羅啟慧，唐秀瑩，陳正禮，汪開毓，王承東，李德生，李才武

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大熊貓胃腸道神經(jīng)肽Y和長(zhǎng)型瘦素受體的表達(dá)

羅啟慧1，唐秀瑩1，陳正禮1，汪開毓1，王承東2，李德生2，李才武2

1 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院動(dòng)物疾病與人類健康中心四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 雅安 625014 2 中國保護(hù)大熊貓研究中心瀕危動(dòng)物遺傳與育種四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 雅安 625014

羅啟慧, 唐秀瑩, 陳正禮, 等. 大熊貓胃腸道神經(jīng)肽Y和長(zhǎng)型瘦素受體的表達(dá). 生物工程學(xué)報(bào), 2015, 31(8): 1175–1183.Luo QH, Tang XY, Chen ZL, et al. Expression of neuropeptide Y and long leptin receptor in gastrointestinal tract of giant panda. Chin J Biotech, 2015, 31(8): 1175–1183.

為了觀察神經(jīng)肽Y (NPY) 和瘦素長(zhǎng)型受體 (OB-Rb) 在大熊貓胃腸道的表達(dá)分布，并探討其功能。本實(shí)驗(yàn)選用中國保護(hù)大熊貓研究中心瀕危動(dòng)物繁殖與保護(hù)遺傳四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供的3例大熊貓胃腸組織樣品，采用HE和免疫組化SABC法進(jìn)行組織學(xué)、NPY及OB-Rb蛋白的表達(dá)研究。HE染色結(jié)果顯示3例大熊貓胃腸道組織學(xué)結(jié)構(gòu)完整，主要表現(xiàn)在單細(xì)胞和多細(xì)胞黏液腺豐富、小腸絨毛較長(zhǎng)，腸道黏膜肌層與肌肉層較厚等。免疫組化方法觀察到NPY和OB-Rb陽性產(chǎn)物廣泛分布于大熊貓的胃腸道中。NPY陽性神經(jīng)纖維呈串珠狀或點(diǎn)狀排列，主要位于黏膜下神經(jīng)叢和肌間神經(jīng)叢內(nèi)，前者陽性神經(jīng)纖維數(shù)量較多。NPY陽性細(xì)胞主要分布于黏膜層和腸腺，多呈橢圓形、多邊形等。OB-Rb陽性產(chǎn)物主要分布在黏膜層，且在固有層內(nèi)有大量陽性細(xì)胞分布。表明NPY和OB-Rb在大熊貓腸道中的廣泛表達(dá)，為研究NPY和OB-Rb影響腸道的生長(zhǎng)發(fā)育、消化吸收、免疫等多種功能奠定了基礎(chǔ)。

大熊貓，神經(jīng)肽Y，瘦素長(zhǎng)型受體，免疫組化，胃腸道

瘦素 (Leptin) 是由脂肪組織分泌的含167個(gè)氨基酸殘基的肽類，通過與其受體結(jié)合而發(fā)揮生理調(diào)控功能。根據(jù)胞內(nèi)片段氨基酸長(zhǎng)度及序列組成的差異，瘦素受體可分為長(zhǎng)型受體和短型受體。OB-Rb是唯一的長(zhǎng)型受體并被認(rèn)為是激活信號(hào)傳遞通路的主要功能性受體[1]。神經(jīng)肽Y (Neuropeptide Y，NPY) 由36個(gè)氨基酸組成，從分子結(jié)構(gòu)看，哺乳類的序列大體一致。Leptin和NPY因參與調(diào)節(jié)能量代謝、神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫反應(yīng)等功能而受到關(guān)注，且Leptin具有介導(dǎo)NPY功能的作用[2-3]。Leptin與其受體OB-Rb結(jié)合通過激活JAK/STAT、MAPK等信號(hào)通路調(diào)節(jié)下游因子 (包括NPY，POMC等) 的分泌與釋放[4-5]。資料顯示哺乳類[6-7]、兩棲類[8]、魚類[9-10]等的胃腸道上都有OB-Rb和NPY表達(dá)，但分布不同。NPY和OB-Rb在胃腸道的表達(dá)分布與胃腸道的消化吸收等功能密切相關(guān)[11-13]。有關(guān)大熊貓胃腸道NPY和OB-Rb的分布和形態(tài)特點(diǎn)未見報(bào)道。大熊貓因食性特殊，其胃腸道結(jié)構(gòu)理應(yīng)發(fā)生適應(yīng)性進(jìn)化，為探討大熊貓胃腸道NPY和OB-Rb表達(dá)分布情況，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用HE、免疫組織化學(xué)方法對(duì)NPY和OB-Rb在大熊貓胃腸道各段進(jìn)行研究，為大熊貓胃腸道內(nèi)分泌研究提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

