腎細(xì)胞癌患者臨床病理特征與核糖體S6激酶4表達(dá)的相關(guān)性

孫玉朝王忠臣

(內(nèi)蒙古林業(yè)總醫(yī)院，內(nèi)蒙古牙克石022150)

摘要〔〕目的探討腎細(xì)胞癌患者核糖體S6激酶4(RSK4)的表達(dá)及其與腎細(xì)胞癌臨床病理特征的相關(guān)性。方法應(yīng)用免疫組化方法對(duì)50例腎細(xì)胞癌組織中RSK4的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并通過(guò)對(duì)患者隨訪，探討其與腎細(xì)胞癌臨床病理學(xué)參數(shù)及患者預(yù)后之間的關(guān)系。結(jié)果腎細(xì)胞癌患者中RSK4陽(yáng)性表達(dá)27例，且RSK4陽(yáng)性表達(dá)與Fuhrman分級(jí)、TNM分期、集合系統(tǒng)受累、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型等因素呈正相關(guān)；單因素分析顯示RSK4(P=0.001)、Fuhrman分級(jí)(P=0.001)、TNM分期(P=0.001)、集合系統(tǒng)是否受累(P=0.001)、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移與患者生存期長(zhǎng)短有關(guān)；患者性別(P=0.428)、年齡(P=0.060)、腫瘤直徑(P=0.621)、病理類型(P=0.335)與生存率無(wú)關(guān)；Cox回歸模型顯示，僅RSK4、Fuhrman分級(jí)、病理TNM分期、集合系統(tǒng)受累、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與腫瘤生存期相關(guān)。結(jié)論RSK4可以成為腎細(xì)胞癌的潛在的獨(dú)立預(yù)后因子之一。

關(guān)鍵詞〔〕腎細(xì)胞癌；核糖體S6激酶4；免疫組織化學(xué)

中圖分類號(hào)〔〕R737〔

第一作者：孫玉朝(1964-)，男，副教授，主任醫(yī)師，主要從事腎內(nèi)科疾病研究。

腎細(xì)胞癌臨床表現(xiàn)多變,容易誤診，治療仍以根治性手術(shù)為主，放、化療無(wú)效，免疫治療效果也不明確，迫切需要發(fā)現(xiàn)特異、敏感的早期診斷、鑒別診斷和預(yù)后評(píng)估的因子以及新的、有效的治療方法〔1〕。核糖體S6激酶(RSK)屬于蘇氨酸/絲氨酸激酶家族,是Raf-MEK-ERK級(jí)聯(lián)信號(hào)通路下游重要的一級(jí)效應(yīng)分子,通過(guò)磷酸化大量的細(xì)胞內(nèi)蛋白來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂、存活和分化等,迄今已發(fā)現(xiàn)此家族有4個(gè)成員RSK1、RSK2、RSK3和RSK4,在人體各種細(xì)胞及組織中的分布和作用不同,它們的異常表達(dá)可能會(huì)產(chǎn)生不同的病理改變〔2〕。關(guān)于RSK4蛋白的表達(dá)水平與腎細(xì)胞癌的臨床病理特征及預(yù)后的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文探討RSK4與腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及可能機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料選擇我院2002年10月至2010年1月收治入院的行腎細(xì)胞癌根治術(shù)的患者50例，術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)為腎細(xì)胞癌。所有患者術(shù)前均行相關(guān)影像檢查，術(shù)后病理資料完整，均未接受化療、放療、腎動(dòng)脈栓塞術(shù)及其他藥物治療，男32例，女18例，年齡34～76〔平均(56.29±3.9)〕歲，病理組織學(xué)分型：透明細(xì)胞癌(ccRCC)7例，嫌色細(xì)胞癌(CRCC)6例，乳頭狀細(xì)胞癌(PRCC)34例，混合細(xì)胞癌3例。參照2009年TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，pT1期9例，pT2期7例，pT3期13例，pT4期21例；Fuhrman分級(jí)Ⅰ、Ⅱ級(jí)21例，Ⅲ級(jí)12例、Ⅳ級(jí)17例；術(shù)后8例出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移部位為肺2例、肝臟1例、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例。

