鈕小松

南京圣和藥業(yè)股份有限公司，江蘇南京210018

五子益腎膠囊中枸杞子、牡丹皮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

鈕小松

南京圣和藥業(yè)股份有限公司，江蘇南京210018

目的建立五子益腎膠囊中枸杞子和牡丹皮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法（TLC)，分別對(duì)枸杞子和牡丹皮以及其主要有效成分進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果兩種藥材的色譜斑點(diǎn)清晰可辨，分離度良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論所采用標(biāo)準(zhǔn)為五子益腎膠囊中枸杞子和牡丹皮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)的依據(jù)。

枸杞子；牡丹皮；薄層色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

五子益腎膠囊是由五味子、枸杞子、菟絲子、車(chē)前子以及牡丹皮的十多味中草藥提煉而成的具有補(bǔ)腎益精之功效的中成藥，其主要用于治療腎虧引起的陽(yáng)痿早泄等癥狀，同時(shí)具有補(bǔ)肝益氣、填精益髓的等作用[1]。本次研究采用TLC法對(duì)其所用的枸杞子和牡丹皮及其有效成分進(jìn)行定性鑒別，為確定該中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠依據(jù)。

1 儀器與試藥

日本島津CS-9000薄層掃描儀；干燥箱；粉碎機(jī)；電子天平；10×10(cm)硅膠吸附劑薄層板；60目篩子；實(shí)驗(yàn)室器皿（燒杯、量杯、燒瓶等）；牡丹皮對(duì)照品、枸杞子對(duì)照品、甜菜堿對(duì)照品、丹皮酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；五子益腎膠囊由（南京市中醫(yī)院自制）提供，本次研究所用試劑均為分析純，水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 枸杞子的TLC鑒別

2.1.1 供試品溶液制備精確稱(chēng)取枸杞子粉末3 g，加入去離子水30mL溶解煮沸，然后過(guò)濾，用三氯甲烷萃取，將所得蒸后的殘?jiān)尤爰状?mL溶解，作為供試品溶液備用。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備精確稱(chēng)取對(duì)照樣品枸杞子3 g，同法制成對(duì)照品溶液。

2.1.3 陰性供試品溶液制備按照配方比例，稱(chēng)取五子益腎膠囊中除枸杞子外其他各味中藥，按照制備方法進(jìn)行加工，將其按照供試品溶液制備方法進(jìn)行處理，制成陰性供試品溶液。

2.1.4 樣品鑒別層析法：照薄層色譜法（參照《中國(guó)藥典》2005年版第一部附錄VIB）試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液5μL，分別滴于同一塊以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，其展開(kāi)劑選用乙酸乙酯—三氯甲烷—甲酸（3:2:1），進(jìn)行展開(kāi)、取出、晾干后置于紫外線燈光下（365 nm）檢測(cè)。

2.1.5 檢測(cè)結(jié)果通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，供試品色譜與對(duì)照色譜在相應(yīng)的位置上，呈現(xiàn)相同顏色的熒光斑點(diǎn)，其陰性對(duì)照樣品則無(wú)相應(yīng)的對(duì)照斑點(diǎn)。

2.2 枸杞子有效成分甜菜堿的TLC鑒別

2.2.1 供試品制備精確稱(chēng)取枸杞子粉末2 g加入甲醇溶液50mL置水浴鍋中加熱50min后冷卻，稱(chēng)定重量后利用甲醇補(bǔ)充失去的分量，充分搖勻，精密抽取過(guò)濾液10mL，過(guò)100-200目、內(nèi)徑1cm、經(jīng)無(wú)水乙醇10mL預(yù)先清洗過(guò)的堿性氧化鋁柱，然后用無(wú)水乙醇80mL洗脫。將洗脫液與原液融合蒸發(fā)烘干后，加水稀釋至5mL，搖勻過(guò)濾，作為供試品溶液

2.2.2 對(duì)照品溶液制備取甜菜堿樣品適量，加入0.5%的鹽酸甲醇溶液，制成1:250倍的對(duì)照品溶液備用。

2.2.3 樣品鑒別薄層色譜法：分別吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液5μL和3μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄板上，以丙酮-無(wú)水乙醇-鹽酸（10:6:1）作為展開(kāi)劑，展開(kāi)取出晾干后，放置于60℃烘干箱內(nèi)加熱40min取出后立即噴灑碘化鉍鉀溶液，進(jìn)行掃描[2]。