大熊貓胃腸道組織由中國保護(hù)大熊貓研究中心瀕危動(dòng)物繁殖與保護(hù)遺傳四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，共3例。

1.2 HE染色和免疫組化檢測(cè)

1.2.1 樣品處理與切片

胃腸各段用 4%多聚甲醛磷酸緩沖液 (pH 7.4) 進(jìn)行固定。石蠟切片，片厚6 μm，切片3組：蘇木精-伊紅 (Hematoxylin-eosin，HE) 染色觀察組織學(xué)形態(tài)；免疫組化染色；免疫組化陰性對(duì)照。

1.2.2 NPY和OB-Rb免疫組化檢測(cè)

切片37 ℃烤片過夜，常規(guī)脫蠟至水，入3% H2O2中15 min 以除去內(nèi)源性過氧化物酶活性，蒸餾水洗5 min，重復(fù)3次。將切片浸入pH 9.0的Tris/EDTA中，煮沸修復(fù)15 min，自然冷卻至室溫。Tris-HCL緩沖鹽溶液 (TBS) 洗5 min，重復(fù)2次。5%封閉液，37 ℃，30 min。傾去多余液體不洗，分別滴加TBS稀釋后的一抗NPY (1∶800) (兔抗鼠NPY多克隆抗體，英國Abcam公司) 和OB-Rb (1∶200) (兔抗鼠OB-Rb多克隆抗體，北京博奧森公司)，4 ℃，孵育10 h，TBS洗5 min，重復(fù)3次。配制二抗 (1∶1 000) (山羊抗兔IgG H&L (HRP)，英國Abcam公司)，37 ℃，孵育1 h，TBS洗5 min，重復(fù)4次。配制SABC (1∶100)，37 ℃，孵育20 min，0.02% Tween 20 TBS洗 5 min，重復(fù)4次，TBS洗5 min，重復(fù)3次。新鮮配制3,3-二氨基聯(lián)苯胺 (Diaminobezibin，DAB) 顯色5?10 min，鏡下觀察顯色情況，脫水、透明、封片。

陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)用TBS代替一抗，其余步驟相同。

1.3 顯微拍照及圖像分析

2 結(jié)果與分析

2.1 大熊貓胃腸道組織學(xué)觀察

本實(shí)驗(yàn)HE染色觀察到大熊貓胃腸道組織學(xué)無病理性變化。胃腸道黏膜肌層和肌層均較厚，質(zhì)地致密，且胃腸各段的內(nèi)環(huán)肌層都厚于外縱層。整個(gè)胃腸道表現(xiàn)為單細(xì)胞和多細(xì)胞黏液腺非常豐富。小腸絨毛較長(zhǎng)，絨毛上杯狀細(xì)胞相當(dāng)豐富，過渡到結(jié)腸段絨毛消失，但杯狀細(xì)胞更加發(fā)達(dá)。