1.2檢測(cè)方法兔抗人RSK4單克隆抗體、二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒、HRP-DAB底物顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。選取腎細(xì)胞癌組織的石蠟切片，運(yùn)用免疫組化(二步法)方法進(jìn)行染色。一抗?jié)舛葹?∶100，具體操作均按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以DAB顯色，蘇木素復(fù)染，PBS置換一抗作空白對(duì)照，用已知陽(yáng)性標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定參照文獻(xiàn)〔1〕的方法，陽(yáng)性染色結(jié)果判定如下：要求細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，陽(yáng)性細(xì)胞定位好，以同一顯微鏡倍數(shù)(×40)觀察全片，選擇5個(gè)高倍(×400)視野，合并計(jì)算所分析的5個(gè)不同視野著色細(xì)胞百分率及胞膜、胞質(zhì)的著色程度。根據(jù)染色程度及染色細(xì)胞百分率進(jìn)行分析評(píng)定：基本不著色為0分，著色淡為1分，著色較深為2分；著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率：≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，≥51%為3分，以每張切片染色程度和染色細(xì)胞百分率得分相乘的積為最后得分。得0～1分者為陰性(-)，得2分者為弱陽(yáng)性(+)，得3～4分者為中等陽(yáng)性()，6分者判為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法分析。Cox回歸模型分析相關(guān)性，生存分析采用Kapalan-Meier法。

2結(jié)果

2.1臨床病理特征分析見(jiàn)表1。50例患者中RSK4陽(yáng)性表達(dá)27例，且RSK4陽(yáng)性表達(dá)與Fuhrman分級(jí)、病理TNM分期、

表150例患者的臨床病理資料分析(n)

臨床參數(shù)nRSK4+RSK4-P值年齡(歲)≥502716110.191<50231112性別男3215170.250女18126Fuhrman分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)2110110.001Ⅲ～Ⅳ級(jí)291712腫瘤直徑(cm)≥6.015870.641<6.0351916集合系統(tǒng)受累受累5320.02未受累452421病理TNM分期pT1～pT2165110.006pT3～pT4342212病理類型ccRCC7520.038PRCC341717CRCC633混合細(xì)胞癌321淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有8710.012無(wú)422022

集合系統(tǒng)受累、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型等因素呈正相關(guān)。

2.2單因素、多因素生存分析單因素分析顯示，顯示RSK4陽(yáng)性表達(dá)與Fuhrman分級(jí)(P=0.001)、TNM分期(P=0.001)、集合系統(tǒng)是否受累(P=0.001)、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移(P=0.001)與患者生存期有關(guān)；患者性別(P=0.428)、年齡(P=0.060)、腫瘤直徑(P=0.621)、病理類型(P=0.335)與生存率無(wú)關(guān)。Cox回歸模型顯示，僅RSK4陽(yáng)性表達(dá)、Fuhrman分級(jí)、病理TNM分期、集合系統(tǒng)受累、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與腫瘤生存期相關(guān)，見(jiàn)表2。

表250例患者術(shù)后單因素、多因素生存分析

臨床參數(shù)n中位生存時(shí)間(個(gè)月)P值單因素生存分析多因素生存分析RSK4+27340.0010.035-2375年齡(歲)≥5027740.060>0.05<502351性別男32600.428>0.05女1865Fuhrman分級(jí)Ⅰ級(jí)～Ⅱ級(jí)21820.0010.047Ⅲ級(jí)～Ⅳ級(jí)2944腫瘤直徑(cm)≥6.015590.621>0.05<6.03561集合系統(tǒng)受累受累580.0010.026未受累4571病理TNM分期pT1～pT216800.0010.069pT3～pT43424病理類型ccRCC7620.335>0.05PRCC3452CRCC679混合細(xì)胞癌316淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有8210.0010.031無(wú)4276