2.2.4 檢測(cè)結(jié)果通過(guò)薄層掃描色譜法，可以準(zhǔn)確檢測(cè)出枸杞子中有效成分甜菜堿的含量，并且斑點(diǎn)顯現(xiàn)效果良好。

2.2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)吸取供試品溶液10μl，分別在配置0、2、4、8、16、24 h時(shí)，按照薄層色譜法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果證明樣品的穩(wěn)定性基本良好(見(jiàn)表1)。

表1 甜菜堿穩(wěn)定性

2.2.6 甜菜堿重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精確抽取同一批次枸杞子粉末樣品4份，按照含量測(cè)定的方法，進(jìn)行提取并測(cè)定，其RSD值均小于2%（見(jiàn)表2）。

表2 甜菜堿重復(fù)性實(shí)驗(yàn)(mg/mL)

2.2.7 甜菜堿準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)利用甜菜堿回收率試驗(yàn)，可以有效驗(yàn)證甜菜堿TLC測(cè)定的準(zhǔn)確率。精確稱(chēng)取甜菜堿并配置甜菜堿溶液（8.109mg·mL-1)，同時(shí)吸取對(duì)照品溶液1mL，同時(shí)加入容器內(nèi)，蒸發(fā)干燥再次精確稱(chēng)取枸杞子粉末1 g后，放入容器內(nèi)，并且平行制備3份待用；精確吸取對(duì)照品溶液2mL，加入容器內(nèi)，再稱(chēng)取枸杞子粉末1 g加入，并且平行制備3份待用；精確吸取對(duì)照品溶液4mL加入容器中，烘干后，加入精確稱(chēng)取的枸杞子粉末2 g，并且平行制備3份；根據(jù)甜菜堿含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明甜菜堿TLC測(cè)定法具有良好的準(zhǔn)確性（見(jiàn)表3）。

表3 甜菜堿回收率試驗(yàn)（mg)

2.3 牡丹皮的TLC鑒別

2.3.1 制備供試品精確稱(chēng)取牡丹皮粉末1 g，加入10mL乙醚，做超聲處理10min后，抽取過(guò)濾，殘?jiān)靡颐严礈旌?，將濾液與洗滌液混合靜置，待乙醚揮發(fā)后，加入丙酮定容，制成供試品溶液。

2.3.2 制備對(duì)照品溶液精確稱(chēng)取牡丹皮對(duì)照樣品粉末1 g，按照供試品制備的步驟，進(jìn)行處理，制成對(duì)照品溶液。

2.3.2 制備陰性對(duì)照溶液按照五子益腎膠囊的配方比例，稱(chēng)取除牡丹皮外其他中藥成分，按照制備方法制備后，將其按照供試品溶液制備方法進(jìn)行處理，制成陰性供試品溶液

2.3.3 樣品鑒別分別取供試品和對(duì)照溶液各1μL滴于同一硅膠G薄層板上，將點(diǎn)樣板于干燥處放置10min后，放入已經(jīng)添加展開(kāi)劑的展開(kāi)缸中飽和，飽和10min后，放入以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2)為展開(kāi)劑的容器中展開(kāi)，取出晾干后，噴灑5%香草醛硫酸溶液，烘干至105℃至斑點(diǎn)顯現(xiàn)清晰。

2.3.4 檢測(cè)結(jié)果對(duì)比兩組色譜斑點(diǎn)顯現(xiàn)形態(tài)、位置基本相同，同時(shí)進(jìn)行陰性對(duì)照顯示無(wú)干擾。

2.4 牡丹皮有效成分丹皮酚的TLC鑒別

2.4.1 制備供試品精確稱(chēng)取牡丹皮粉末1 g，加入10mL乙醚，震蕩處理10min后，抽取過(guò)濾，殘?jiān)靡颐严礈旌?，將濾液與洗滌液混合靜置，待乙醚揮發(fā)后，加入丙酮定容，制成供試品溶液[3]。