2.2 OB-Rb在胃腸道中的表達(dá)結(jié)果

2.2.1 OB-Rb在胃腸道中分布及形態(tài)特征

對(duì)大熊貓胃腸道OB-Rb進(jìn)行觀察，陽性物質(zhì)多表達(dá)于胞質(zhì)中，也有胞膜著色的細(xì)胞，視切面不同而異，核呈陰性。陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，僅見背景染色，未見陽性物質(zhì)。陽性細(xì)胞呈現(xiàn)為黃褐色，有卵圓形、多邊形等。胃腸道均有OB-Rb的表達(dá)，胃腺上有大量陽性細(xì)胞，胃底腺的陽性胞質(zhì)呈深淺不一的棕黃色，陽性細(xì)胞胞核呈橢圓形、多邊形、不規(guī)則形 (圖1A和1B)。從細(xì)胞形態(tài)和大小判斷，推測(cè)為壁細(xì)胞和主細(xì)胞。腸道外膜、部分黏膜下和肌間神經(jīng)叢上均有陽性表達(dá) (圖1C)，且腸黏膜神經(jīng)叢上也有OB-Rb的表達(dá)。腸道從外至內(nèi)的各層組織中以黏膜層中的固有層表達(dá)最為豐富 (圖1D?F)，在腸腺周圍環(huán)繞著較多陽性細(xì)胞 (圖1D)，從其形態(tài)結(jié)構(gòu)和分布疑似淋巴細(xì)胞樣陽性細(xì)胞。

圖1 大熊貓胃腸道OB-Rb的表達(dá) (SABC)

2.2.2 OB-Rb在胃腸道中分布比較

對(duì)大熊貓胃腸道5個(gè)部位OB-Rb陽性細(xì)胞表達(dá)總面積、平均光密度及平均灰度測(cè)量所得的數(shù)據(jù)用Duncan多重比較的方法進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見表1。可見胃腸各段OB-Rb陽性產(chǎn)物分布不同，呈現(xiàn)一定的規(guī)律：其中陽性表達(dá)總面積以胃、結(jié)腸較大，空腸表達(dá)量最低；結(jié)腸的平均光密度值高；平均灰度值則呈現(xiàn)相反的趨勢(shì)。

2.3 NPY在胃腸道中的表達(dá)結(jié)果

2.3.1 NPY在胃腸道中分布及形態(tài)特征

在整個(gè)胃腸道中，NPY陽性反應(yīng)的神經(jīng)纖維和神經(jīng)元細(xì)胞體呈棕褐色或棕黃色。陰性對(duì)照切片染色結(jié)果為未見陽性產(chǎn)物 (圖2A)。NPY神經(jīng)纖維遍布胃腸壁各層且分布不均。呈串珠狀或點(diǎn)狀排列，黏膜下神經(jīng)叢和肌間神經(jīng)叢內(nèi)均有分布，其中以前者分布居多 (圖2B)。在胃腸消化管的漿膜至黏膜下層，胃和十二直腸區(qū)域有粗大的NPY陽性神經(jīng)纖維，到腸道的回腸區(qū)NPY陽性神經(jīng)纖維開始變少。NPY陽性神經(jīng)纖維分布密度與神經(jīng)叢的分布可能直接相關(guān)，有小血管的地方幾乎都有NPY陽性神經(jīng)纖維的伴行 (圖2C)。

胃腸的NPY陽性神經(jīng)元胞體大小不等，形狀不一，呈卵圓形，不規(guī)則形或扁平形，胞質(zhì)呈棕褐色。在胃有腺部、回腸、結(jié)腸、直腸的黏膜層上分布有很多陽性NPY細(xì)胞體，尤以結(jié)腸區(qū)分布較多 (圖2D?F)。但胃、十二指腸和空腸分布神經(jīng)元胞體較少，陽性顯色也較淺。NPY陽性細(xì)胞體散在地分布在胃腸腺中，有的穿插于腸黏膜上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞之間。細(xì)胞形態(tài)多樣，多數(shù)具有胞質(zhì)突起，似開放型細(xì)胞。細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形、柱形、錐形等，細(xì)胞胞質(zhì)突起的形態(tài)也是多樣，有的陽性細(xì)胞具有細(xì)長(zhǎng)的胞突伸向腸腔(圖2G?H)。也有卵圓形或橢圓形的NPY陽性細(xì)胞，沒有胞質(zhì)突起，似封閉型細(xì)胞 (圖2I)。

2.3.2 NPY在胃腸道中分布比較

NPY陽性神經(jīng)纖維及細(xì)胞的分布密度在大鼠胃腸道各部位顯示不均勻的分布 (表2)，分別對(duì)表達(dá)總面積、平均光密度值及平均灰度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)胃與各腸段差異明顯 (<0.05)，而各腸段之間差異并不明顯。

表1 大熊貓胃腸道OB-Rb的分布

The difference between mean with different small letters within a row is significant (<0.05).