3討論

在腎臟實(shí)性腫瘤中超過(guò)80%成為腎細(xì)胞癌，而良性腫瘤則多為血管平滑肌脂肪瘤、嗜酸細(xì)胞瘤等〔3〕。ccRCC是腎細(xì)胞癌中最常見(jiàn)的病理類型，約占腎細(xì)胞癌的90%。其他腎癌病理類型還包括多房囊性腎細(xì)胞癌、PRCC、CRCC等〔4〕。腎癌早期無(wú)明顯癥狀，倘若患者出現(xiàn)腰痛、血尿、腹部腫塊時(shí)，往往提示病情已經(jīng)發(fā)展到晚期。絕大多數(shù)腎臟腫瘤可在體檢時(shí)通過(guò)B超等影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)。當(dāng)超聲檢查發(fā)現(xiàn)問(wèn)題時(shí)，可進(jìn)行增強(qiáng)CT檢查，進(jìn)一步明確腫瘤的性質(zhì)及分期，同時(shí)也能為手術(shù)治療提供必要的解剖細(xì)節(jié)。早期腎癌患者預(yù)后較好，術(shù)后5年生存率可達(dá)90%左右〔5〕。在治療上，由于腎癌對(duì)放化療不敏感，有效率低，一般不推薦患者做放化療。目前，外科手術(shù)是腎癌最主要的治療方式，也是唯一有可能使疾病得到根治的手段。早期的局限性腫瘤，根據(jù)腫瘤的大小、位置、生長(zhǎng)類型以及與腎臟大血管的關(guān)系，可以選擇腎根治性切除和保腎手術(shù)。對(duì)于早期腎癌，腹腔鏡微創(chuàng)手術(shù)在大城市三甲醫(yī)院已成主流，手術(shù)創(chuàng)傷小、恢復(fù)快〔6〕。如在泌尿外科，患者接受腹腔鏡腎切除手術(shù)后3～5 d即可出院。若無(wú)轉(zhuǎn)移，術(shù)后定期復(fù)查即可，一般不推薦再進(jìn)行其他治療。中期腎癌患者表現(xiàn)為腫瘤的局部進(jìn)展，腫瘤可侵犯腎盂、腎周脂肪甚至腎靜脈和下腔靜脈，此時(shí)也需要進(jìn)行手術(shù)治療。若瘤栓與腫瘤切除徹底，病人一般預(yù)后尚可，5年生存率約為40%〔7〕。部分病人在發(fā)現(xiàn)腎癌時(shí)就已經(jīng)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，這種情況下一般也需行減瘤性腎切除術(shù)，切除腫瘤再治療轉(zhuǎn)移灶比不切除腫瘤直接治療的效果要好。當(dāng)腎臟原發(fā)腫瘤切除后，極少數(shù)患者的轉(zhuǎn)移病灶會(huì)出現(xiàn)自發(fā)性消退。

腎癌發(fā)病原因比較復(fù)雜，與遺傳和環(huán)境因素相關(guān)，已經(jīng)確定的危險(xiǎn)因素包括吸煙、高血壓和肥胖〔8〕。由于腎癌發(fā)病的隱匿性，早發(fā)現(xiàn)十分重要。因此尋找高效、低毒的小分子抗癌藥物一直是當(dāng)今癌癥治療領(lǐng)域的難點(diǎn)和熱點(diǎn)之一。 絲氨酸、蘇氨酸以及酪氨酸殘基的磷酸化過(guò)程是真核生物細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)以及進(jìn)行正常的細(xì)胞周期調(diào)控的最主要的機(jī)制。Ras-MAPK激酶通路對(duì)調(diào)控細(xì)胞正常分裂、生存、生長(zhǎng)以及分化過(guò)程起著極為重要的作用，該通路中許多激酶蛋白的突變或者過(guò)表達(dá)往往會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的生成。RSK家族處于Ras-MAPK通路的下游。RSK激酶蛋白特異性的磷酸化胞內(nèi)及核內(nèi)許多細(xì)胞周期相關(guān)的下游蛋白，從而起到調(diào)控細(xì)胞生命周期的功能〔9〕。RSK激酶結(jié)構(gòu)域內(nèi)外的幾個(gè)位點(diǎn)包括Ser380、Thr359、Ser363和Thr573的磷酸化都對(duì)RSK的激酶活性激活非常重要。RSK1～3可以被MAPKs磷酸化激活，也可以通過(guò)自身磷酸化激活，還可以被一些生長(zhǎng)因子或神經(jīng)遞質(zhì)等誘導(dǎo)激活的PI3K信號(hào)通路所激活。RSK在被MAPK磷酸化激活時(shí)，是由Ras、Raf-1、MAP kinase kinase(MEK)和MAP kinase信號(hào)通路所介導(dǎo)。PI3K誘導(dǎo)的RSK1激活是由絲氨酸/蘇氨酸激酶mTOR介導(dǎo)的。RSK1在葡萄糖穩(wěn)態(tài)調(diào)控和細(xì)胞大小的調(diào)控中起重要作用。RSK可以磷酸化并調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子c-fos和糖原合成酶激酶3(GSK3)的活性。有報(bào)道RSK1可以和MAPK1、IκBα、TOB和TSC2等相互作用〔9～11〕。RSK可以在有絲分裂信號(hào)刺激下會(huì)轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核內(nèi)。RSK2可以特異性地磷酸化底物蛋白上面的蘇氨酸和絲氨酸殘基，其很多底物蛋白本身就是被集中研究的癌癥治療靶點(diǎn)。RSK2亞型被證實(shí)在人類乳腺癌和前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)量明顯增長(zhǎng)，另外RSK2在骨髓瘤細(xì)胞的造血轉(zhuǎn)移過(guò)程中也起著關(guān)鍵作用〔12～14〕。本研究提示RSK4有助于不同類型腎癌的鑒別診斷及其可以成為腎細(xì)胞癌的潛在的獨(dú)立預(yù)后因子之一。

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〔2013-05-15修回〕

(編輯曹夢(mèng)園)