2.4.2 制備對(duì)照品精確稱(chēng)取丹皮酚對(duì)照品樣品，按照1: 500的比例加入丙酮溶液，制成對(duì)照品溶液。

2.4.3 樣品鑒別分別吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液5μL滴于同一硅膠G薄層板上，然后以環(huán)己烷-乙酸乙酯(3:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)取出晾干后，噴灑鹽酸酸性為5%的三氯化鐵乙醇溶液，在烘干爐內(nèi)加熱至斑點(diǎn)顯現(xiàn)。

2.4.4 檢測(cè)結(jié)果通過(guò)對(duì)比可以發(fā)現(xiàn)，兩組色譜斑點(diǎn)顯現(xiàn)的形態(tài)、位置基本相同。

3 討論

枸杞子的主要化學(xué)成分為甜菜堿、多糖、有機(jī)酸、黃酮、胡蘿卜素[4-5]等。

本次研究提取條件與薄層鑒別參照《中國(guó)藥典》2005年第一版枸杞子項(xiàng)目下的TLC鑒別方法，本次研究提取條件采用三氯甲烷萃取，通過(guò)乙酸乙酯—三氯甲烷—甲酸（3:2:1）和丙酮-無(wú)水乙醇-鹽酸（10:6:1）分別作為展開(kāi)劑，對(duì)枸杞子以及其有效成分甜菜堿進(jìn)行研究，研究結(jié)果表明其斑點(diǎn)分離理想，同時(shí)通過(guò)與對(duì)照藥材圖譜對(duì)比發(fā)現(xiàn)，兩者對(duì)應(yīng)性良好，適宜作為枸杞的質(zhì)量鑒定標(biāo)準(zhǔn)方法。

牡丹皮主要有效成分為丹皮酚以及芍藥苷，本次研究參考《中國(guó)藥典》2005年第一版白芍鑒別項(xiàng)目下的鑒別方法，對(duì)研究結(jié)果進(jìn)行鑒別，結(jié)果表明，本次研究所用實(shí)驗(yàn)樣品色譜與對(duì)照藥材的色譜對(duì)應(yīng)性良好，并且其陰性對(duì)照無(wú)干擾，證明此方法可作為牡丹皮的質(zhì)量鑒別方法。

4 結(jié)語(yǔ)

本次通過(guò)薄層色譜法對(duì)五子益腎膠囊中枸杞子和牡丹皮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，通過(guò)有效的理論依據(jù)，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的確定提供了可靠的參考依據(jù)。

[1]梁學(xué)政,唐勇琛,陳惠紅,等.五子補(bǔ)腎膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].中國(guó)藥師，2013,16(9):1322-1325.

[2]徐秀珍,齊喜紅.薄層掃描法測(cè)定枸杞子中甜菜堿的含量[J].中成藥，2005,27(8):941-943.

[3]肖霞,曹俊凱.牡丹皮中丹皮酚的薄層層析鑒別[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2014,9(26):256-257.

[4]李磊,吳啟勛.不同產(chǎn)地枸杞子質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)[J].青海師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2007(4).

[5]李瑞萍.補(bǔ)腎丸中枸杞子與關(guān)黃柏的TLC鑒別研究[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2010(3).

Aterials,Good Separating Degree,Negative Control Without Interference; CoAbital Wolfberry Fruit and Cortex Moutan in Kidney Capsule Quality Standard Research

NIU Xia-song
Nanjing saint and pharmaceutical limited by ltd,Jiangsu Nanjing 210018 China

Objective To establish a child benefit of wolfberry fruit and cortex moutan in renal capsule quality standard. Methods Thin layer chromatography(TLC),respectively,of wolfberry fruit and cortex moutan and its main effective component qualitative identification.Results The chromatographic spots were clear two kinds of medicinal.Conclusion The standard is used by abital benefit of wolfberry fruit and cortex moutan in renal capsule quality standard provides a scientific basis.

Wolfberry fruit;Cortex moutan;Thin layer chromatography(TLC);Quality standard

R2

A

1672-5654（2015）05（c）-0070-03

2015-03-02）

鈕小松（1984.8-），男，江蘇南京人，碩士，工程師，南京圣和藥業(yè)有限公司，從事新藥研發(fā)與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作。