圖2 大熊貓胃腸道NPY的表達(dá)(SABC)

表2 大熊貓胃腸道NPY的分布

The difference between mean with different small letters within a row is significant (<0.05).

3 討論

大熊貓實(shí)為肉食動(dòng)物，有尖銳發(fā)達(dá)的犬齒、較短的腸道和肉食動(dòng)物的消化生理特點(diǎn)。但由于生存環(huán)境變化，食性和習(xí)性的改變，機(jī)體漸漸適應(yīng)了低營養(yǎng)、低消化率的竹類。對(duì)大熊貓消化系統(tǒng)及味覺基因的分析結(jié)果顯示，大熊貓本身沒有能夠消化竹子纖維的基因，消化竹纖維主要靠胃腸道細(xì)菌群；另外，大熊貓廢棄肉類食物主要原因?yàn)閁mami受體基因T1R1的失活，無法感知肉的鮮味[14-15]?；谕獠凯h(huán)境和大熊貓本身的進(jìn)化，大熊貓胃腸道的大體和顯微形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生了深刻的適應(yīng)性變化。本實(shí)驗(yàn)顯示大熊貓胃腸道組織學(xué)結(jié)構(gòu)正常，與王平等[16-17]的研究結(jié)果大致相同，主要表現(xiàn)在小腸絨毛較長(zhǎng)，腸道黏膜肌層與肌肉層較厚，單細(xì)胞和多細(xì)胞黏液腺豐富。這與大熊貓胃腸道的黏液豐富以及大熊貓?zhí)赜械呐硼がF(xiàn)象相適應(yīng)。另一方面也有助于大熊貓糞便的排出，支持大熊貓依靠快吃快拉來維持新陳代謝的平衡現(xiàn)象。

自O(shè)B-Rb和NPY被成功克隆以來，有關(guān)OB-Rb和NPY在各類動(dòng)物中樞和外周的分布研究國內(nèi)外已有較多報(bào)道，OB-Rb和NPY在中樞系統(tǒng)的共表達(dá)也有相關(guān)研究。研究發(fā)現(xiàn)，OB-Rb和NPY在不同種屬的表達(dá)部位和表達(dá)量并不一致。在對(duì)哺乳類和禽類的相關(guān)報(bào)道中，OB-Rb的分布研究較多的是在下丘腦，胃腸道組織中也有報(bào)道。如Jin等[18]用RT-PCR、原位雜交法和免疫組化法發(fā)現(xiàn)OB-Rb在大鼠垂體前葉、脈絡(luò)叢、大腦、下丘腦和腦膜等部位表達(dá)，且發(fā)現(xiàn)OB-Rb mRNA在微血管表達(dá)量較低，但在大腦的表達(dá)量是下丘腦的5倍。 Mix等[19]研究發(fā)現(xiàn)，在人的胃黏膜有瘦素受體的表達(dá)，并推測(cè)瘦素通過旁分泌或自分泌作用于胃上皮細(xì)胞。Sobhani等[13]通過免疫組化、RT-PCR和Western blotting分析發(fā)現(xiàn)瘦素的陽性細(xì)胞位于胃底腺下半部分，瘦素受體存在于胃體和胃竇細(xì)胞基底外側(cè)膜，認(rèn)為胃黏膜上皮細(xì)胞是瘦素的靶細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)在對(duì)大熊貓胃腸道OB-Rb 表達(dá)研究中發(fā)現(xiàn)，在胃組織中OB-Rb主要表達(dá)于胃腺及其周圍間質(zhì)組織，主要位于胃底腺的中下部，與上述研究結(jié)果基本一致。筆者分析認(rèn)為瘦素受體長(zhǎng)型陽性細(xì)胞主要位于胃底腺的主細(xì)胞和壁細(xì)胞，且多數(shù)為壁細(xì)胞，并且OB-Rb在胃中表達(dá)量較高，認(rèn)為OB-Rb與大熊貓胃的消化吸收功能密切相關(guān)。有研究表明大鼠、小鼠小腸瘦素受體長(zhǎng)型表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，見于絨毛、腸腺和腸基底膜[20]?，F(xiàn)有研究顯示在大鼠、小鼠和人體小腸的吸收細(xì)胞存在瘦素受體長(zhǎng)型，認(rèn)為瘦素具有調(diào)節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)吸收的生理作用。在對(duì)小鼠結(jié)腸炎模型上瘦素受體的表達(dá)研究中還發(fā)現(xiàn)瘦素受體的表達(dá)與T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)炎癥有關(guān)[21]。另外B淋巴細(xì)胞作為體液免疫應(yīng)答過程中的主要效應(yīng)細(xì)胞，其表面存在OB-Rb，作為T淋巴細(xì)胞兩大亞群的CD4+和CD8+ T淋巴細(xì)胞表面也具有OB-Rb[22]。同時(shí)，NK細(xì)胞也能調(diào)節(jié)OB-Rb的表達(dá)[23]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)OB-Rb表達(dá)于腸上皮細(xì)胞、腸腺細(xì)胞及部分淋巴細(xì)胞，再次為OB-Rb在腸道的表達(dá)提供了依據(jù)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)OB-Rb在結(jié)腸的表達(dá)總面積和平均光密度比其他部位高，平均灰度值達(dá)到最低。分析認(rèn)為這與大熊貓?zhí)厥獾氖承院湍c道結(jié)構(gòu)有關(guān)。大熊貓從食肉慢慢進(jìn)化為以食竹為主，其腸道主要以纖維素消化為主。加上大熊貓沒有盲腸，結(jié)腸部位不僅起著消化重吸收的作用，同時(shí)承擔(dān)著腸道免疫中最核心的部分。結(jié)合以往他人的研究與我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)OB-Rb可高表達(dá)于淋巴細(xì)胞，推測(cè)OB-Rb在結(jié)腸中起到了較強(qiáng)的免疫調(diào)控作用。

