們也發(fā)現(xiàn)，VEGF的作用不是單獨(dú)的，其他相關(guān)影響因素多，使其表達(dá)過(guò)程更復(fù)雜〔3〕。組織蛋白酶(Cath)-D是癌細(xì)胞合成的水解酶之一，是分子量為34 kD的糖蛋白，具有肽鏈內(nèi)切酶的活性，其不僅可以對(duì)血管生成有一定影響，還具有調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)降解等多種生物學(xué)功能〔4〕。肌肉細(xì)胞特異性泛素蛋白連接酶(TRIM)29蛋白是TRIM家族的重要成員，含有多個(gè)鋅指基序，其可能對(duì)轉(zhuǎn)錄調(diào)控和脈管的重建有一定作用〔5〕。本文關(guān)注肺腺癌術(shù)后組織中TRIM29、Cath-D和VEGF的表達(dá)。

1材料和方法

1.1臨床資料2009年1月至2011年4月我院行肺腺癌切除的術(shù)后組織及臨床資料作為觀察組，共132例，男70例，女62例；年齡53～85歲，平均69.6歲；納入均經(jīng)病理醫(yī)師再次確診，并符合WHO中關(guān)于肺腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)選取距腫物邊緣>5 cm的正常肺組織78例作為對(duì)照組，男40例，女38例；年齡54～81歲，平均69.0歲。兩組一般臨床資料無(wú)明顯差別，具有可比性。

1.2免疫組化檢測(cè)TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白的表達(dá)TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白的檢測(cè)均應(yīng)用免疫組化EnVision二步法染色。濃縮抗體均由北京中杉金橋公司代購(gòu)。正式應(yīng)用前均進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最理想的配比濃度。正式實(shí)驗(yàn)操作均由同一主管技師完成，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行，嚴(yán)格質(zhì)量控制，努力減少誤差。

1.3TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白檢測(cè)結(jié)果的判定方法TRIM29、Cath-D和VEGF均以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，每張切片選擇5個(gè)400倍的高倍視野(觀察組為腫瘤細(xì)胞密集區(qū)，對(duì)照組為上皮細(xì)胞分布區(qū))，分別計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞和總細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性率，取平均值。以陽(yáng)性細(xì)胞≥5%定為陽(yáng)性，以陽(yáng)性細(xì)胞<5%定為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析、生存分析。

2結(jié)果

2.1兩組TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.000 1)。見(jiàn)表1。

表1　兩組TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白

2.2TRIM29、Cath-D和VEGF在觀察組不同臨床特征中表達(dá)觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF表達(dá)與腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)和Ki67的表達(dá)密切相關(guān)。見(jiàn)表2。

2.3觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF表達(dá)相關(guān)性觀察組TRIM29和VEGF(r=0.46，P=0.021 4)、TRIM29和Cath-D(r=0.45，P=0.027 4)、Cath-D和VEGF(r=0.53，P=0.011 2)的表達(dá)均具有正相關(guān)性。

表2　TRIM29、Cath-D和VEGF陽(yáng)性表達(dá)在觀察組不同

2.4觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF表達(dá)的生存分析隨訪2～36(平均13.9)個(gè)月。肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF的表達(dá)均與患者預(yù)后相關(guān)(P<0.05)，即TRIM29、Cath-D和VEGF高表達(dá)患者的生存時(shí)間短，預(yù)后差。

3討論

研究顯示當(dāng)腫瘤增長(zhǎng)的速度超過(guò)其脈管系統(tǒng)的蔓延能力時(shí)，由缺氧誘導(dǎo)因子調(diào)控的VEGF高表達(dá)，加速腫瘤間質(zhì)中血管新生和成熟能力〔6〕。此時(shí)腫瘤細(xì)胞為了存活而更易于獲得侵襲轉(zhuǎn)移的潛能。Cath-D具有肽鏈內(nèi)切酶活性，可以調(diào)節(jié)VEGF的高表達(dá)，加速血管的生成。也有觀點(diǎn)認(rèn)為Cath-D活化后，可以活化尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)前體，從而引發(fā)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，使腫瘤的浸潤(rùn)和侵襲能力增強(qiáng)〔7，8〕。TRIM29定位在11q23，TRIM29包含保守結(jié)構(gòu)、環(huán)結(jié)構(gòu)、B1和B2箱型結(jié)構(gòu)，同時(shí)具有多種鋅指序列〔9，10〕。應(yīng)用酵母雙雜交分析技術(shù)觀察TRIM29的功能時(shí)發(fā)現(xiàn)其能與TIP60結(jié)合，此時(shí)TRIM29可以引起TIP60的下調(diào)，使p53中存在的K120位點(diǎn)乙酰化的數(shù)量明顯減少，引發(fā)由p53介導(dǎo)的細(xì)胞增殖〔11〕。Kanno等〔12〕觀察TRIM29在前列腺癌中的表達(dá)，認(rèn)為T(mén)RIM29還可以標(biāo)記基底細(xì)胞，并認(rèn)為其與34BE12有一致的表達(dá)，因此認(rèn)為其有助于判斷腫瘤的生物學(xué)性質(zhì)。TRIM29的作用可能是多元性的，其在不同腫瘤中表達(dá)的作用可能不盡相同〔13，14〕。

本研究中應(yīng)用的是較為成熟的免疫組化技術(shù)，其標(biāo)記部位準(zhǔn)確，客觀性強(qiáng)，判讀一致性高，說(shuō)服力強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF在腫瘤形成過(guò)程中起促進(jìn)作用，三者具有協(xié)同正向作用，共同促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。由于腫瘤的生長(zhǎng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)均為判斷腫瘤生物學(xué)行為和預(yù)后的重要指標(biāo)，因此三者高表達(dá)可能提示臨床中有不良的預(yù)后。TRIM29、Cath-D和VEGF高表達(dá)，類似癌基因的作用，其實(shí)質(zhì)是三種蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞間的物質(zhì)代謝，進(jìn)而使細(xì)胞間、基質(zhì)間的信息傳遞時(shí)出現(xiàn)失控性增生和分化成熟障礙，引起腫瘤的形成和進(jìn)展〔15～17〕。TRIM29可以促進(jìn)VEGF為代表的血管生成，促進(jìn)腫瘤血管的新生，Cath-D對(duì)VEGF也有明顯的調(diào)節(jié)作用，因此TRIM29/Cath-D對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的促進(jìn)作用也可能是以VEGF作為中介因子，調(diào)節(jié)三者的關(guān)系及協(xié)同作用。腫瘤細(xì)胞外(間質(zhì)成分中)也有少量TRIM29和Cath-D的表達(dá)，認(rèn)為此時(shí)TRIM29、Cath-D的作用為促進(jìn)腫瘤細(xì)胞與其鄰近的成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞耦合，使細(xì)胞間質(zhì)的環(huán)境發(fā)生變化，加速腫瘤進(jìn)展〔18，19〕，此時(shí)腫瘤細(xì)胞的侵襲及遷移能力均增強(qiáng)，浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移潛能高〔20〕。

總之，肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF高表達(dá)且具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。術(shù)后檢測(cè)TRIM29、Cath-D和VEGF高表達(dá)提示肺腺癌患者預(yù)后不良。

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〔2013-07-14修回〕

(編輯苑云杰)