已發(fā)現(xiàn)NPY存在于大鼠、豚鼠、豬的胃腸道中，并稱NPY有控制非脈管平滑肌張力的作用[6]。神經(jīng)肽Y在人體的胃腸道的免疫反應(yīng)性的分布、定量及起源也有闡述[24]。已有研究稱神經(jīng)肽Y在腸道是一種節(jié)后交感神經(jīng)元分泌的神經(jīng)遞質(zhì)，且神經(jīng)肽Y可影響水的吸收和離子轉(zhuǎn)運(yùn)[25]。NPY對(duì)胃腸道的機(jī)械消化和化學(xué)消化均有影響，NPY調(diào)節(jié)胃腸道的功能源于它在胃腸道的表達(dá)分布。在對(duì)大熊貓胃腸道NPY表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，NPY神經(jīng)纖維遍布胃腸壁各層且分布不均，呈串珠狀或點(diǎn)狀排列，黏膜下神經(jīng)叢和肌間神經(jīng)叢內(nèi)均有分布，我們研究結(jié)果與人和大鼠空腸的NPY神經(jīng)纖維分布研究結(jié)果相似[26]。NPY陽性細(xì)胞體散在地分布于胃腸腺中，有的穿插于腸黏膜上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞之間。細(xì)胞形態(tài)多樣，多數(shù)具有胞質(zhì)突起，分為開放型和封閉型細(xì)胞，與魚類腸道NPY陽性細(xì)胞形態(tài)報(bào)道基本一致[9,27-28]。NPY在胃中表達(dá)量較腸道各段高，推測(cè)雖然NPY在胃腸各段消化功能均有調(diào)節(jié)作用，但對(duì)胃來說具有更強(qiáng)的調(diào)控能力，可能因?yàn)榇笮茇埑赃M(jìn)的竹類食物在胃內(nèi)并沒有充分的消化，那么就需要更強(qiáng)大的收縮力使胃內(nèi)容物排到口徑更小的腸道中去的緣故。

綜上，本研究豐富了大熊貓胃腸道的形態(tài)學(xué)資料，同時(shí)發(fā)現(xiàn)OB-Rb和NPY在大熊貓胃腸道中有表達(dá)，首次對(duì)它們?cè)诖笮茇埼改c道的分布位置及相對(duì)表達(dá)量作了分析。研究顯示大熊貓胃腸道OB-Rb和NPY分布類似于大多數(shù)哺乳動(dòng)物，但也有差異。OB-Rb分布廣泛，不僅表達(dá)于吸收細(xì)胞，且在各類免疫相關(guān)細(xì)胞也有豐富表達(dá)。關(guān)于NPY陽性物質(zhì)除了表達(dá)在神經(jīng)纖維外，在黏膜層發(fā)現(xiàn)大量陽性NPY細(xì)胞，并呈現(xiàn)多種形態(tài)。另發(fā)現(xiàn)大熊貓腸道NPY神經(jīng)纖維較少，推測(cè)這與大熊貓和其他動(dòng)物體內(nèi)神經(jīng)叢分布情況不同及大熊貓獨(dú)特的腸道結(jié)構(gòu)有關(guān)。OB-Rb和NPY在大熊貓胃腸道的豐富表達(dá)，提示OB-Rb和NPY參與大熊貓的生長(zhǎng)發(fā)育、消化吸收、免疫等多種功能，為大熊貓的內(nèi)分泌的形態(tài)學(xué)研究提供了依據(jù)，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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(本文責(zé)編 陳宏宇)

Expression of neuropeptide Y and long leptin receptor in gastrointestinal tract of giant panda

Qihui Luo1, Xiuying Tang1, Zhengli Chen1, Kaiyu Wang1, Chengdong Wang2, Desheng Li2, and Caiwu Li2

1 College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University/Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province, Ya’an 625014, Sichuan, China 2 Key Laboratory for Reproduction and Conservation Genetics of Endangered Wildlife of Sichuan Province, China Conservation and Research Center for the Giant Panda, Ya’an 625014,Sichuan, China

To study the expression and distribution ofneuropeptideY(NPY) andlongleptin receptor(OB-Rb)in the gastrointestinal tract of giant panda, samples of three animals were collected from the key laboratory for reproduction and conservation genetics of endangered wildlife of Sichuan province, China conservation and research center for the giant panda. Paraffin sectionsof giant pandagastrointestinaltissue sampleswere observed using hematoxylin-eosin staining(HE) andstrept actividin-biotin compleximmunohistochemical staining (IHC).Theresults show thatthe intestinal histology of three pandaswasnormaland no pathological changes, and there were richsingle-celland multi-cell mucous glands, long intestinal villi and thick muscularis mucosaandmusclelayer.Positive cells expressing NPY and OB-Rb were widely detected in the gastrointestinal tract by IHC methods. NPYpositive nerve fibersandneuronal cell were widelydistributed insubmucosal plexus and myenteric plexus, especially in the former. They were arranged beaded or point-like shape. NPY positive cellswere observed in the shape ofellipse and polygon andmainly located inthemucous layerand intestinal glands.OB-Rb positive cells were mainly distributedinthemucous layer and thelaminae propria, especially the latter.These results confirmed that NPY andOB-Rbare widely distributedinthegutofthegiant panda, which provide strongreference for the research between growthand development, digestion and absorption, andimmunefunction.

giant panda, neuropeptideY, longleptin receptor, immunohistochemistry, gastrointestinal tract

10.13345/j.cjb.140559

November 18, 2014; Accepted:January 4, 2015

Project ofChina Conservation and Research Center for the Giant Panda Club,Program for Changjiang Scholars and Innovative Research Team in University (No. IRT0848), Youth Innovation Research Team Foundation of Sichuan Province Science and Technology Bureau (No. 2013TD0015).

Zhengli Chen. Tel: +86-835-2885754; E-mail: chzhli75@163.com

中國保護(hù)大熊貓研究中心大熊貓俱樂部項(xiàng)目, 教育部“長(zhǎng)江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃”創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目 (No. IRT0848), 四川省青年科技創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目 (No. 2013TD0015) 資助。